化合物的熒光可以通過多種過程猝滅(即減少或完*消除),而不會破壞熒光團。熒光猝滅效應(yīng)導(dǎo)致熒光強度降低。一旦猝滅劑被移除或猝滅機制被“關(guān)閉”,原始的熒光強度就會重新出現(xiàn)。
猝滅效應(yīng)導(dǎo)致熒光分子的電子激發(fā)態(tài)在沒有輻射的情況下返回基態(tài),或者阻止實際激發(fā)到熒光態(tài)。
在實踐中,熒光猝滅在許多應(yīng)用中得到利用,因為它是一種易于觀察或測量的現(xiàn)象。因此,它是分子水平上發(fā)生的過程的指標。例如,分析物的存在或不存在會導(dǎo)致熒光團和猝滅劑之間的距離發(fā)生變化,從而導(dǎo)致熒光發(fā)生變化。除了熒光強度之外,壽命有時也可以用來衡量這種變化。
分子信標
包括所謂的“genepin”、“hairpin”或“分子信標”技術(shù)。例如,在這些“智能探針”中,熒光染料和熒光猝滅劑位于單鏈 DNA 的相對兩端。由于末端片段上有幾個互補堿基,雜交發(fā)生在那里,即產(chǎn)生了部分 DNA 雙鏈。DNA 的中間片段因此形成一個環(huán):所得結(jié)構(gòu)類似于發(fā)夾。標記物的熒光現(xiàn)在被猝滅劑的空間接近性猝滅,例如通過 FRET 機制。如果現(xiàn)在將與第一條鏈的堿基序列互補的DNA鏈添加到溶液中,則由于所有堿基更強的相互作用,這兩條鏈會雜交。染料和猝滅劑在空間上分離,導(dǎo)致熒光重新出現(xiàn)。您可以利用這一原理設(shè)計許多不同類型的實驗并得出有關(guān)分子過程的結(jié)論。
除了使用染料-猝滅劑對之外,還可以使用兩種熒光染料,其熒光行為如福斯特共振能量轉(zhuǎn)移中所述。
相關(guān)產(chǎn)品
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