酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測定傷寒桿菌“O”抗體
【摘要】：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是用酶標(biāo)記的抗體（或SPA）檢測未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強(qiáng)。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗(yàn)介紹，酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，見圖9 1.加抗原使之吸附于固相載體（如塑料反應(yīng)板） 2.洗滌加待測血清 3.洗滌加酶標(biāo)記SpA 4.洗滌加酶的底物。經(jīng)酶的催化產(chǎn)生有色產(chǎn)物。 材料： 1.聚乙烯塑料反應(yīng)
相關(guān)專題 ELISA免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是用酶標(biāo)記的抗體(或SPA)檢測未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強(qiáng)。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗(yàn)介紹，酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，見圖9

1.加抗原使之吸附于固相載體(如塑料反應(yīng)板)

2.洗滌加待測血清

3.洗滌加酶標(biāo)記SpA

4.洗滌加酶的底物。經(jīng)酶的催化產(chǎn)生有色產(chǎn)物。

材料：

1.聚乙烯塑料反應(yīng)板(PH9.6時(shí)可吸附蛋白Ag)

2.抗原：傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原

3.待測血清

4.凍干酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白(HRD—proteinA)純品

5.鄰苯二胺(OPD)

6.包被液：0.05M碳酸鈉—碳酸氫鈉溶液PH9.6

7.稀釋液：10%免疫血清PBS—吐溫20，防止非特異性吸附

8.洗滌液：0.02MTrisTWeen20,Ph7.4防止非特異性吸附

9.底物溶液：0.02M磷酸氫二鈉25.7毫升

0.1M檸檬酸24.3毫升

蒸餾水50毫升

臨用前新鮮配制，在上述緩沖液中溶解40毫克鄰苯二胺，然后加入30%雙氧水0.15毫升，底物對光敏感，需要避光并立即使用。

10.終止液;2M硫酸

方法：

1.抗原包被

取潔凈的聚苯乙烯微量反應(yīng)板，于每孔內(nèi)加傷寒抗原0.1毫升(用包被緩沖液稀釋，蛋白含量10微克/毫升)，置37℃1小時(shí)，棄抗原液，用洗滌液3次每次3分鐘。

2.加待測血清

于每孔內(nèi)分別加不同稀釋度(如1：5，1：10，1：20…1：80)的待測血清，PBS空白對照，陰性對照血清，陽性對照血清各0.1毫升。置37℃30分鐘，洗滌3次。

3.加酶聯(lián)A蛋白

于每孔加酶聯(lián)A蛋白各0.1毫升，置37℃20分鐘，洗滌3次。

4.加臨時(shí)配制的底物溶液各0.1毫升，置暗處15分鐘。加2M碳酸1滴終止反應(yīng)。

5.結(jié)果判斷：(肉眼判斷)

若顏色于陰性對照相同則為陰性，若較陰性對照深則為陽性，根據(jù)顏色深淺以(+)表示。