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如何養(yǎng)細(xì)胞？2023/05/17: 01為什么要進(jìn)行細(xì)胞體外培養(yǎng)社會(huì)上習(xí)慣于把科學(xué)和技術(shù)連在一起，統(tǒng)稱為科學(xué)技術(shù)，簡(jiǎn)稱科技?？茖W(xué)解決理論問(wèn)題，技術(shù)解決實(shí)際問(wèn)題。我們走向更好的生活現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù)，而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系。醫(yī)藥領(lǐng)域（基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過(guò)程中很多是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)）、基因工程（乙肝疫苗很多是以CHO細(xì)胞作為載體）、細(xì)胞工程（雜交瘤單克隆抗體，是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)），既使是現(xiàn)在飛速發(fā)展的基因工程抗體也離不開細(xì)胞培養(yǎng)；正在倍受重視的

培養(yǎng)基體系主要成分及功能介紹2023/05/16: 1、葡萄糖：用于細(xì)胞能量代謝。2、CO?：細(xì)胞需要少量的二氧化碳來(lái)維持生長(zhǎng)。在培養(yǎng)基中，溶解的CO?與碳酸氫鹽離子處于平衡狀態(tài)，許多培養(yǎng)基利用了這種CO?/碳酸氫鹽反應(yīng)來(lái)緩沖培養(yǎng)基的pH值。CO?溶解在培養(yǎng)基中，與水反應(yīng)生成碳酸。隨著細(xì)胞代謝產(chǎn)生更多的CO?，隨著下面的化學(xué)反應(yīng)向右驅(qū)動(dòng)，介質(zhì)的pH值下降，通過(guò)向培養(yǎng)基中添加碳酸氫鈉，可使pH值維持在7.2~7.4的最佳范圍。3、酚紅：用于監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的pH值。在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，由于細(xì)胞釋放的代謝物改變了pH值，培養(yǎng)基的顏色也隨之改變。在較低的pH值

明膠是什么？可分為幾種？2023/05/15: 明膠是一種大分子的親水膠體，是膠原部分水解后的產(chǎn)物。按其性能和用途可分為照相明膠、食用明膠和工業(yè)明膠。根據(jù)用途不同，對(duì)明膠的質(zhì)量要求也不一樣。用作粘結(jié)劑使用時(shí)，主要要求粘接強(qiáng)度。用于照相、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域時(shí)，則強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品的純度。膠原分子是由三條多肽鏈相互纏繞所形成的螺旋體，通過(guò)工藝過(guò)程的處理，膠原分子螺旋體變性分解成單條多肽鏈（α-鏈）的α-組分和由兩條α鏈組成的β-組分及由三條α鏈組成的γ-組分，以及介于其間和小于α-組分或大于γ-組分的分子鏈碎片。由此可見，明膠是一個(gè)具有一定分子量分布的多分散

透析袋的使用方法的詳細(xì)介紹2023/05/12: 為防干裂，出廠前透析袋一般都經(jīng)10%的甘油處理，透析袋中含有微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，它們對(duì)蛋白質(zhì)和其他生物活性物質(zhì)有害，用前必須除去。新購(gòu)進(jìn)的普通型透析袋必須經(jīng)過(guò)處理才能使用。處理方法如下。方法一：把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度（10-20cm）的小段。在大體積（500ml）的2%（w/v）的碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA2Na（pH=8.0）中將透析袋煮沸10min。用蒸餾水清洗透析袋。放在500ml的1mmol/LEDTA2Na（pH=8.0）中將之煮沸10min。冷卻后，置于

免疫熒光技術(shù)的技術(shù)分類有幾種2023/05/11: ⑴熒光抗體技術(shù)抗原抗體反應(yīng)后，利用熒光顯微鏡判定結(jié)果的檢測(cè)方法。⑵免疫熒光測(cè)定抗原抗體反應(yīng)后，利用特殊儀器測(cè)定熒光強(qiáng)度而推算被測(cè)物濃度的檢測(cè)方法⑴熒光物質(zhì)1）熒光色素許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象，但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有：⑴異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水或酒精等溶劑。分子量為389.4，最大吸收光波長(zhǎng)為490--495nm

