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關于細胞和組織療法的內毒素檢測闡述2023/12/04

一、介紹在科學進步和希望利用這些進步的新投資的推動下，研究人員和臨床醫(yī)生正在開發(fā)創(chuàng)新的細胞療法。出于兩個原因，控制此類治療制劑中的內毒素污染非常重要。首先，由于內毒素會對受體產生影響，因此給患者注射的制劑不能受到嚴重污染。其次，內毒素是多種細胞反應的強效誘導劑，可能會改變細胞的治療價值。二、細胞療法解析以細胞和組織為基礎的療法（本文中稱為細胞療法）是一種特殊的腸外產品，其中給患者注射的是活細胞。細胞可以來自患者（自體），這樣可以防止對細胞的免疫反應。另一種方法是從另一個人身上采集細胞（異體來源）

鱟試劑與內毒素的關系闡述2023/11/29

1、鱟試劑是什么？鱟試劑是一種源于海洋生物鱟的生物試劑，主要成分為鱟血細胞裂解液，含有C因子、B因子、G因子，其被廣泛應用于臨床診斷、制藥、生物醫(yī)學研究等領域。鱟試劑具有高度靈敏性和特異性，能夠快速檢測樣本中微量的內毒素含量。凝膠法鱟試劑2、內毒素是什么？內毒素是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分，它在細菌死亡裂解后釋放出來。內毒素對人體細胞的毒性相對較弱，但當其進入血液或組織時，會引發(fā)一系列炎癥反應，從而導致發(fā)熱、白細胞增多、血壓下降等癥狀。3、鱟試劑與內毒素的關系鱟試劑與內毒素之間存在著密切的

鱟試劑出現具有重要意義2023/11/29

鱟試劑的出現具有重要意義，它為臨床診斷、藥物篩選、環(huán)境監(jiān)測等領域提供了快速、靈敏、可靠的檢測手段。首先，鱟試劑在臨床診斷方面發(fā)揮了重要作用。它能夠快速、準確地檢測內毒素，幫助醫(yī)生診斷感染性疾病。在抗生素治療過程中，通過鱟試劑檢測內毒素水平，可以指導醫(yī)生合理使用抗生素，避免抗生素濫用和耐藥性的產生。此外，鱟試劑還可以用于檢測其他細菌內毒素，如大腸桿菌、肺炎鏈球菌等，對于診斷相應的感染性疾病具有重要價值。其次，鱟試劑在藥物篩選方面也具有重要作用。在研發(fā)新藥的過程中，需要對藥物的毒性進行評估。傳統的方

腸內毒素轉位是導致MODS的原因嗎？2023/11/28

腸源性內毒素血癥在許多臨床疾病中已被證實。嚴重肝病患者幾乎無一例外地發(fā)生內毒素血癥，肝硬化患者至少50%以上有慢性內毒素血癥。肝性腦病患者內毒素血癥發(fā)生率增加與單核-吞噬細胞系統清除能力明顯降低有關，這些證據提示肝單核-吞噬細胞系統清除能力抑制與引起腸源性內毒素積蓄有關。如果創(chuàng)傷患者單核-吞噬細胞功能正常，損傷后數天乃至數周均可不發(fā)生內毒素血癥。損傷后數天發(fā)生內毒素血癥者，幾乎都與環(huán)境中腸道菌傷口移生有關。內毒素是人類肝門靜脈的正常成分﹐肝門靜脈的內毒素可能在維持正常單核-吞噬細胞系統吞噬功能方

內毒素對代謝的影響2023/11/28

其實多器官功能障礙綜合征（multipleorgandysfunct*ndrome，MODS）、多器官功能衰竭（multipleorganfailure,MOF）的最根本原因是細胞代謝特別是細胞氧代謝產生障礙，創(chuàng)傷及內毒素均可影響細胞代謝，其中以內毒素對代謝的影響較明顯。正常情況下1分子葡萄糖可通過有氧氧化產生38分子ATP，約1.05×106J的能量供細胞合成代謝。內毒素血癥時，由于組織缺氧，有氧氧化途徑受阻，無氧酵解途徑增加，但無氧酵解時每分子葡萄糖只能產生4～6個分子的ATP。Raymon

