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細胞凋亡檢測實驗原理2024/04/07

細胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個體和生存中起著非常重要的作用。它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學和生物化學特征。在形態(tài)上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸，細胞變園，細胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細胞膜進一步融合將細胞分成多個完整包裹的凋亡小體，凋亡小體最后被吞噬細胞吞噬消化。在凋亡過程中細胞內(nèi)容物

超濾管的使用方法有哪些？2024/04/01

1、預(yù)處理新超濾管：使用前用純水浸泡，冰箱預(yù)冷10min。然后將水倒出，置于冰上預(yù)冷2-5min，加樣。舊超濾管：倒出管內(nèi)的乙醇浸泡液，用純水沖洗干凈10遍（注意水流速盡量平緩，防止沖破濾膜），置于冰上預(yù)冷2-5min，加樣。2、加樣如超濾管中有少許殘留水可將超濾管內(nèi)管倒置1000×g離心1min，移液槍移取適量樣本加入超濾管中。3、離心配平，12000×g離心（15-30min），等達到目的轉(zhuǎn)速后方可離開。4、樣本收集外管濾液為除去部分蛋白的樣本上清，如需取濃縮后樣本用于其他實驗，則另取外管，

如何正確使用封板膜？2024/03/25

一、準備在使用封板膜前，要先清理需要封板的表面，確保表面干凈，不沾有灰塵、油污和水分。最好使用干凈的軟布或絨布擦拭表面，如果表面難以清潔，可以先用清洗劑進行清洗。二、使用過程1、將封板膜取出，留出約10cm左右的長度，貼在需要封板的表面上；2、緩緩地將封板膜按照表面的輪廓向下貼，同時慢慢剝離保護紙，將封板膜按壓在表面上；3、在封板膜的表面使用橡皮擦輕輕擦拭，將少量氣泡排出來，注意不要用力過猛，避免將氣泡擠到封板膜的下面；4、當封板膜整體貼滿表面后，再用刮板或硬卡片將封板膜表面多余的氣泡排除。三、

B27無血清培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基的區(qū)別？2024/03/20

B27無血清培養(yǎng)基是一種常用于體外細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基。提供一種不含動物血清成分的培養(yǎng)基，以避免可能存在的病原體污染和其他質(zhì)量問題。B27無血清培養(yǎng)基的配方包括多種營養(yǎng)元素、維生素、氨基酸和生長因子，可以用于支持多種類型的細胞生長和分化。與普通培養(yǎng)基之間的區(qū)別：1、可以消除動物源性物質(zhì)引起的潛在風險。在含血清培養(yǎng)基中，常常會存在病毒、細菌和真菌等微生物，它們會對細胞的健康造成威脅。使用B27無血清培養(yǎng)基可以更大程度地減少這些風險。2、還可以提高細胞培養(yǎng)的一致性。傳統(tǒng)的含血清培養(yǎng)基中，血清的來源和成分

干型透析袋的使用和注意事項2024/03/18

使用方法：①把透析袋剪成適當長度(10cm左右)的小段。②用60℃去離子水中水浴30分鐘-1小時，再用去離子水膜內(nèi)沖洗3次。③使用時，一端用下沉透析袋夾子夾緊，灌滿水后，用手指適當加壓，檢查不漏，方可裝入樣品。通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，袋外的水和緩沖液過量進入袋內(nèi)將袋漲破。裝完樣品后，用上浮夾子夾緊袋口，可在袋內(nèi)放一玻璃珠，以使透析袋處于懸浮狀態(tài)，即可進行透析。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。注意事

細胞篩網(wǎng)的使用方法2024/03/11

準備濾器：選擇合適的細胞篩網(wǎng)，并根據(jù)需要在濾器上加上濾紙，使其更容易使用。準備細胞懸液或培養(yǎng)基：將細胞懸液或培養(yǎng)基倒入容器中，并加入需要的藥物、酶、抗生素等。過濾細胞：將濾器輕輕地壓在溫和的細胞懸液或培養(yǎng)基中，讓其均勻地經(jīng)過細胞篩網(wǎng)的孔。收集過濾的細胞：過濾后的細胞可以直接通篩網(wǎng)被收集或者用無菌的器具從容器中進行收集。細胞培養(yǎng)：若需要培養(yǎng)篩選的細胞，則將其收集到未被污染的細胞培養(yǎng)基中，并按照培養(yǎng)基配方進行培養(yǎng)。此外，細胞篩網(wǎng)的使用還需注意以下幾點：1.細胞篩網(wǎng)的類型。細胞篩網(wǎng)通常分為單層和多層兩

