重組腸激酶（rEK）是高純度的牛腸激酶輕鏈亞基，它有著和天然提取的腸激酶同樣特異的切割酶活性，切割位點(diǎn)Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標(biāo)簽，是N末端融合通常選擇的蛋白酶,在其他殘基的不規(guī)則切割發(fā)生水平較低。

翌圣的重組腸激酶（rEK）采用大腸桿菌重組表達(dá)，無(wú)外源性的病毒污染，生產(chǎn)過(guò)程不使用任何動(dòng)物源原料，純度高、活性高、特異性強(qiáng)、適用范圍廣，在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。本品不含標(biāo)簽，由于具有酶切活性，酶切反應(yīng)使用量少，不影響下游蛋白應(yīng)用，可不考慮去除。后續(xù)如需去除可用陰離子交換樹(shù)脂（如DEAE-6FF）對(duì)其進(jìn)行洗脫。推薦洗脫條件如下：平衡緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，洗脫緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl

凝血酶是由大小分別為31 KD和6 KD的兩條肽鏈通過(guò)二硫鍵組成的一種絲氨酸蛋白水解酶，可從動(dòng)物血漿中利用已激活凝血酶原水解制得；凝血酶切割序列專一，水解效率高，在分子生物學(xué)、生物化學(xué)或生物工程制藥研究中常作為工具酶用于重組融合蛋白（包含凝血酶識(shí)別位點(diǎn)）的特異性斷裂。

翌圣的牛凝血酶是從牛的血漿純化制得，具有純度高、比活高、不含有其他蛋白酶活性、滅活病毒、生產(chǎn)穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。該酶最適切割位點(diǎn)：A-B-Pro-Arg-↓-X-Y （其中，A和B為疏水氨基酸，X和Y為非酸性氨基酸），常見(jiàn)的識(shí)別序列為：1. Leu-Val-Pro-Arg-↓-Gly-Ser。2. Gly-Arg-↓-Gly。凝血酶可從切割產(chǎn)物中用苯甲脒或肝素瓊脂糖親和純化去除。

翌圣的重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過(guò)基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更強(qiáng)的穩(wěn)定性和特異性。rTEV是一種用來(lái)切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性，嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應(yīng)用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃時(shí)可達(dá)到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和溫度4-30℃的廣泛范圍內(nèi)皆有活性（見(jiàn)表2），使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動(dòng)。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His標(biāo)簽，通過(guò)Ni-NTA樹(shù)脂去除，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。

表2. 不同溫度下rTEV酶切活性

3C蛋白酶是切割小RNA病毒科非結(jié)構(gòu)蛋白的關(guān)鍵酶，在病毒復(fù)制過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。鼻病毒屬于小RNA病毒科，其中的人鼻病毒3C蛋白酶基因編碼區(qū)全長(zhǎng)552bp，編碼的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量約為22000 Da。人鼻病毒3C蛋白酶具有高度的酶切特異性，能特異切割位于Gln-Gly之間的肽鍵，識(shí)別位點(diǎn)為 Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln↓Gly-Pro。

翌圣將人鼻病毒3C蛋白酶的編碼區(qū)基因，在大腸桿菌中進(jìn)行重組表達(dá)，純化后獲得了高純度的重組3C蛋白酶，該蛋白酶能特異切割含有3C酶切位點(diǎn)的融合蛋白，具有良好的生物學(xué)活性。同時(shí)，翌圣生產(chǎn)的3C蛋白酶帶有GST和MAT標(biāo)簽蛋白，有利于后期將其從酶切體系中去除。

SUMO蛋白酶識(shí)別完整的含有100個(gè)氨基酸的SUMO（Small Ubiquitin-like Modifier）標(biāo)簽蛋白，并能高效地把SUMO從融合蛋白上切割下來(lái)。與EK和TEV等蛋白酶的識(shí)別位點(diǎn)相比，由于其識(shí)別序列長(zhǎng)，所以SUMO蛋白酶酶切反應(yīng)有很高的特異性，且在較寬范圍的反應(yīng)環(huán)境體系中保持較高的活力，例如溫度（4-30℃）、pH（5.5-9.5）等。SUMO蛋白酶還具有多聚His標(biāo)簽，便于使用親和層析的方法去除SUMO蛋白酶，純化目的蛋白。