內毒素激活單核-吞噬細胞致MODS的原因2023/11/22

研究表明，在內毒素血癥或敗血癥所致的MODS（multipleorgandysfunct*ndrome，多器官功能障礙綜合征）中，白細胞會重新分布，大量白細胞滯留在組織中，使外周血白細胞減少。病理檢查中還發(fā)現，在器官組織的微血管中滯留的白細胞有不少黏附在微血管的內皮細胞上，或是白細胞互相聚集，形成微血栓。自從1987年分離和鑒定出IL-8以來，已清楚化學介質在白細胞聚集、黏附，移動及激活過程中起著關鍵性作用。IL-8是一個C-X-C化學介質，對中性粒細胞及嗜堿粒細胞有著特殊的化學趨向作用?？笽L

NO與內毒素的關系2023/11/21

NO是一種強力的血管擴張物質，除可致低血壓外，還有許多作用。近年來，對NO的研究廣泛開展，NO在致低血壓中的作用已經被肯定。NO的產生受三種不同的NO合成酶的影響，一般分為兩種酶，即結構酶及誘導酶。結構酶受細胞內Ca濃度及鈣調素調節(jié)。結構酶根據分布的部位不同，可分為兩種，即神經元NO合成酶和內皮細胞NO合成酶。正常情況下，NO的釋放受結構酶調節(jié)，所產生的NO對維持血管張力、抑制血小板聚集及白細胞黏附起重要作用。相反，誘導型NOS是不受鈣離子所影響的，故一般不表達，但在炎癥及其介質如LPS、IL-

內毒素致休克及MODS的作用過程2023/11/17

當有小劑量內毒素存在時，TNF-α對組織細胞的損傷作用更大（圖24-1）。內毒素的主要生物學活性部位為脂質A，它通過肝臟分泌的脂多糖結合蛋白（LBP）與白細胞、單核-巨噬細胞上的CD14結合，形成LPS-CD14分合物。LBP可促進LPS與CD14的結合，曾有人認為LBP有清除內毒素的作用，但后來發(fā)現，LBP缺乏小鼠能耐受致死性LPS的作用，其內毒素的清除能力不受LBP影響。CD14在內毒素信號轉導中起著重要的作用，LPS與CD14結合后可加速LPS快速轉位到細胞內，并導致細胞激活。有研究認為，

內毒素導致MODS原因分析2023/11/17

臨床資料表明，腸細菌及內毒素轉位與MOD（multipleorgandysfunct*ndrome，多器官功能障礙綜合征）關系密切。在Crohn病、結腸癌及小腸梗阻患者剖腹手術時取出的腸系膜淋巴結中可發(fā)現活細菌，在梗阻性黃疸者的肝門靜脈內發(fā)現有內毒素。肝膿腫患者中起因不明者高達21%，其機制可能是由于腸細菌轉位或淋巴管系統回流而致。腸道細菌轉位是癌癥化療患者感染和死亡的主要原因之一。有證據表明，55例有中性粒細胞減少癥的癌癥化療患者，45例有菌血癥，細菌主要為糞便菌株，這些患者黏膜下免疫防御功能

內毒素與多器官功能障礙綜合征的關系2023/11/16

嚴重感染、創(chuàng)傷、重度休克、大面積燒傷等病人除原有的器官和組織受損外，可出現兩個以上器官序貫性地或同時發(fā)生嚴重的功能障礙，以致衰竭。以往，由于患者常在短期內死亡，臨床上難以觀察到這類改變。隨著醫(yī)療技術的提高與監(jiān)測手段的發(fā)展，使這些現象得以在臨床上觀察到。1973年，Tilney首先提出這一現象。1975年，Baue再次報道和加以描述，并提出進行性或序貫性器官衰竭（progressiveorsequentialorganfailure）的概念。1997年，Eisemen將上述現象命名為多器官衰竭（m