蛋白酶K的原理和應(yīng)用2024/03/05

新型蛋白酶K（ProteinaseK）的基因序列來源于林伯氏白色念球菌（Tritirachiumalbumlimber）的蛋白酶K基因，經(jīng)過了基因定點突變和酵母細胞分泌表達、色譜純化。經(jīng)過蛋白質(zhì)工程化的新型蛋白酶K提高了比活性和純度，不含有細菌內(nèi)毒素，應(yīng)用范圍比天然蛋白酶K更廣泛。新型蛋白酶K是現(xiàn)有蛋白酶中活性最高的品種，在pH4到pH12的條件下均有活性，反應(yīng)溫度介于0～75oC之間。在常用濃度的SDS、尿素或EDTA存在時亦很穩(wěn)定。酶切割位點在脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，可以用于

不同類型透析袋的區(qū)別2024/02/26

一、即用型透析袋即用型透析袋的制造過程沒有重金屬污染及硫化物，無需預(yù)處理，只需用去離子水清洗即可使用，滿足對截留分子量精確性和膜純度的應(yīng)用。1.韌性膜材料，不易破損2.雜質(zhì)含量極少，可無需預(yù)處理，只需用去離子水清洗即可使用3.孔徑標準均一4.對溶質(zhì)的吸附性小5.可選分子量范圍廣100-3000006.多種扁平寬度可選7.生物技術(shù)膜，不含硫化物及金屬雜質(zhì)二、普通干型透析袋1.PH穩(wěn)定范圍:5-92.污染物水平:硫化物3.化學兼容性:與很多鹽兼容，比如CaCl2,(NH4)2SO4；還可與分子生物學

牛血清白蛋白在實驗中的作用2024/02/18

牛血清白蛋白（BSA）在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用,接下來為大家介紹其中兩種作用。牛血清白蛋白測定蛋白濃度：按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標準）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中，在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液，室溫放置2小時。用酶標儀測定蛋白濃度：測定A562，依標準曲線算出蛋白濃度。牛血清白蛋白SDS-PA

配置瓊脂糖凝膠的方法2024/01/29

1.用于制備膠液的錐形瓶體積應(yīng)為膠液體積的2-4倍，緩慢向緩沖液中加入瓊脂糖，邊加邊攪拌，防止瓊脂糖聚集。記錄瓶體和溶液總重量。2.微波爐高火加熱30s，根據(jù)配制的溶液體積調(diào)整加熱時間。加熱時間與微波爐、瓶體大小和瓊脂糖濃度有關(guān)。3.搖勻瓊脂糖溶液。4.再次高火加熱30s，搖勻瓊脂糖溶液。5.將溶液再次放回微波爐，高火加熱至沸騰（大約10-35s）。接觸移動時瓊脂糖膠液可能會劇烈沸騰，小心操作，避免燙傷。從微波爐拿出后，室溫冷卻1-2min，輕輕搖晃使液體里的氣泡溢出。6.重新放回微波爐，高火加

配置培養(yǎng)基過程中常見的問題2024/01/22

一、培養(yǎng)基顏色不正確（1）含有酸堿指示劑的培養(yǎng)基，若顏色不正確，通常是由于pH不正確導致的，加熱過度、錯誤的滅菌方式等都會導致此項問題。（2）加熱過度導致某些成分分解或糖焦化，如SC培養(yǎng)基(SC增菌液)加熱過度會變紅，含糖量高的培養(yǎng)基，加熱過度通常會出現(xiàn)顏色加深，呈焦糖色或棕褐色。（3）某些成分變質(zhì)，如血液久置易變黑，制成的平板顏色偏棕黑色。二、培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀（1）某些培養(yǎng)基原本就含有不溶性沉淀，如TTB，MC培養(yǎng)基等，配方中含有大量不溶性碳酸鈣。（2）滅菌前未充分溶解，如Fraser培養(yǎng)基中含

冰凍切片免疫熒光實驗2024/01/15

1、冰凍切片固定冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動洗滌3次，每次5分鐘。2、抗原修復將切片浸沒在升滿EDTA抗原修復緩沖液（PH8.0）的修復盆中，置于微波爐內(nèi)進行抗原修復，修復條件：中火8min至沸——?；?min保溫——中低火7min（整個過程需防止修復液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后，將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上，晃動洗滌3次，每次5min。3、畫圈血清封閉切片稍甩干后，用組化筆在組織周圍畫圈，滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑A

