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瓊脂糖凝膠電泳的制備過(guò)程2023/08/29: 瓊脂糖是實(shí)驗(yàn)室常用的試劑之一，但是瓊脂糖凝膠電泳的制備過(guò)程也不簡(jiǎn)單，接下來(lái)就為大家詳細(xì)介紹一下制備過(guò)程。一、用稱量紙片電子天平取0.3g的瓊脂粉；二、配30ML的1*10的TBST緩沖液與100ml的三角燒瓶里；三、倒入瓊脂粉搖勻，并轉(zhuǎn)到微波爐中加熱溶解；四、用手套取出到?jīng)鏊陨粤罌鲋翜責(zé)岷螅s60℃），加入核酸酶（Eb替代物）2ul；要邊加邊搖勻，使之充分搖勻；五、取電泳槽內(nèi)的有機(jī)玻璃內(nèi)槽(制膠槽)洗干凈,晾干，放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內(nèi)槽兩端邊緣封好，形成模子。將內(nèi)槽置于水平位置

ELISA試劑盒樣本稀釋原則2023/08/21: 標(biāo)本的稀釋原則：首先通過(guò)文獻(xiàn)檢索的方式了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過(guò)程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為300pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300pg/ml，150pg/ml，75pg/ml，37.5pg/ml，18.5pg/ml，9pg/ml，4.

免疫熒光染色原理及步驟2023/08/18: 免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實(shí)驗(yàn)原理是將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡(jiǎn)便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對(duì)使用標(biāo)記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。下面詳細(xì)介紹免疫熒光染色步驟：1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，10min后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間(參考：30min)。3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，p

塑料離心管的特點(diǎn)2023/08/14: 實(shí)驗(yàn)室常用的離心管有塑料的和玻璃的，一般塑料的用的較多，因?yàn)椴ＡУ碾x心管不能用在高速或者超速離心機(jī)上。塑料的離心管有PP（聚丙烯）、PC(聚碳酸酯)，PE(聚乙烯)等材質(zhì)。PP的管子性能相對(duì)來(lái)說(shuō)比較好。塑料離心管為透明或者半透明，可以直觀的看到樣品離心情況。接下來(lái)就介紹一下各種材質(zhì)塑料離心管的特點(diǎn)：PP（聚丙烯）：半透明，化學(xué)及溫度穩(wěn)定性較好，但是在低溫下會(huì)變脆，所以在離心時(shí)不要在4℃以下。PC(聚碳酸酯)：透明度較好，硬度大，可以高溫消毒，但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿以及一些有機(jī)溶劑如酒精之類。主要用于5萬(wàn)

木瓜蛋白酶的性質(zhì)及酶活測(cè)定方法2023/08/08: 木瓜蛋白酶（Papain），又稱木瓜酶，是一種蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜（Carieapapaya）中含有的一種低特異性蛋白水解酶，廣泛地存在于番木瓜的根、莖、葉和果實(shí)內(nèi)，其中在未成熟的乳汁中含量。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，屬于巰基蛋白酶，它具有酶活高、熱穩(wěn)定性好、天然衛(wèi)生安全等特點(diǎn)?；瘜W(xué)性質(zhì)木瓜蛋白酶是一種在酸性、中性、堿性環(huán)境下均能分解蛋白質(zhì)的蛋白酶。它的外觀為白色至淺黃色的粉末，微有吸濕性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液為無(wú)色或淡黃色，有時(shí)呈乳白色；幾乎不溶于乙醇、氯/仿等有機(jī)溶

