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Ceturegel基質(zhì)膠應用-胰腺癌類器官構(gòu)建流程！
2024年4月4日CA: A Cancer Journal for Clinicians期刊發(fā)布了最新的2022年全球癌癥數(shù)據(jù)統(tǒng)計。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)（IARC）的最新評估數(shù)據(jù)，2022年全球癌癥新增病例1996萬例，全球癌癥死亡病例974萬例。2022年癌癥死亡病例數(shù)的癌癥分別是肺癌（182萬，18.7%）、結(jié)直腸癌（90萬，9.3%）、肝癌（76萬，7.8%）、女性乳腺癌（67萬，6.9%） 、胃癌（66萬，6.8%）、胰腺癌（47萬，4.8%）、食道癌（44.5萬，4.6%）、前列腺癌（40萬，4.1%）、宮頸癌（35萬，3.6%）、白血?。?0.5萬，3.1%）。
圖.2022年全球癌癥的病例和死亡分布類型
其中胰腺癌是一種惡性度高、治療效果差的腫瘤，胰腺癌的五年生存率約為10%，被醫(yī)學界稱為“癌中王”。但是并非不能治療，對于早期發(fā)現(xiàn)的胰腺癌，可以通過性手術(shù)結(jié)合術(shù)后化療、放療等綜合治療。因此針對不同病人找到合適的治療藥物是關(guān)鍵所在。
胰腺癌類器官（organoids）是指利用胰腺瘤細胞等在體外培養(yǎng)出的3D細胞培養(yǎng)物并具有一定的空間結(jié)構(gòu)組織類似物。胰腺癌類器官可以作為疾病模型，相較于傳統(tǒng)2D疾病模型，其在闡明疾病的發(fā)展、穩(wěn)態(tài)性和發(fā)病機理等與體內(nèi)環(huán)境更加接近，能作為胰腺癌治療、診段和發(fā)病機制研究的理想試驗模型。
胰腺癌類器官構(gòu)建實驗步驟
清洗：在生物安全柜中取出樣品管，去除組織保存液，加入適量冷的添加有雙抗的 PBS，反復清洗后，去除 PBS；
重復清洗：使用常溫PBS，重復第2步驟3次；
收集組織碎片，加入組織消化液消化，因胰腺癌組織較硬，消化需要時間30 min，重復2-3次，過70 μm篩網(wǎng)，收集胰腺癌細胞；
紅細胞裂解：加入10 mL紅細胞裂解緩沖液，室溫下在翹板搖床上搖10 min；
重復清洗：裂解完畢，使用常溫 DMEM/F12，重復第 2步驟3次；
類器官種板：調(diào)整細胞密度為2~3×106，與Ceturegel基質(zhì)膠1:1均勻混合，將細胞混懸液以40-60 uL每孔種在24孔板中，37℃放置15~30 min，加入預熱的類器官培養(yǎng)液，每個孔 750 uL；
類器官培養(yǎng)：將培養(yǎng)板放在 37℃ CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每2天更換培養(yǎng)液。加入培養(yǎng)液時，吸頭朝向側(cè)壁，緩慢加入；
重復清洗：使用常溫PBS，重復第2步驟3次；類器官觀察：每天觀察類器官并拍照，了解初始類器官數(shù)量、增殖速 度、形態(tài)、微生物污染情況等。
實驗結(jié)果
圖.胰腺癌組織（上圖）和癌旁（下圖）類器官不同周期培養(yǎng)結(jié)果（P為培養(yǎng)代次，d為培養(yǎng)時間）
FAQ
基質(zhì)膠的操作要注意哪些事項？
所有操作需在無菌環(huán)境下進行，應使用預冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。
獲取臨床樣本，如何避免污染？
①取材時盡量保證無菌取材；
②提取前可以用含雙抗的PBS浸泡幾分鐘：常見與外界環(huán)境有接觸可能的胃、腸、膀胱等位置腫瘤建議用含3%~5%雙抗的PBS浸泡5-10 min，其他常見腫瘤用含1%~2%雙抗的PBS浸泡5min左右；
③提取細胞過程中所用試劑均加1%雙抗及合適濃度的原代抗生素。
腫瘤組織采集、保存、運輸注意事項
盡可能多采集腫瘤細胞含量高的腫瘤組織，并縮短組織樣本在空氣中暴露的時間，以減少污染概率；采集的腫瘤組織樣本盡快置于裝有專用樣本保存液的無菌管中，低溫（4 ℃左右）下快速運轉(zhuǎn)至檢測單位（盡量保證采樣后2~4 h內(nèi)送到）。
病灶和癌旁培養(yǎng)出的類器官有區(qū)別嗎？腫瘤組織的取材部位有什么要求？
有差別，腫瘤本身具有異質(zhì)性，不同來源的類器官之間存在差異是很常見的現(xiàn)象，從形態(tài)上看，原發(fā)病灶來源的類器官比癌旁來源的類器官更具有侵襲性的結(jié)構(gòu)，一般病灶形態(tài)上更加不規(guī)則一些。如果希望在建?；蛩幬锖Y選方面盡量減小誤差，可以在活性好的地方多位置取樣。
產(chǎn)品選擇
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
Cebrary®Tissue Digestion Solution 組織消化液 | 41423ES10/30 | 10/30 mL |
Cebrary®Cell recovery solution for Organoid類器官回收液 | 41421ES30/60 | 30/100 mL |
Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 類器官凍存液 | 41422ES30/60 | 30/100 mL |
Cebrary® Pancreatic Cancer Organoid Growth Medium（Human）胰腺癌類器官生長培養(yǎng)基 | 41434ES60/76 | 100/500 mL |
Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40191ES08/10 | 5/10 mL |
相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品類型 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
基本濃度 | Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 | 40183ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40184ES08/10 | 5/10 mL | |
低生長因子 | Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40185ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix GFR， Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40186ES08/10 | 5/10 mL | |
高濃度 | Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40187ES08/10 | 5/10 mL |
Ceturegel® Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40188ES08/10 | 5/10 mL | |
Ceturegel® Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40189ES08/10 | 5/10 mL | |
干細胞專用 | Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質(zhì)膠 | 40190ES08/10 | 5/10 mL |
鼠尾膠原 | Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I (大鼠尾) | 40125ES10/50 | 2/10 mL |
Cebrary® Collagen, Type I , from mouse tail鼠尾膠原蛋白I型 (小鼠尾) | 40136ES10/50 | 2/10 mL |
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