關于細菌內毒素限值簡述2023/10/27

內毒素帶有負電荷，熱穩(wěn)定性強，所以在藥物生產過程中及在臨床上都不希望有內毒素存在。如果有一定量的內毒素存在于藥物中將對人類的治療帶來不利。目前世界各國對各類藥品、試劑等的生產要求都是非常嚴格的，不允許有超過限-量的內毒素存在。根據各國藥典規(guī)定，熱原檢測品種如果以細菌內毒素檢測代替時，可根據熱原檢測的總劑量計算出相應的內毒素限值（L）值。其計算公式為：L=K/M式中M為通過規(guī)定的途徑給藥時，藥品的家兔注射劑量，以ml/kg，mg/kg、U/kg等表示。K為通過規(guī)定的途徑給藥，臨床無任何不良反映時的

如何有效去除內毒素？2023/10/27

目前，解決如何去除內毒素的問題刻不容緩，那如何有效去除內毒素呢？首先，在藥品制劑及基因工程等產品的生產過程去除內毒素包含兩方面的內容：在藥品制造過程中或在基因工程產品生產過程中所需的各類藥品以及水等一切儀器和試劑都不能有內毒素存在，甚至要檢查每一個環(huán)節(jié)中的個別藥品試劑的內毒素含量，若發(fā)現有超量或較大量內毒素存在時，必須要把內毒素去除，然后再進行下一步制造程序。去除內毒素的方法要根據各類藥物的相對分子質量等應用各種相應有效的方法予以去除。選擇去除內毒素的方法十分重要?？傊笱芯考饶苡行コ齼榷?

為什么稀釋內毒素標準品需要旋渦振蕩？2023/10/26

《美國藥典》中的細菌內毒素檢查法中規(guī)定，應使用國家參考標準內毒素（RSE），復溶后應旋渦振蕩不少于20min；復溶后的原液于冰箱保存不超過14d，再次使用前要強烈地旋渦振蕩不少于5min；隨后的每一步稀釋前被稀釋液也要旋渦振蕩不少于1min；不能使用保存的稀釋液。美國鱟試劑廠家供應的工作標準內毒素（CSE）在使用說明書中都對內毒素的復溶和稀釋有使用旋渦混合器震蕩的要求。同樣，世界衛(wèi)生組織及各國藥典中的細菌內毒素檢查法也對標準內毒素的稀釋有震蕩混合的要求。為什么對標準內毒素的稀釋有如此特殊的要求呢

國內外內毒素檢測歷史闡述2023/10/17

在美國、日本、英國、意大利等國，用鱟試驗方法檢測內毒素首先在藥品管理上逐漸取代了熱原檢測，美國是發(fā)明鱟試劑和最先建立鱟試驗方法的國家。1956年，美國動物學家Bang發(fā)表了論文——“鱟的一種細菌性疾病”，闡述了細菌內毒素使鱟血凝固的現象；1964年，Bang和Levin提出了鱟血凝集的初步機制；1968年，Bang和Levin又建立了鱟試驗檢測內毒素的凝膠法，從而在藥物的檢測及臨床醫(yī)學上進行了研究和應用；在臨床上，20世紀70年代初期即已開始在內科領域中對內毒素進行研究。實驗研究認為，肝臟對內毒

中國鱟凝固蛋白原的分離提純及其生化性質2023/10/17

鱟血變形細胞的低滲提取液，即鱟變形細胞裂解物，含有一種高相對分子質量的凝固酶原和一種可凝固的蛋白——凝固蛋白原，前者經內毒素激活后轉化成具有活性的凝固酶，通過酶介作用使凝固蛋白原轉變成凝固蛋白。1972年，Young等首先報道在去熱原的條件下用SephadexG-75分離美洲鱟變形細胞裂解物中的凝固蛋白原，可得到三部分物質，第一部分F1占總裂解物蛋白的30%，含有能被內毒素所激活的酶。第二部分F2占總裂解物蛋白的50%，為可凝固的蛋白，即凝固蛋白原。第三部分占15%，性質不清。1973年，Sol