常見蛋白質(zhì)變性劑尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍的優(yōu)缺點(diǎn)、區(qū)別2023/05/10: 蛋白質(zhì)變性劑是一類能使蛋白質(zhì)發(fā)生變性作用的試劑。蛋白質(zhì)變性是指當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)受物理或化學(xué)因素的影響，其分子內(nèi)部原有的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)發(fā)生改變的過(guò)程。一般認(rèn)為蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)有了改變或遭到破壞，都是變性的結(jié)果。常見的蛋白質(zhì)變性劑有強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬鹽、丙酮、尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍等。在生化實(shí)驗(yàn)中，常需要對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行變性研究，一般我們常用尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍這三種蛋白質(zhì)變性劑。今天我們就來(lái)講講這三種蛋白質(zhì)變性劑的優(yōu)缺點(diǎn)、區(qū)別、變性機(jī)制和注意事項(xiàng)等內(nèi)容。尿素、鹽酸胍和異硫氰酸胍的優(yōu)缺點(diǎn)：尿素的溶解

胰酶的作用機(jī)理和應(yīng)用領(lǐng)域2023/05/09: 胰酶是經(jīng)提取、精制、復(fù)配而成的一種復(fù)合酶，含有蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等，具有較強(qiáng)的分解蛋白質(zhì)及脂肪等能力，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)療、釀造、絲綢、制革等行業(yè)。應(yīng)用領(lǐng)域：1、胰酶應(yīng)用在動(dòng)物蛋白水解，如雞豬牛等家禽肉類、骨類肉副產(chǎn)品、魚蝦蚌類等水海產(chǎn)品的蛋白水解，生產(chǎn)各種肉類香精、骨湯料、肉類及海產(chǎn)品的抽提物。2、胰酶是一種無(wú)毒的蛋白質(zhì)，已成功應(yīng)用于洗滌劑用酶工業(yè)，可添加在普通洗衣粉、濃縮洗衣粉和液體洗滌劑當(dāng)中，既可用于家庭洗衣，也可用于工業(yè)洗衣，可以有效的去除蛋類、乳制品、或肉汁、菜汁等蛋白類的污漬，另

NC膜、PVDF膜的選擇2023/05/08: 硝酸纖維素膜又稱為NC膜，在膠體金試紙中用做C/T線的承載體，同時(shí)也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。所以NC膜成為該試驗(yàn)中最重要的耗材NC膜、PVDF膜的選擇westernblot中膜的選擇是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵點(diǎn)，Westernblot實(shí)驗(yàn)中一般可以選擇硝酸纖維素膜(NC)和PVDF膜，那NC膜和PVDF膜有什么區(qū)別呢？怎樣才能選擇最恰當(dāng)?shù)碾s交膜進(jìn)行Westernblot實(shí)驗(yàn)?zāi)?？WesternBlot時(shí)該選擇NC膜還是PVDF膜?硝酸纖維素膜：硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白印跡實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)固相支持物。在低離子轉(zhuǎn)移緩

實(shí)驗(yàn)室移液吸頭的分類2023/05/06: 吸頭作為與移液器配合使用的耗材，一般根據(jù)應(yīng)用的不同可分為：標(biāo)準(zhǔn)吸頭、濾芯吸頭、低吸附吸頭、自動(dòng)工作站吸頭、寬口吸頭。1.標(biāo)準(zhǔn)吸頭是應(yīng)用最為廣泛的吸頭，幾乎所有移液操作可使用普通吸頭，這是吸頭中實(shí)惠的一類。2.濾芯吸頭是為了避免交叉污染而設(shè)計(jì)的一種耗材，濾芯吸頭移取的樣品，不能進(jìn)入移液器的內(nèi)部，從而起到保護(hù)移液器的部件不被污染和腐蝕，更重要的是也可以保證樣品間不會(huì)有交叉污染，常用于分子生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、病毒學(xué)等實(shí)驗(yàn)中。3.對(duì)于靈敏度要求高的實(shí)驗(yàn)，或者易殘留的珍貴樣品或試劑，可以選擇低吸附吸頭來(lái)提高回

常見細(xì)胞裂解液有哪些？2023/04/25: RIPA裂解液：RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液，獲得的蛋白樣品可用于常規(guī)WB、IP等實(shí)驗(yàn)。組分：25mMTris-HCl,pH7.6、150mMNaCl、1%NP-40、1%去氧膽酸鈉、0.1%十二烷基硫酸鈉（SDS）。IP裂解液：IP裂解液是一種改良后的RIPA裂解液，具中等強(qiáng)度效力，可高效溶解細(xì)胞蛋白，但不會(huì)像RIPA一樣釋放染色體組DNA或破壞蛋白復(fù)合物。適合下游免疫沉淀或親和吸附應(yīng)用。組分：25mMTris-HCl,pH7.4、150mMNaCl、1%NP-40、1%mME

ripa裂解液的成分及使用方法2023/04/24: RIPA主要是從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA裂解液(RIPALysisBuffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。RIPA的本意是RadioImmunoprecipitationAssay。RIPA裂解液的配方有很多種，根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。成分：RIPA裂解液(強(qiáng))的主要成分為50mMTris(pH7.4)，150mMNaCl，1%TritonX-100，1%sodiumdeoxy

