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Exonuclease I：特異性去除單鏈DNA，PCR引物去除的選擇
核酸外切酶I（Exonuclease I）是一種對(duì)變性或單鏈脫氧核糖核酸具有高度選擇性的核酸外切酶，作用時(shí)，Exonuclease I從單鏈聚脫氧核糖核苷酸的3 羥基端開(kāi)始攻擊，隨后逐步釋放出脫氧核糖核苷5 ' -單磷酸鹽，但末端二核苷酸會(huì)保持完整，對(duì)雙鏈DNA或RNA無(wú)活性。常用于在Sanger測(cè)序或SNP分析之前去除PCR反應(yīng)中的單鏈引物、去除巢式PCR中的單鏈引物、PCR產(chǎn)物酶法純化、從核酸混合物中去除含有3'羥基末端的單鏈DNA等。
圖1. Exonuclease I降解單鏈DNA示意圖
翌圣的Exonuclease I（Cat#14535ES）由分子酶改造平臺(tái)——ZymeEditor™重組表達(dá)而來(lái)，可高效消化單鏈DNA，嚴(yán)格質(zhì)控，無(wú)核酸外切酶（雙鏈）、核酸內(nèi)切酶、RNase殘留，80℃處理即可失活，適用于各種PCR反應(yīng)后引物的去除及從核酸混合物中去除含有3'羥基末端的單鏈DNA。
20 μL反應(yīng)體系中加入終濃度為15 pmol/μL的單鏈DNA底物，分別使用不同投入量（0.63、1.25、2.5、5、10、20 U）的翌圣及進(jìn)口品牌N*的Exonuclease I在37℃下孵育15 min，80℃熱失活15 min，聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)單鏈DNA降解情況。結(jié)果顯示翌圣的Exonuclease I消化單鏈DNA的能力與進(jìn)口品牌N*一致。
圖2. 翌圣及進(jìn)口品牌N*對(duì)單鏈DNA的消化能力
將500 ng底物DNA與100 U的Exonuclease I在37℃下孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA條帶不發(fā)生變化，表明Exonuclease I無(wú)核酸內(nèi)切酶殘留。
圖3. 核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)
將底物RNA與20 U的Exonuclease I在37℃下孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA條帶不發(fā)生變化，表明Exonuclease I無(wú)RNase殘留。
圖4. RNase殘留檢測(cè)
定位 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
PCR產(chǎn)物純化（核酸外切酶I+堿性磷酸酶）
| Exonuclease I (20 U/μL) | 14535ES |
Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) | 10322ES | |
高保真PCR預(yù)混液 | 2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye) | 10164ES |
瓊脂糖 | Agarose | 10208ES |
核酸染料 | YeaRed Nucleic Acid Gel Stain(10,000× in Water) | 10202ES |
DNA Marker | GoldBand系列marker | 10501ES-10518ES |
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