液氮儲(chǔ)存細(xì)胞的安全性如何保證？2023/08/07: 存放注意事項(xiàng)：1.禁止將罐口密封，以免液氮持續(xù)蒸發(fā)的氮?dú)鉄o(wú)法排出導(dǎo)致液氮罐爆炸；2.定時(shí)檢測(cè)液位高度，及時(shí)補(bǔ)充液氮，避免液氮蒸發(fā)后細(xì)胞凍存溫度不夠?qū)е率Щ睿?.禁止密閉空間存儲(chǔ)，避免空間內(nèi)氮?dú)夂扛邿o(wú)氧氣，導(dǎo)致人員缺氧窒息；4.做好個(gè)人防護(hù)，避免深低溫液氮直接接觸皮膚導(dǎo)致凍傷。取出注意事項(xiàng)：1.做好個(gè)人防護(hù)，不可徒手去拿從液氮罐中出來(lái)的細(xì)胞凍存管；2.取出時(shí)不要直接將提桶、提籃拿出液氮罐，可放在罐口位置，瀝干提桶、提籃的液氮；3.細(xì)胞凍存管取出后可放-80°冰箱或放倒在吸水紙上，使?jié)B入液氮緩慢揮

小鼠腫瘤壞死因子α試劑盒的原理和操作方法2023/08/03: 實(shí)驗(yàn)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被腫瘤壞死因子α(TNF-α)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和

ELISA試劑盒組成與常見(jiàn)ELISA試劑盒分類2023/07/31: ELISA快速檢測(cè)技術(shù)越來(lái)越多的用于疾病診斷、食品安全檢測(cè)中，那么ELISA試劑盒的主要組成成份是什么呢？根據(jù)ELISA試劑盒的應(yīng)用范圍，可將ELISA試劑盒分為拿幾種呢？ELISA試劑盒主要的組成成份如下：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)；(2)C的抗原或抗體(結(jié)合物)；(3)酶的底物；(4)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中)；(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；(7)

PVDF膜的特點(diǎn)2023/07/27: PVDF膜是一種用于各種實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)應(yīng)用的膜，用于過(guò)濾、分離和純化生物和化學(xué)樣品。PVDF代表聚偏二氟乙烯，它是一種具有高化學(xué)和熱穩(wěn)定性的合成聚合物，使其適用于廣泛的應(yīng)用。PVDF膜通常用于蛋白質(zhì)和核酸轉(zhuǎn)移、蛋白質(zhì)印跡以及其他需要高蛋白質(zhì)結(jié)合能力和低背景干擾的應(yīng)用。特點(diǎn)：PVDF膜具有多種特性，使其在實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)應(yīng)用中廣受歡迎。1、化學(xué)和熱穩(wěn)定性：PVDF可耐受大多數(shù)化學(xué)品、有機(jī)溶劑和溫度，使其適用于惡劣環(huán)境。2、高蛋白結(jié)合能力：PVDF膜對(duì)蛋白質(zhì)具有高親和力，使其成為蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移和蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用

透析袋的選擇和使用2023/07/24: 透析袋的選擇1，正確選擇合適的截留分子量截留分子量的選擇是以預(yù)留在膜內(nèi)的大分子的分子量和將要被除去的小分子污染物的分子量為基礎(chǔ)的。為達(dá)到合理有效的分離，需分離的兩種物質(zhì)分子量的比率至少為25，選擇截留分子量的經(jīng)驗(yàn)法則：選擇截留分子量值約為要保留的大分子分子量的一半，以獲得至少90%的保留率。2，正確選擇扁平寬度透析袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量。較小的透析管透析更快；較大的透析管因擴(kuò)散距離較長(zhǎng)透析較慢。為易于使用，建議使用總長(zhǎng)（包括閉合夾和頂部空間）為大約10-15厘米的透析袋。3，透

吐溫80的用法及用量分析2023/07/20: 吐溫80又稱聚山梨酯80，是一種非離子型表面活化劑及乳化劑，化學(xué)式為C24H44O6(C2H4O)n。易溶于水，溶于乙醇、植物油、乙酸乙醇、甲醇、甲苯，不溶于礦物油。低溫時(shí)成膠裝，受熱后復(fù)原；有特臭，味微苦。用法及用量分析：1、吐溫80為油酸酯，有很好的乳化作用，一般用作乳化劑、潤(rùn)濕劑。建議用量：1%-2%（僅供參考，以實(shí)際應(yīng)用為準(zhǔn)）。2、吐溫80是制劑學(xué)上常用的增溶劑，根據(jù)有關(guān)參考文獻(xiàn)表示一般用量為1%-2%。3、吐溫80加入量：如果按1%濃度計(jì)算，所需吐溫80加入量為10ml；同理，若按2%