瓊脂和瓊脂糖有什么區(qū)別？2023/04/18: 瓊脂和瓊脂糖的區(qū)別：瓊脂和瓊脂糖之間的主要區(qū)別在于，瓊脂是從紅藻中獲得的凝膠狀物質(zhì)，而瓊脂糖是從瓊脂或紅海藻中純化的線性聚合物。瓊脂和瓊脂糖是來(lái)自紅藻或海藻的兩種多糖產(chǎn)品。它們?cè)诟鱾€(gè)領(lǐng)域都非常有用，從廚房（如食物）到化學(xué)實(shí)驗(yàn)室（作為細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)物）。因此，這些資源的種植具有商業(yè)價(jià)值，并且正在亞洲和美國(guó)的部分地區(qū)進(jìn)行。在結(jié)構(gòu)上，瓊脂糖是一種線性聚合物，由交替的D-半乳糖和3,6-脫水-L-半乳糖單元組成。另一方面，瓊脂是瓊脂糖和瓊脂膠的混合物。什么是瓊脂？瓊脂或瓊脂-瓊脂是從江蘺和石花菜等紅藻中

DMEM高糖、DMEM低糖、DMEM/F-12培養(yǎng)基到底啥差別？2023/04/11: DMEM高糖培養(yǎng)基DMEM高糖培養(yǎng)基是在MEM培養(yǎng)基基礎(chǔ)上改良而來(lái)，目前已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞的培養(yǎng)。DMEM高糖培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于生長(zhǎng)快、粘附性低的細(xì)胞。可用于多種哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞的培養(yǎng)，例如原代成纖維細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、HUVEC、平滑肌細(xì)胞等，也可以用于一些細(xì)胞系的培養(yǎng)，例如Hela、293、Cos-7及PC-12等。DMEM低糖培養(yǎng)基DMEM低糖培養(yǎng)基是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。DMEM低糖培養(yǎng)基適合代謝作用慢、依賴性貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。DMEM/F-12培

姬姆染色液的操作步驟及注意事項(xiàng)2023/03/23: 操作步驟：1、滴加姬姆染色液A液（0.5-0.8ml）于涂片上，并讓染液覆蓋整個(gè)標(biāo)本涂色片染色1分鐘。2、將姬姆薩染色液B液滴加于A液上面（滴加之量為A液的2-3倍）以洗耳球吹出微風(fēng)使液面產(chǎn)生漣漪狀，使兩液充分混合，染色3-10分鐘。3、水洗（沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水沖去，以防有沉渣沉淀在標(biāo)本上）。4、干燥，鏡檢。注意事項(xiàng)：1、染色時(shí)間要視何種標(biāo)本，涂片薄厚，有核細(xì)胞多少，何種細(xì)胞及溫室等而定；通常染血液涂片時(shí)滴加B液后染1-3分鐘即可，染骨髓片則應(yīng)不少于5分鐘。2、做骨髓涂片時(shí)因?yàn)楣撬枥w

DMEM（低糖）的注意事項(xiàng)和使用步驟2023/03/06: DMEM培養(yǎng)基是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基，是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上研制的。與MEM比較增加了各種成分的用量，同時(shí)又分為高糖型（低于4500gm/L）和低糖型（低于1000mg/L）。DMEM低糖培養(yǎng)基用于養(yǎng)干細(xì)胞可防分化，DMEM高糖可養(yǎng)大多數(shù)哺乳動(dòng)物的細(xì)胞。注意事項(xiàng)：1、培養(yǎng)及長(zhǎng)期放置，需要2-8℃避光保存，請(qǐng)勿低溫凍存。2、培養(yǎng)基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不穩(wěn)定、易分解，長(zhǎng)期放置后使用若發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)變慢可以在使用前加入適量的L-谷氨酰胺，來(lái)維持細(xì)胞正常代謝。3、含有NaHCO3的培

