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免疫熒光染色步驟和原理2023/11/22: 免疫熒光染色是一種常用的細(xì)胞和組織學(xué)研究技術(shù)，它利用特異性抗體與標(biāo)記熒光染料結(jié)合，來(lái)檢測(cè)和定位細(xì)胞中的特定蛋白質(zhì)或其他分子。以下是免疫熒光染色的步驟和原理：步驟：1.細(xì)胞或組織樣品的固定：通常使用甲醛或乙醛來(lái)固定細(xì)胞或組織，以保持其形態(tài)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的完整性。2.抗體的孵育：將特異性抗體加入到樣品中，與目標(biāo)蛋白質(zhì)結(jié)合。3.洗滌：用緩沖液洗去未結(jié)合的抗體。4.二抗的孵育：加入熒光標(biāo)記的二抗，與原抗體結(jié)合。5.洗滌：用緩沖液洗去未結(jié)合的二抗。6.熒光顯微鏡觀察：使用熒光顯微鏡觀察樣品，熒光信號(hào)可顯示目

什么是離心管，需要注意哪些事項(xiàng)？2023/11/15: 離心管(CentrifugeTube)是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種實(shí)驗(yàn)耗材，主要用于離心實(shí)驗(yàn)。離心管按大小可分為微量離心管和普通離心管，可以承受高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力，通常微量離心管離心力測(cè)試最高可達(dá)21000g；而普通離心管離心力測(cè)試最高可達(dá)12000g；將樣品中的不同成分按照密度和質(zhì)量進(jìn)行分離。按照材質(zhì)，離心管有塑料離心管，玻璃離心管幾種，有不同的體積和形狀，如0.6ml，1.5ml、2ml，15ml、50ml等。注意事項(xiàng)：1.使用離心管時(shí)，請(qǐng)確保離心管質(zhì)量良好，無(wú)破損或裂紋。2.離心管應(yīng)與離心機(jī)匹配

在試驗(yàn)中ELISA試劑盒的條件挑選2023/11/10: 在ELISA試劑盒中，進(jìn)行各項(xiàng)試驗(yàn)條件的挑選是很重要的，其間包括:（1）固相載體的挑選：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等?，F(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一試驗(yàn)條件下進(jìn)行反響，調(diào)查其顯色反響是否均一性，據(jù)此判明其吸附功能是否良好。（2）包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)刻及其蛋

電泳緩沖液的特點(diǎn)是什么？有何作用？2023/11/03: 電泳緩沖液是核酸、蛋白質(zhì)凝膠電泳系統(tǒng)的一個(gè)重要組成，是電泳場(chǎng)中的導(dǎo)體，也是維持電泳系統(tǒng)恒定pH值的必要條件。常見(jiàn)的核酸電泳緩沖液有:TAE、TBE、TPE和MOPS等。電泳緩沖液的特點(diǎn)：1.TAE是使用緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對(duì)分子質(zhì)量(TBE中電泳時(shí)測(cè)出的相對(duì)分子質(zhì)量會(huì)大于實(shí)際分子質(zhì)量)，且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%，電泳大于13kb的片段時(shí)用TAE緩沖液將取得更好的分離效果，此外，回收DNA片段時(shí)也易用TAE緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳。TAE的缺點(diǎn)是

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的特征有哪些？2023/11/01: 定義：最初，人們只是運(yùn)用脂質(zhì)體模擬生物膜，研究膜的構(gòu)造及功能，從而發(fā)現(xiàn)了膜的融合及內(nèi)吞作用，因而可用作外源物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的載體。特性：陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過(guò)靜電作用將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA一脂復(fù)合體，也能被表面帶負(fù)電荷的細(xì)胞膜吸附，再通過(guò)膜的融合或細(xì)胞的內(nèi)吞作用，偶爾也通過(guò)直接滲透作用，DNA傳遞進(jìn)入細(xì)胞，形成包涵體或進(jìn)入溶酶體其中一小部分DNA能從包涵體內(nèi)釋放，并進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，再進(jìn)一步進(jìn)入核內(nèi)轉(zhuǎn)錄、表達(dá)。已有眾多的文獻(xiàn)報(bào)道，脂質(zhì)體本身會(huì)參與細(xì)胞生理活動(dòng),引起基因表

選擇透析袋截留分子量（MWCO）標(biāo)準(zhǔn)2023/10/27: 透析袋分子量透析是小分子可通過(guò)半透膜從高濃度一側(cè)擴(kuò)散到低濃度一側(cè)直至膜兩側(cè)濃度達(dá)到平衡的簡(jiǎn)單擴(kuò)散過(guò)程。由于多孔膜有選擇性地允許小分子通過(guò)，而保留大分子，所以透析可以根據(jù)溶質(zhì)大小起到分離作用?？赏ㄟ^(guò)調(diào)控透析條件使透析應(yīng)用得到理想的結(jié)果。最佳截留分子量(MWCO)取決于具體的應(yīng)用。由于透析膜由海綿狀交聯(lián)聚合物組成，代表膜孔徑的截留分子量（MWCO）是一個(gè)間接衡量膜分離性能的參數(shù)。更準(zhǔn)確的說(shuō)，膜的截留分子量可定義為截留率至為少90%的溶質(zhì)的分子量。由于溶質(zhì)的滲透特性取決于分子形狀、水合化程度、離子電荷