PBS怎么配？2023/07/19: PBS作為生物實(shí)驗(yàn)中的試劑，PBS是磷酸緩沖鹽溶液，一般作為溶劑，起溶解保護(hù)試劑的作用。一般的有活性的生物制劑都要用它來(lái)稀釋。它具有鹽平衡、可調(diào)整適宜pH、可以緩沖pH等特點(diǎn)。PBS、蒸餾水和生理鹽水三種溶劑該怎么選擇呢？蒸餾水不具有鹽平衡作用，可以破壞生物蛋白的結(jié)構(gòu)及生物特性；而生理鹽水不具有調(diào)整pH的作用，對(duì)完整的、具有活性的物質(zhì)不能保證其在最適條件下參與生物反應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)室也常見(jiàn)PB、PBST溶液。PB溶液的成分通常有磷酸鈉和磷酸鉀。若只是化學(xué)反應(yīng),用PB溶液就行。在PB的基礎(chǔ)上按照一定比例

引物在 PCR 反應(yīng)中的作用是什么？2023/07/18: 引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結(jié)合在核酸鏈上與之互補(bǔ)的區(qū)域回，其功能是作為核苷酸答聚合作用的起始點(diǎn)，核酸聚合酶可由其3′端開(kāi)始合成新的核酸鏈。體外人工設(shè)計(jì)的引物被廣泛用于聚合酶鏈反應(yīng)、測(cè)序和探針合成等。PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。

新生牛血清的成分2023/07/17: 1.蛋白質(zhì)新生牛血清中的主要成份中除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外，主要還有白蛋白，球蛋白。纖維粘連素細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞附著;胎牛血清中含胎球蛋白促細(xì)胞依附;轉(zhuǎn)鐵蛋白可以結(jié)合鐵離子，減少其毒性會(huì)被細(xì)胞利用的可能。2.多肽血小板促生長(zhǎng)因子能促細(xì)胞分裂，據(jù)專人介紹新生牛血清是多肽家族的重要成員，多肽擁有著重要的作用，比如它可以促進(jìn)細(xì)胞增殖因子數(shù)量的增加，不僅如此，它還能夠促成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子以及神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等，據(jù)悉，雖然從數(shù)量上來(lái)看新生牛血清的含量比例少，但它能夠促進(jìn)細(xì)胞的增長(zhǎng)。3.激

DNA瓊脂糖凝膠電泳時(shí)上樣緩沖液的量應(yīng)該為多少？2023/07/14: 瓊脂糖凝膠電泳上樣量，一般取決于瓊脂糖凝膠的大小和濃度，以及DNA的濃度和純度等因素。通常而言，瓊脂糖凝膠電泳的上樣量應(yīng)該在0.1至1.0μg之間。如果上樣量太低，DNA條帶可能會(huì)過(guò)于模糊且難以讀取，無(wú)法得出準(zhǔn)確的結(jié)果；而如果上樣量太高，則會(huì)使得DNA條帶過(guò)于密集而無(wú)法區(qū)分，也會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，確定適當(dāng)?shù)纳蠘恿渴沁M(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵因素之一。下面是一些常見(jiàn)的上樣量推薦：1.載體DNA：10ng至1μg2.PCR產(chǎn)物：10ng至1μg3.高分子DNA：約50-100ng4.短DNA

瓊脂粉的來(lái)源和用途2023/07/13: 瓊脂粉是一種半乳糖單元的復(fù)合硫酸化聚合物，從軟骨球藻、裙帶菜和相關(guān)紅藻中提取。它被用作制備微生物固體培養(yǎng)基的凝膠，用作散裝瀉藥，用于制備乳劑，并用作免疫擴(kuò)散和免疫電泳的支持介質(zhì)。瓊脂粉無(wú)臭或有輕微的特征氣味。非圓形瓊脂通常以由薄的、膜狀的、凝集的條帶或切割的、片狀的或粒狀的形式形成。它可能是淡黃橙色、黃灰色至淡黃色或無(wú)色。潮濕時(shí)堅(jiān)硬，干燥時(shí)易碎。粉狀瓊脂為白色至黃白色或淡黃色。當(dāng)在顯微鏡下在水中檢查時(shí)，瓊脂粉末看起來(lái)更透明。在水合氯醛溶液中，粉末狀瓊脂比水更透明，或多或少呈顆粒狀、條紋狀、棱角狀

