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撫生試劑-PEG分子治療濃度對(duì)融合率有明顯影響
PEG分子治療濃度對(duì)融合率有明顯影響
PEG的分子質(zhì)量和濃度對(duì)融合率有明顯影響，相對(duì)分子質(zhì)量在400~6000，濃度在10％～60％均可促融。但相對(duì)分子質(zhì)量和濃度越大，促融率越高的同時(shí)，黏度和對(duì)細(xì)胞的毒性也越大。常用濃度為40％~50%，低于30％融合率較低，高于50%則毒性較大。實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)表明，Merck公司的相對(duì)分子質(zhì)量為4000的PEG促融合效果。配制方法：取PEG 2g沸水中煮30min或高壓15min，冷卻至50～60℃時(shí)加入37℃預(yù)溫的不*培養(yǎng)液2ml，混勻后4℃保存。
2)融合的關(guān)鍵除了無(wú)菌操作之外就是動(dòng)作一定要輕柔，就像制備感受態(tài)細(xì)胞一樣，而且一定要混勻，不然在鏡下會(huì)出現(xiàn)成團(tuán)的細(xì)胞，會(huì)影響本就不高的融合率。
3)污染的處理。由于雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)周期長(zhǎng)，工作量大，污染是zui需要引起高度重視的。當(dāng)遇到可疑污染的培養(yǎng)孔，先將孔中液體抽吸丟棄，加入lmol／L NaOH數(shù)滴沖洗兩次，再加入0.2ml NaOH并換上新消毒的培養(yǎng)皿蓋繼續(xù)培養(yǎng)。如板上出現(xiàn)多處污染，應(yīng)整板廢棄。
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