細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)DMSO的用途有哪些？2023/10/25: 二甲基亞砜簡(jiǎn)稱DMSO。是一種含硫的有機(jī)物，能溶于乙醇、丙醇、苯和l仿等有機(jī)物。常溫下為無(wú)色無(wú)臭的透明液體。細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中，DMSO一般用作藥物溶劑，要求染毒時(shí)其濃度不超過(guò)0.1%。也配制成高濃度的母液，稀釋時(shí)取少量到培養(yǎng)基中，而細(xì)胞凍存時(shí)DMSO的濃度一般為10%。另外DMASO也是一種一種滲透性保護(hù)劑，能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn)，減少冰晶的形成，減輕自由基對(duì)細(xì)胞損害，改變生物膜對(duì)電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性。二甲基亞砜DMSO的用途：1、DMSO廣泛應(yīng)用在人、動(dòng)物細(xì)胞株及細(xì)菌噬菌體λ的低溫防護(hù)

細(xì)胞培養(yǎng)板和酶標(biāo)板的區(qū)別2023/10/20: 什么是酶標(biāo)板，它是一種配合在酶標(biāo)儀上，用來(lái)做酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)的器材。雖然它看上去只是一塊普通的有孔的塑料板，但是在酶免疫測(cè)定中卻是一個(gè)部分。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，簡(jiǎn)稱ELISA，是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或者抗體吸附在固相載體表面，并保持其免疫活性。然后抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的

如何鑒別胎牛血清、新生牛血清和小牛血清2023/10/17: 牛血清、新牛血清跟小牛血清都是屬于牛血清，但應(yīng)用與應(yīng)用上依然存在差別。因此，區(qū)別適合自己血清蛋白是很重要的，那么除了觀查形象化的顏色別的物理特性，我們也能怎么區(qū)分呢？通過(guò)分析，美國(guó)看到了區(qū)別再生牛血清和胎牛血清的象征?？蒲腥藛T搜集了39個(gè)胎牛血清和32個(gè)再生牛血清樣版。他們來(lái)源于五家國(guó)際性血清蛋白工業(yè)生產(chǎn)委員會(huì)(ISIA)經(jīng)銷商，分別為美國(guó)、墨西哥、澳大利亞、新西蘭和哥斯達(dá)黎加。在各種樣本中，55個(gè)樣版交到第三方外包裝，單盲檢驗(yàn)，16個(gè)樣版直接使用非盲檢驗(yàn)。檢驗(yàn)指標(biāo)是血清蛋白生化指標(biāo)。請(qǐng)見(jiàn)《血清

ELISA實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)：降低ELISA背景的四點(diǎn)tips2023/10/16: 在ELISA試劑盒操作中，我們都認(rèn)為ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單，不外乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封閉。然而，即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉，如果做得不太好，也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。背景噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景，下面有一些tips。一、洗滌很重要洗滌步驟看似很無(wú)聊，其實(shí)很重要，因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要，可

移液吸頭可分為哪幾類？2023/10/09: 吸頭作為與移液器配合使用的耗材，一般根據(jù)應(yīng)用的不同可分為：標(biāo)準(zhǔn)吸頭、濾芯吸頭、低吸附吸頭、自動(dòng)工作站吸頭、寬口吸頭。1.標(biāo)準(zhǔn)吸頭是應(yīng)用最為廣泛的吸頭，幾乎所有移液操作可使用普通吸頭，這是吸頭中實(shí)惠的一類。2.濾芯吸頭是為了避免交叉污染而設(shè)計(jì)的一種耗材，濾芯吸頭移取的樣品，不能進(jìn)入移液器的內(nèi)部，從而起到保護(hù)移液器的部件不被污染和腐蝕，更重要的是也可以保證樣品間不會(huì)有交叉污染，常用于分子生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、病毒學(xué)等實(shí)驗(yàn)中。3.對(duì)于靈敏度要求高的實(shí)驗(yàn)，或者易殘留的珍貴樣品或試劑，可以選擇低吸附吸頭來(lái)提高回

細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)知識(shí)2023/09/22: 何為細(xì)胞培養(yǎng)？細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行，在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中，把細(xì)胞處理好，根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞就像花花草草，尤其是細(xì)胞株基本每天都要觀察、打理的哦！培養(yǎng)的細(xì)胞從哪里來(lái)？1.細(xì)胞株簡(jiǎn)單說(shuō)就是買的或送的。2.原代細(xì)胞組織或血液中提取的。一般細(xì)胞株可以連續(xù)傳代，而原代細(xì)胞養(yǎng)著養(yǎng)著就掛了。培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式有哪些？1.貼壁生長(zhǎng)必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng)。見(jiàn)于各種腫瘤細(xì)胞等。（你把培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶底朝上，細(xì)