如何挑選合適的ELISA試劑盒2023/07/12: 首先，需要明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖亲霭袠?biāo)功能性測(cè)定還是含量檢測(cè)。功能性測(cè)定一般是酶及底物的反應(yīng)，對(duì)生物活性的分析。而Elisa專用于靶標(biāo)分子的含量檢測(cè)。其次，如果所研究指標(biāo)為蛋白質(zhì)或多肽，需查詢對(duì)應(yīng)的的UniprotID，在選擇產(chǎn)品時(shí)同時(shí)核對(duì)指標(biāo)名和UniprotID；如果所研究指標(biāo)為小分子半抗原，此類化學(xué)物質(zhì)需查詢對(duì)應(yīng)的CAS號(hào)，結(jié)合CAS號(hào)選擇需要的產(chǎn)品。然后，還需要根據(jù)已有文獻(xiàn)查詢或預(yù)判靶標(biāo)在生物樣本中的有無(wú)或含量區(qū)間，針對(duì)性選擇靈敏度足夠的試劑盒，同時(shí)和廠商確認(rèn)試劑盒的適用樣本是否包含客戶自己的實(shí)

如何鋪出均勻的細(xì)胞培養(yǎng)板？2023/07/10: 細(xì)胞居中和細(xì)胞邊緣化從經(jīng)濟(jì)和高效的角度來(lái)說(shuō)，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進(jìn)行藥物對(duì)待測(cè)細(xì)胞半抑制率（IC50）測(cè)試時(shí)，通常使用96孔板，一方面可以設(shè)置濃度梯度；另外還可一次性測(cè)多個(gè)藥物，減少實(shí)驗(yàn)誤差。收集細(xì)胞要混勻消化后的細(xì)胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細(xì)胞團(tuán)充分地吹打開(kāi)，最好是單個(gè)的狀態(tài)，但同時(shí)又不能損傷細(xì)胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000rpm/min即可。離心力太大細(xì)胞容易抱團(tuán)，然后懸浮離心后的細(xì)胞團(tuán)時(shí)，先不要把所有液體都加進(jìn)，一般先加2mL液體

如何用PBS清洗細(xì)胞？2023/07/06: 一：取材撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮2～3mm2置于載玻片上，用吸管加6mmoI的PBS緩沖液兩滴，使材料充分浸入到液體中，處理約5分鐘。（撕取的材料大小適中，且為內(nèi)表皮）二：去垢處理用吸水紙吸凈浸泡材料的PBS緩沖液，加2～3滴37°C預(yù)溫的去垢劑1%TritonX-100，使液體充分浸泡材料，并立即放入37C水浴鍋中處理15分鐘。（吸水紙不要直接在材料上面吸，以免帶丟材料，去垢處理過(guò)程中不要讓材料干燥）三：沖洗吸去1%Triton，用6mmol的PBS緩沖液輕輕沖洗，反復(fù)兩至三次。四：固定用吸水紙吸盡

超濾管的使用2023/07/05: 1）.濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸（DNA/RNA樣本，單鏈或雙鏈）、噬菌體等微生物樣本2）.純化組織培養(yǎng)提取液或細(xì)胞裂解液中的大分子成分，去除反應(yīng)液中的引物、接頭或分子標(biāo)記，在HPLC前去除蛋白質(zhì)。3）.除鹽，緩沖液更換，或滲濾。使用方法：1）.將超濾內(nèi)管插入所提供的一個(gè)微量離心管中。2）.向超濾管內(nèi)管中加入不超過(guò)500μL的樣本,并蓋上蓋子。3）.將蓋好蓋子的超濾管放入離心轉(zhuǎn)子中，讓蓋子的連接帶朝著轉(zhuǎn)子的中央;用一個(gè)類似的超濾管平衡。4）.以14,000xg離心約10-30分鐘,具體時(shí)間取決

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