RNA提取原理與詳細步驟2024/01/08

原理用Trizol的溶液提取，將總RNA與DNA和蛋白質(zhì)分離。Trizol是一種酸性溶液，含有硫氰酸胍(GITC)、苯酚和氯仿。GITC不可逆地使蛋白質(zhì)和RNase變性。隨后進行離心。在酸性條件下，總RNA保留在上層水相中，而大部分DNA和蛋白質(zhì)保留在中間相或下層有機相中。然后通過用異丙醇沉淀回收總RNA。RNase酶可以通過加入吡咯碳酸二乙酯(DEPC)來滅活。步驟組織：每100毫克新鮮組織加入1毫升TRIzol試劑，使用無菌手術(shù)刀在冰上切碎，并用無菌勻漿器或其他設(shè)備勻漿。細胞：如果是細胞培養(yǎng)

蛋白酶K的作用及保存方法2024/01/02

作用：蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增強探針與靶核酸結(jié)合的機會，提高雜交信號。但蛋白酶K濃度過高、消化時間過長或孵育溫度過高時，都會對細胞結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導致組織切片脫落，細胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以代替蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達到理想的染色效果。保存方法：保存在-20℃的冰箱里，避免反復凍融，有效保證12個月。孵育溫度為55-65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時，理想孵育時間為2

免疫熒光實驗中細胞爬片如何使用2023/12/25

首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤干，然后泡酸過夜，撈酸后流水洗凈，烤干，置于器皿中高壓滅菌，然后再烤箱中大約8小時烤干備用。爬片可以在培養(yǎng)皿六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養(yǎng)皿中爬。一為節(jié)約經(jīng)費（培養(yǎng)皿可以重復利用）二來覺得培養(yǎng)皿口大，操作比較方便。培養(yǎng)皿消毒同上，消毒時記得消兩把鑷子具體操作是：用胰酶消化好細胞，充分吹打，使之成單細胞懸液（注意：這一點很重要，關(guān)系到將來爬出來片子的質(zhì)量）取出消毒的培養(yǎng)皿，可以先加少量培養(yǎng)基（以使玻片與

胎牛血清的功能有哪些？2023/12/20

胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。胎牛血清的功能：胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必需的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)

胰蛋白酶如何在細胞培養(yǎng)中發(fā)揮作用2023/12/15

胰蛋白酶是一種消化酶，可分解許多脊椎動物消化系統(tǒng)中的蛋白質(zhì)。它存在于胰液中。如何在細胞培養(yǎng)中發(fā)揮作用質(zhì)膜上的蛋白質(zhì)負責多種功能，這些功能對于維持細胞的正常生理活動至關(guān)重要。一些質(zhì)膜蛋白（如鈣粘蛋白家族）是粘附蛋白，可作為錨，將細胞骨架蛋白連接到細胞外基質(zhì)。這有助于細胞粘附和細胞遷移。在細胞培養(yǎng)物中，可以將胰蛋白酶添加到培養(yǎng)基中，通過消化粘附蛋白從培養(yǎng)皿表面釋放貼壁細胞。胰蛋白酶還通過消化粘附蛋白從聚集體中釋放細胞。EDTA也與胰蛋白酶一起添加到細胞培養(yǎng)物中，以螯合培養(yǎng)基中的二價離子。鈣和鎂離子可

如何使用細胞分離液2023/12/11

細胞分離液的配置與使用：1、不同濃度分離液的制備:先用9份分離液與1份8.5％NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液稀釋到所需濃度。2、不連續(xù)密度梯度層的制備:先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預(yù)處理可使逐層疊加的液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層比重相差不大時，可將液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。3、裝樣：樣品體積和細胞濃度根據(jù)不同細胞而異，一般加樣體積不宜過大，細胞濃度也

緩沖液配制操作流程2023/12/04

定義：緩沖溶液指的是由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液，能在一定程度上抵消、減輕外加強酸或強堿對溶液酸堿度的影響，從而保持溶液的pH值相對穩(wěn)定。以常用的PBS磷酸緩沖溶液(不含鈣、鎂離子)為例，簡述配制流程實驗材料：NaClNa2HPO4KClKH2PO4Mili-Q水HCl電子天平高溫高壓蒸汽滅菌鍋巴氏吸管方形試劑瓶試劑配方：NaCl8.00g+Na2HPO41.15g+KH2PO40.20g+KCl0.20g+1LMili-Q水=1×PBS實驗流程：根據(jù)配制需求計算需要使用的試劑量，用電

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附）原理及步驟詳解2023/11/29

酶聯(lián)免疫吸附實驗1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據(jù)處理。2.步驟：免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識別待測的抗原（通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標記物，病毒，細菌等等，從復雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（HorseradishPeroxidase,HRP）、熒光或放射性