色譜分析中積累了一些經(jīng)驗(yàn)，分享給大家： 

1.反相色譜法分析，乙腈和甲醇哪個(gè)更好？

甲醇和乙腈是反相色譜法中zui常用的有機(jī)溶劑，二者的極性和溶劑強(qiáng)度相差不大，但它們還是有一些差異，在此詳細(xì)闡述一下。  

 (1）UV檢測(cè)器上的響應(yīng)值：在紫外區(qū)尤其是遠(yuǎn)紫外區(qū)(靠近200 nm)，乙腈的吸收遠(yuǎn)低于甲醇，這一區(qū)別產(chǎn)生的影響在等度條件下也許還不明顯，但若使用梯度，乙腈所引起的基線漂移則遠(yuǎn)小于甲醇，這樣使用乙腈做流動(dòng)相，得到的色譜圖不僅美觀，樣品的檢出限也低得多，所以該指標(biāo)乙腈占優(yōu)；

(2)洗脫強(qiáng)度：乙腈的洗脫能力稍強(qiáng)于甲醇。如果查閱溶劑參數(shù)表，能夠發(fā)現(xiàn)乙腈的極性指數(shù)(5.8)稍高于甲醇(5.1)，受此表啟發(fā)，我曾固執(zhí)地認(rèn)為在反相色譜法中甲醇與水混合所調(diào)出的溶液的洗脫范圍要寬于乙腈，然而實(shí)踐證明與水混合時(shí)，乙腈的洗脫能力更強(qiáng)，隨著有機(jī)相比例的升高，這種區(qū)別逐漸減小，如果是純?nèi)軇┒呲呌谝恢?，也就是說，混合水以后乙腈的洗脫能力還是強(qiáng)于甲醇的；但洗脫能力不能用作評(píng)價(jià)溶劑好壞的標(biāo)準(zhǔn)，不過對(duì)于某一項(xiàng)分析，如果用甲醇替代乙腈，相應(yīng)的有機(jī)相比例應(yīng)調(diào)高一些。  

(3)選擇性：二者的選擇性各具特點(diǎn)。色譜分析中的選擇性往往無法給出普遍適用的參數(shù)，這就需要實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)支持。我喜歡進(jìn)行多組分分析，在某些情況下，使用乙腈-水洗脫分離情況優(yōu)于甲醇-水，比如PAEs、PAHs、酚類化合物等等，選擇乙腈得到了較優(yōu)的分離效果，而甲醇則不行；其他一些應(yīng)用中，甲醇的選擇性也會(huì)優(yōu)于乙腈，比如羰基類化合物-DNPH分析和氟喹諾酮類藥物(沙星類藥物)，其他同行使用了乙腈，化合物并未*分離，我進(jìn)行分析時(shí)改用了甲醇，所有化合物全部分開了。這是由于有機(jī)溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)（甲醇和乙醇是質(zhì)子性，乙腈和四氫呋喃是非質(zhì)子性）不同所致。本人的觀點(diǎn)，如果是多組分分析方法開發(fā)時(shí)，用兩種溶劑進(jìn)行對(duì)比，以便得出*條件。  

(4)色譜柱背壓：

柱內(nèi)承受的壓力,根據(jù)有機(jī)溶劑的種類或混合比例的不同而異.
25℃時(shí)，甲醇/水（1：1） >水（100%）>乙腈/水（1：1） >甲醇（100%）>乙腈（100%）；40℃時(shí)，甲醇/水（1：1） >水（100%）>乙腈/水（1：1） >甲醇（100%）>乙腈（100%）；

總體而言，使用乙腈時(shí)，色譜柱的背壓低于甲醇，原因是乙腈的黏度低于甲醇(25 ℃時(shí)，乙腈0.37cp，甲醇0.60cp)。該指標(biāo)，乙腈占優(yōu)。
綜上所述，反相色譜法中乙腈的效果優(yōu)于甲醇。（不考慮價(jià)格） 

2.離子抑制色譜法該選何種試劑？

離子抑制就是向流動(dòng)相中加入酸或堿，使弱酸或弱堿以單純的未解離形式存在，既能增大其在反相柱上的保留又能得到更的峰形。該方法主要用于弱酸分析(堿性化合物通常不采用離子抑制法）。常用的酸性添加物為磷酸、醋酸、甲酸等。

對(duì)比三者的吸光值，磷酸是zui小的（254 nm下約為0.04），乙酸和甲酸相差不大（254 nm下均略低于1.0），這一事實(shí)會(huì)導(dǎo)致一個(gè)問題——在低波長（254 nm以下）下，添加乙酸和甲酸會(huì)引起更高的噪聲，這就影響了分析的靈敏度，另外由于磷酸酸性強(qiáng)，達(dá)到同一pH值用量更少，所以使用磷酸時(shí)噪聲會(huì)更低。而在使用緩沖溶液和甲醇或乙腈進(jìn)行梯度分析時(shí)，乙酸或甲酸的存在可能會(huì)對(duì)乙腈、甲醇的基線漂移起到一定的抵消作用，當(dāng)然這只是猜測(cè)，還有待驗(yàn)證。 

3.上樣前樣品溶劑的選擇。

的溶劑是流動(dòng)相。

上面這句話可能很多人都知道，但至于為什么要這樣可能不清楚。原因： 

 (1)流動(dòng)相作溶劑不會(huì)出現(xiàn)溶劑峰。在藥物QC、化學(xué)品QC中，主成分和雜質(zhì)定量是通過歸一化法進(jìn)行的，溶劑峰的出現(xiàn)會(huì)使主成分測(cè)定值偏離實(shí)際值，所以溶劑峰是必須要消除的，*的辦法就是以與流動(dòng)相組成嚴(yán)格一致的溶劑溶解樣品。如果這樣做還是會(huì)出峰，那可能就是不被保留的化合物了；  

(2)反相分析中，如果采用洗脫強(qiáng)度明顯高于流動(dòng)相的溶劑或溶液進(jìn)行溶解，往往會(huì)導(dǎo)致柱效下降、峰前沿、峰前分叉峰，這種影響對(duì)洗脫較快的化合物影響更甚，并且進(jìn)樣量越大影響越嚴(yán)重。原因在于強(qiáng)洗脫樣品溶劑的加入局部增大了流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度，使單種組分的前部分與后部分的保留性不一致（前部分移動(dòng)快、后部分移動(dòng)慢），進(jìn)而導(dǎo)致區(qū)域展寬。 

 我舉兩個(gè)例子：

我分析氯霉素時(shí)，流動(dòng)相為甲醇：水=40：60，氯霉素是用甲醇溶解的，結(jié)果塔板數(shù)不足32000/m，后來改用流動(dòng)相溶解，塔板數(shù)升到了90000/m；還有一次，我分離磺胺類藥物，用的梯度(起點(diǎn)乙腈：乙酸水溶液=12：88)，溶劑為甲醇，結(jié)果*個(gè)峰分叉了，其余正常。要知道，如果是色譜柱損壞，那么所有的峰形均應(yīng)分叉。后來改用流動(dòng)相溶解，一切問題迎刃而解。

我的結(jié)論：溶劑的洗脫強(qiáng)度等于流動(dòng)相，峰形和色譜圖會(huì)很；若稍低于流動(dòng)相，也許會(huì)有溶劑峰，但峰形會(huì)是的，切勿使溶劑的洗脫強(qiáng)度明顯高于流動(dòng)相。