關于鱟試劑制造進一步研究的注意點及研究方向2023/10/17

1、制備采血的鱟要新鮮或用經人工養(yǎng)殖幾天后的健康鱟，采血時血流必須通暢。采血量大，試劑質量也高，但不同季節(jié)鱟血的質量也有差異。2、在制備TL的全過程中均須無菌操作，動作應輕，以防止細胞破裂。使用器具均須清洗干凈并去熱原。作者曾對器具做硅化與不硅化處理的比較，其結果發(fā)現器具硅化與否不影響靈敏度。因此，只要器具干凈并已去熱原即可以不硅化。3、在抗凝劑方面，作者使用的茶堿量較大，觀察發(fā)現其細胞形態(tài)均正常，在采血瓶中分散均勻，且發(fā)生聚集的時間后移。之后再用抗凝劑2洗1次，有利于將血藍蛋白除去。除茶堿外，

鱟血變形細胞裂解物的制備2023/10/13

我們了解到，鱟血液中含有一種細胞即變形細胞，這種細胞內的溶解物（裂解物tachypleuslysate，TL）可與微量細菌內毒素起凝集反應，這是由TL中的一種酶被細菌（革蘭陰性菌）細胞壁成分——脂多糖激活，使其蛋白質形成凝膠所致。為此人們已闡明了這方面的理論機制，并已著手利用各種技術從自然界存在的某些物質中把它提取出來，實踐并應用于社會，鱟變形細胞內的溶解物主要有兩種，凝固蛋白原及凝固蛋白酶原。這兩種物質提取后，即為檢測內毒素的益試劑，它的檢測靈敏度高低取決于制備擻血細胞溶解物的質量。因此，在制

鱟與鱟試劑的關系闡述2023/10/13

熱原（pyrogen）指在臨床上能使哺乳動物產生熱原反應的物質。關于熱原的定義在學術上尚有爭論。熱原是否就是內毒素在學術上也有爭議。但在藥檢的范疇，可以說無內毒素就是無熱原，檢測內毒素就是檢測熱原。隨著科學的進步，通過對鱟血液細胞溶解物及內毒素的深入研究發(fā)現，鱟血液細胞的溶解物包含了與內毒素反應所需的全部凝集因子，它們與內毒素的反應是一種復雜的酶促反應。1964年，Bang和Levin首先提出鱟血凝集的初步機制，并用鱟試驗檢測內毒素。1968年，Marchalon精制成功鱟試劑，此后鱟試劑作為一

鱟與內毒素相互關系作用闡述2023/10/13

鱟（Tachypleus，limulus）為大型節(jié)肢動物，屬蜘蛛風，現共有2屬5種：Limulus屬的Polyghemus種，分布于北美洲東部沿海；Tachypleus屬的Tridentafus種、Gigas種和Boeveni種分布于中國、日本東南部及馬來西亞、泰國、菲律賓一帶；Carcinoscorpius屬的Rotundieauda種則分布于印度洋沿岸。中國及日本鱟經鑒定為Tachypleustridentatus（東方鱟或中國鱟）。美國鱟是一種古老的、有4億年歷史的海洋節(jié)肢動物，其身上覆蓋

阻止內毒素有害反應的總結2023/10/11

盡管經過數十年的不懈努力已發(fā)展了許多抗內毒素的戰(zhàn)略及具體藥物，但至今為止的一切治療措施都不能令人滿意。雖然這些治療措施在動物及少數患者中的應用顯示有益，但大量臨床應用則顯示無明確的治療效果，甚至無效。因此，目前的研究距將來臨床廣泛使用有效的抗內毒素治療還有很大距離。一般認為，研究失敗的主要原因是由于目前對LPS受體信號轉導途徑的了解還不十分清楚。雖然已發(fā)現了某些細胞受體如CD14的信號轉導途徑，但由于研究者往往過高地估計了這些受體的作用，因而忽視了受體之間的互相聯系。（1）開始，CD14被認為是