CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是一種新的DNA-蛋白質(zhì)互作研究方法，該技術(shù)涉及的核心酶原料是pG-Tn5或pA-Tn5(pA-Tn5 Transposase)。Protein A(pA)與pG的作用類似，特異性結(jié)合抗體，從而使得pA-Tn5具備更高的靶向性。Protein A 和 Protein G與不同種類和免疫原性的抗體的親和力具有較大區(qū)別[1]，因此pA和pG可以靶向結(jié)合不同抗體。

與傳統(tǒng)的ChIP-Seq相比，CUT&Tag不需要使用甲醛交聯(lián)以及免疫共沉淀，而是通過針對靶蛋白（如轉(zhuǎn)錄因子、染色質(zhì)重塑蛋白）的抗體和Protein G/A的介導(dǎo)，使得與Protein G/A融合的Tn5酶在切割DNA片段的同時在序列兩端加上測序接頭，經(jīng)PCR擴(kuò)增后即可形成用于高通量測序的文庫（圖1）。CUT &Tag技術(shù)具有細(xì)胞投入量低、信噪比高、實驗周期短（1天實現(xiàn)文庫構(gòu)建）、可重復(fù)性好等顯著優(yōu)勢，可應(yīng)用于蛋白質(zhì)與DNA互作研究、檢測組蛋白修飾在基因組上分布位點、鑒定轉(zhuǎn)錄因子在全基因組上的結(jié)合位點、超級增強(qiáng)子鑒定等。

圖1. CUT &Tag技術(shù)原理圖[2]

由于CUT&Tag主要是針對極低細(xì)胞起始量進(jìn)行實驗，這就要求核心酶原料具有高切割活性、對微量DNA有高靈敏度和高親和力以及超低污染性。翌圣ZymeEditor™酶改造平臺將改造的具有超高活性的Tn5轉(zhuǎn)座酶突變體與Protein G融合，從而獲得能精準(zhǔn)、高效切割目的蛋白附近DNA序列的pG-Tn5(Cat#14530ES)。翌圣pG-Tn5具有核酸酶殘留低、片段化能力強(qiáng)（切割活性）、建庫產(chǎn)量高等優(yōu)勢，可用于CUT&Tag實驗。

參考文獻(xiàn)

[1] Dancette OP, Taboureau JL, Tournier E, et al. Purification of immunoglobulins G by protein A/G affinity membrane chromatography. J Chromatogr B Biomed Sci Appl. 1999 Feb 19;723(1-2):61-8. doi: 10.1016/s0378-4347(98)00470-8. 

[2]  Kaya-Okur HS, Wu SJ, Codomo CA, et al. CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells. Nat Commun. 2019 Apr 29;10(1):1930. doi: 10.1038/s41467-019-09982-5.