DNA提取試劑盒有哪幾種？2023/02/28: DNA提取試劑盒是根據(jù)lv/芐化/法構(gòu)建的，能夠從樣本中提取基因組DNA的試劑盒。lv化/芐具有能將含有纖維素等的細(xì)胞壁中的羥基芐基化，從而破壞細(xì)胞壁的特性。本制品利用了lv化/芐的這一特性，將植物樣品凍結(jié)融解后，再使用PipetTip將植物樣品在Microtube壁上數(shù)次按壓即可破壞細(xì)胞壁。本法與傳統(tǒng)方法相比，省去了液氮研磨等煩瑣步驟，有利于一次性處理大量樣品。而且，本制品經(jīng)過(guò)了改良，熱處理時(shí)間只需15分鐘，使用本制品從實(shí)驗(yàn)開始至水相回收只需30分鐘時(shí)間。得到的基因組DNA可以進(jìn)行PCR擴(kuò)增及

離心管與EP管的區(qū)別？離心管有哪些種類？2023/02/21: 離心管和ep管區(qū)別是規(guī)格不同，名稱不同。1.EP管是一種小型的離心管，主要是1.5毫升容量的離心管，可與微型離心機(jī)一起使用，主要用于微量試劑的分離。EP管為離心管，而離心管不一定是EP管，所含離心管范圍較大，有較多的規(guī)格。EP管覆蓋范圍更大，規(guī)格也更多。按大小可分為大量離心管、普通離心管和微量離心管。2.塑料離心管通常是一次性實(shí)驗(yàn)用具，不建議多次重復(fù)使用。為了節(jié)約成本，可以根據(jù)需要對(duì)離心管進(jìn)行再利用，但要保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性，需要通過(guò)高溫高壓消毒。PE材料離心管，不能高溫高壓消毒。3.離心式管道

酶標(biāo)板分類與性能判斷2023/02/08: 酶標(biāo)板作為ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中的輔材，起著舉足輕重的作用并直接影響最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果，酶標(biāo)板的好壞主要取決于其對(duì)蛋白吸附的靈敏度、板孔間蛋白吸附能力差異以及所采購(gòu)酶標(biāo)板批次間的差異。因此，選擇一款蛋白吸附靈敏度高、對(duì)蛋白吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標(biāo)板產(chǎn)品，是實(shí)驗(yàn)者獲得可靠、穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的保障。酶標(biāo)板分類：根據(jù)不同的分類標(biāo)準(zhǔn)，酶標(biāo)板有著不同的分類。一、根據(jù)孔數(shù)，可分為96孔、48孔等，由于酶標(biāo)板主要是配合酶標(biāo)儀用，目前市面上的酶標(biāo)儀最多為96孔，因此酶標(biāo)板最為常用的也是96孔。二、根據(jù)其底部的

培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基的區(qū)別？2023/02/06: 培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動(dòng)物(或組織)生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基有好幾種分類方法，按狀態(tài)分可以分為固體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基，還可以按原料來(lái)源，功能或者使用范圍等來(lái)分類。培養(yǎng)皿是放培養(yǎng)基的容器，一般用于盛放固體瓊脂培養(yǎng)基，說(shuō)白了就是塑料或者玻璃制成的圓形淺碟。培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基的區(qū)別大概就相當(dāng)于水杯和水的區(qū)別吧，一個(gè)是容器一個(gè)是內(nèi)容物。培養(yǎng)基：培養(yǎng)基是供植物組織、動(dòng)物組織和微生物生長(zhǎng)以及維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都包含有碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素

免疫組化原理、流程及結(jié)果分析2023/02/03: 免疫組化原理免疫組化染色是用一抗與被檢測(cè)組織中目的蛋白抗原結(jié)合，然后用HRP等標(biāo)記的二抗與一抗進(jìn)行結(jié)合，最后通過(guò)與DAB顯色劑反應(yīng)，進(jìn)而確認(rèn)所要檢測(cè)蛋白抗原的定位、半定量等目的。免疫組化更多的意義在于查看目的蛋白的定位。定量一般用western來(lái)實(shí)現(xiàn)。免疫組化染色和HE染色的不同之處可能是HE染色比較粗略地辨認(rèn)不同細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；而后者能夠針對(duì)特異性細(xì)胞標(biāo)志物來(lái)檢測(cè)特異性細(xì)胞的改變（數(shù)量）、也可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)位，組織中一些特異性蛋白的表達(dá)的量改變（通過(guò)圖像分析系統(tǒng)分析顏色深淺、分布的面積

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