膠原酶如何配置及使用方法2023/09/19: 膠原酶的化學(xué)名為膠原蛋白水解酶，它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu)，而不損傷其他蛋白質(zhì)和組織。膠原酶的化學(xué)本質(zhì)是一種蛋白質(zhì)，因此它對(duì)溫度、PH和導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感，極易受到外界條件的影響而改變其本身的構(gòu)象和性質(zhì)。配置：膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配置、消毒滅菌和儲(chǔ)藏。注意：因?yàn)镮型膠原酶分子顆粒比胰酶大，不容易過(guò)濾，因此可以用蔡式濾器過(guò)濾除菌。鈣、鎂離子和血清成分不會(huì)影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培養(yǎng)液配置。

PBS磷酸鹽緩沖液的配置方法及作用2023/09/14: PBS緩沖液，是生物化學(xué)研究中使用最為廣泛的一種緩沖液，主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaC和KCI，一般作為溶劑，起溶解保護(hù)試劑的作用。由于Na2HPO和KH2PO4有二級(jí)解離，緩沖的PH值范圍很廣，而NaCI和KCI主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補(bǔ)加1mmoI/LCaCI2和0.5mmoI/LMgCI2，以提供二價(jià)陽(yáng)離子。配置方法：稱取8.0gNaCI、0.2gKCI、1.44gNa2HPO4、0.24gKH2PO4溶于800ml蒸餾水中，用HCI調(diào)節(jié)溶液至7.4，

ELISA試劑盒的應(yīng)用和類型2023/09/13: 一、ELISA是什么？ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay,ELISA)的簡(jiǎn)稱。它是在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù)。ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級(jí)檢測(cè)抗體（primarydetectionAb），形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶

如何正確使用細(xì)胞過(guò)濾器？2023/09/11: 使用方法：1.準(zhǔn)備濾器：選擇一個(gè)合適的細(xì)胞篩網(wǎng)，并根據(jù)需要在濾器上加上濾紙，使其更容易使用。2.準(zhǔn)備細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基：將細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基倒入容器中，并加入需要的藥物、酶、抗生素等。3.過(guò)濾細(xì)胞：將濾器輕輕地壓在溫和的細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基中，讓其均勻地經(jīng)過(guò)細(xì)胞篩網(wǎng)的孔。4.收集過(guò)濾的細(xì)胞：過(guò)濾后的細(xì)胞可以直接通篩網(wǎng)被收集或者用無(wú)菌的器具從容器中進(jìn)行收集。5.細(xì)胞培養(yǎng)：若需要培養(yǎng)篩選的細(xì)胞，則將其收集到未被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中，并按照培養(yǎng)基配方進(jìn)行培養(yǎng)。注意事項(xiàng)：對(duì)于貼壁細(xì)胞的篩選，可以將篩網(wǎng)翻過(guò)來(lái)再用含

細(xì)胞培養(yǎng)一般包括哪些操作？2023/09/07: 一、復(fù)蘇1.把凍存管從液氮中取出來(lái)，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來(lái))，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。4.標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。5.3天換一次培

影響PCR結(jié)果的因素有哪些？2023/09/04: （1）引物及濃度：①長(zhǎng)度：15～30bp。②堿基：G+C含量以40%～60%為宜，ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的堿基成串排列。③避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)、兩條引物間互補(bǔ)，特別是3′端的互補(bǔ)。④引物3′端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)。⑤與其它序列無(wú)明顯同源性。⑥濃度為0.1～1μmol或10～100pmol。（2）酶及其濃度：催化一典型的PCR反應(yīng)約需酶量2.5U（指總反應(yīng)體積為100μl時(shí)），濃度過(guò)高可引起非特異性擴(kuò)增，濃度過(guò)低則合成產(chǎn)物量減少。（3）dNTP的質(zhì)量與

移液管如何使用2023/08/31: 1、檢查移液管的管口和尖嘴有無(wú)破損，若有破損則不能使用。2、洗凈儀器，先用自來(lái)水淋洗后，用鉻酸洗滌液浸泡。操作方法如下：用右手拿移液管或吸量管上端合適位置，食指靠近管上口，中指和無(wú)名指張開(kāi)握住移液管外側(cè)，拇指在中指和無(wú)名指中間位置握在移液管內(nèi)側(cè)，小指自然放松；左手拿洗耳球，持握拳式，將吸耳球握在掌中，尖口向下，握緊吸耳球，排出球內(nèi)空氣，將吸耳球尖口插入或緊接在移液管上口，注意不能漏氣。慢慢松開(kāi)左手手指，將洗滌液慢慢吸入管內(nèi)，直至刻度線以上部分，移開(kāi)吸耳球，迅速用右手食指堵住移液管上口，等待片刻后

關(guān)于細(xì)胞因子ELISA試劑盒的試驗(yàn)條件2023/08/30: 細(xì)胞因子ELISA試劑盒液體類標(biāo)本：包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。血清：室溫血液自然凝結(jié)10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。保存過(guò)程中如有沉積形成，應(yīng)再次離心。血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求挑選EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。保存過(guò)程中如有沉積形成，應(yīng)再次離心。尿液：用無(wú)菌管搜集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。保存過(guò)程中如有

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