------支原體檢測(cè)、預(yù)防、去除，一步到位！

支原體   

支原體（Mycoplasma）又稱霉形體，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的原核生物，直徑大小0.1~0.3μm，能通過(guò)濾膜且呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分支狀等多種形態(tài)。實(shí)驗(yàn)室和生物制品工廠在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中易受到支原體污染，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：支原體污染在儲(chǔ)存細(xì)胞系中發(fā)生率約為 15%-35%，在生物制藥行業(yè)中約為0.44%-6.70% ^[1]。

圖1：支原體的形態(tài)

支原體污染的影響

細(xì)菌和真菌污染相對(duì)較容易檢測(cè)、預(yù)防和去除，但支原體造成的污染卻很難察覺(jué)，即使生長(zhǎng)密度高達(dá) 10⁷-10⁹CFU/ml，也很難有污染跡象（比如溶液渾濁、pH變化等）。支原體污染后能導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生多種變化（見(jiàn)圖2）。

圖2：受支原體污染后細(xì)胞出現(xiàn)的相關(guān)狀態(tài)的改變

支原體污染解決方案——Yeasen三位一體幫您解決細(xì)胞支原體污染問(wèn)題

翌圣生物（YEASEN）經(jīng)過(guò)匠心開(kāi)發(fā)并多次的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，推出了清除支原體的試劑，包括：支原體檢測(cè)系列、支原體清除（培養(yǎng)箱、水浴鍋、超凈臺(tái)和細(xì)胞房）和支原體預(yù)防相關(guān)等。

圖3：yeasen支原體污染整體解決方案

一步法恒溫支原體檢測(cè)：

Yeasen一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，無(wú)需特殊儀器，1h就可以通過(guò)顏色判定檢測(cè)結(jié)果。檢測(cè)靈敏度是普通恒溫檢測(cè)的1000倍并添加了防污染組分，杜絕假陽(yáng)性現(xiàn)象的發(fā)生。

圖4：一步法支原體檢測(cè)操作流程

PCR法支原體檢測(cè)：

Yeasen巢式PCR支原體檢測(cè)不同于普通的PCR檢測(cè)方法，將原有的1對(duì)引物提高至3對(duì)引物，針對(duì)支原體16s和23s保守區(qū)進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)了準(zhǔn)確度和靈敏度的雙重突破。

圖5: PCR法擴(kuò)增含不同濃度支原體樣品獲得的凝膠電泳圖

qPCR法支原體檢測(cè)：

Yeasen的qPCR支原體檢測(cè)試劑盒（探針?lè)ǎ┦腔?/span>EP藥典推薦NAT法推出超簡(jiǎn)便快捷檢測(cè)方法，克服了普通PCR靈敏度低和培養(yǎng)法耗時(shí)久的問(wèn)題，將結(jié)果精準(zhǔn)度和使用便捷度有了質(zhì)的提升！3h內(nèi)可快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)支原體存無(wú)，優(yōu)于培養(yǎng)法的28天耗時(shí)檢測(cè)過(guò)程。

圖6: qPCR法測(cè)試流程

產(chǎn)品數(shù)據(jù)

靈敏度和擴(kuò)增效率測(cè)試

10 CFU/mL口腔支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果          

               
10 CFU/mL肺炎支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果

10 CFU/mL豬鼻支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果                        


10 CFU/mL精氨酸支原體標(biāo)準(zhǔn)品檢出結(jié)果

 試劑盒擴(kuò)增效率：101-108 copies/uL               
 

擴(kuò)增效率≥96%，標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.996      
                      

不同檢測(cè)方法對(duì)比

翌圣MycAway^TM 支原體去除試劑（1000×）是一種混合制劑，可通過(guò)抑制支原體生長(zhǎng)所必須的相關(guān)蛋白合成來(lái)達(dá)到支原體清除效果且對(duì)細(xì)胞無(wú)傷害，挽救您的細(xì)胞，減少因支原體污染帶來(lái)的損失。

圖6：細(xì)胞去除效果的展示

支原體去除試劑的特點(diǎn)：

毒性低：對(duì)細(xì)胞毒性小，不影響后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，如細(xì)胞活力檢測(cè)和細(xì)胞轉(zhuǎn)染等；

穩(wěn)定性強(qiáng)：-20℃試劑能較長(zhǎng)時(shí)間保存并保持高效能；

操作簡(jiǎn)單：只需將產(chǎn)品添加至支原體污染的培養(yǎng)基中孵育即可；

起效快：快3天即可見(jiàn)效；

去除范圍廣：能去除實(shí)驗(yàn)室絕大多數(shù)支原體類型。

圖7：支原體去除試劑細(xì)胞毒性檢測(cè)圖示

提前做好支原體預(yù)防工作是降低支原體感染幾率的*的方法，yeasen開(kāi)發(fā)的支原體預(yù)防系列產(chǎn)品，具有操作簡(jiǎn)單、方便、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。

TIPS

1）源頭預(yù)防

對(duì)于新引進(jìn)或者原代分離的細(xì)胞，需要進(jìn)行支原體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果為陰性才可進(jìn)入無(wú)菌室培養(yǎng)

2）實(shí)驗(yàn)操作流程規(guī)范

穿戴細(xì)胞房專用實(shí)驗(yàn)服并及時(shí)處理廢棄物

3）污染物的處理

一旦發(fā)現(xiàn)已經(jīng)污染支原體的細(xì)胞，滅活后棄之并更換新的細(xì)胞，避免支原體大規(guī)模散播。

4）無(wú)菌室的維護(hù)

無(wú)菌室應(yīng)每周做一次消毒，用0.1%新潔爾滅擦拭操作臺(tái)及可能污染的死角，開(kāi)啟無(wú)菌空氣過(guò)濾器及紫外燈殺菌半小時(shí)。每月做一次全面清潔工作，先用去污染劑洗刷地面，再用含1%新潔爾滅的清水清洗地面，最后再滅菌30min。

文獻(xiàn)引用

[1] Fratz-Berilla EJ, Angart P, Graham RJ, et al. Impacts on product quality attributes of monoclonal antibodies produced in CHO cell bioreactor cultures during intentional mycoplasma coNATmination events. Biotechnol Bioeng. 2020;117(9):2802-2815.