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上海聯(lián)碩生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第17年
固體樣本處理方法2024/07/04
固體樣本處理方法:固體樣本處理原則:稱取1g的固體樣本,用9g的合適緩沖液溶解,分泌蛋白可以直接離心取上清檢測(cè),細(xì)胞內(nèi)的蛋白,要先收集細(xì)胞,再用合適方法破碎,離心取上清測(cè)試。1、組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取1g組織,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),仔細(xì)收集上清。分裝一份待檢測(cè),其余冷凍備用,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。對(duì)于植物組織,不好勻漿的話,就用液氮研磨,將植物組織放在研缽中,加入適量液氮,充分研磨。
培養(yǎng)皿介紹及使用方法2024/07/02
培養(yǎng)皿是一種用于盛載液體培養(yǎng)液或固體瓊脂培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的玻璃或塑料圓形器皿。培養(yǎng)皿由一個(gè)底和一個(gè)蓋組成,是用作培養(yǎng)細(xì)菌的化學(xué)器材,主要材質(zhì)是玻璃或塑料。培養(yǎng)皿質(zhì)地脆弱、易碎,因此在清洗及拿放時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎、輕拿輕放。使用完畢的培養(yǎng)皿最好及時(shí)清洗干凈,存放在安全、固定的位置,防止損壞、摔壞。培養(yǎng)皿的分類根據(jù)培養(yǎng)皿用途的不同可分為細(xì)胞培養(yǎng)皿和細(xì)菌培養(yǎng)皿;根據(jù)制造材料的不同分為塑料培養(yǎng)皿和玻璃培養(yǎng)皿,但進(jìn)口培養(yǎng)皿和一次性培養(yǎng)皿大都是塑料材料。根據(jù)大小的不同通常可分為直徑為35mm,60mm,90mm
冰凍切片包埋劑制備注意事項(xiàng)2024/07/01
操作步驟1、冰凍制片組織常規(guī)取材。2、取材后的組織材塊用干擦布或吸水紙充分吸干表面水分。3、在冷凍切片機(jī)里預(yù)冷的組織托上滴加冷凍切片組織包埋劑。4、待包埋劑底部變白后放上組織材塊。5、迅速放上冷凍錘(低于-25℃),待組織與包埋劑冷凍凝固后取下冷凍錘。6、將組織托夾入切片夾頭,進(jìn)行切片。7、切片完成后可將組織托置于室溫下3-5分鐘解凍后變軟,用水將包埋劑沖洗干凈。8、將組織放入包埋盒,浸入中性緩沖福爾馬林固定液中進(jìn)行組織固定。結(jié)果1、包埋效果良好:包埋劑均勻圍繞組織,冷凍后包埋劑和組織變白,硬度
胎牛血清如何正確存放與解凍2024/06/24
一、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?未拆封的血清,一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃,在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用,若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內(nèi),再放回冷凍。將血清從冷凍冰箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,或通過水浴鍋促使其溶解。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。溶解后建議盡快使用,若長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃,血清中的各種(脂)蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可見的混濁。二、血清中絮狀沉淀
即用型透析袋與干型透析袋的區(qū)別2024/06/21
一、即用型透析袋即用型透析袋的制造過程沒有重金屬污染及硫化物,無需預(yù)處理,只需用去離子水清洗即可使用,滿足對(duì)截留分子量精確性和膜純度的應(yīng)用。1.韌性膜材料,不易破損2.雜質(zhì)含量極少,可無需預(yù)處理,只需用去離子水清洗即可使用3.孔徑標(biāo)準(zhǔn)均一4.對(duì)溶質(zhì)的吸附性小5.可選分子量范圍廣100-3000006.多種扁平寬度可選7.生物技術(shù)膜,不含硫化物及金屬雜質(zhì)二、普通干型透析袋1.PH穩(wěn)定范圍:5-92.污染物水平:硫化物3.化學(xué)兼容性:與很多鹽兼容,比如CaCl2,(NH4)2SO4;還可與分子生物學(xué)
ELISA中必要的三個(gè)試劑2024/06/18
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);(5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應(yīng)終止液。免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個(gè)月以上。有些不完整的試盒,僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,檢測(cè)人員需自行包被。以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過程。固相載體固相載體在ELISA測(cè)定
實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞爬片的準(zhǔn)備及操作2024/06/17
細(xì)胞爬片的準(zhǔn)備1、蓋玻片的選擇:爬片可用一般的蓋玻片,也可用專用細(xì)胞爬片(價(jià)格比較昂貴)但是細(xì)胞貼壁牢固,拍出照片效果好。2、爬片的剪裁:可根據(jù)自己的需要,到染色時(shí)再將之切開,這樣既保證了細(xì)胞均一性,又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色剪裁成合適大小,置于6孔板、12孔板或24孔板。3、爬片的使用前處理:將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再置于無水酒清中浸泡6小時(shí),再用三蒸水沖洗3遍。細(xì)胞爬片的操作1、胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于培養(yǎng)基中。2、加細(xì)胞前,根據(jù)玻片的大小,先在
如何使用細(xì)胞篩網(wǎng)2024/06/13
準(zhǔn)備濾器:選擇合適的細(xì)胞篩網(wǎng),并根據(jù)需要在濾器上加上濾紙,使其更容易使用。準(zhǔn)備細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基:將細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基倒入容器中,并加入需要的藥物、酶、抗生素等。過濾細(xì)胞:將濾器輕輕地壓在溫和的細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基中,讓其均勻地經(jīng)過細(xì)胞篩網(wǎng)的孔。收集過濾的細(xì)胞:過濾后的細(xì)胞可以直接通篩網(wǎng)被收集或者用無菌的器具從容器中進(jìn)行收集。細(xì)胞培養(yǎng):若需要培養(yǎng)篩選的細(xì)胞,則將其收集到未被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中,并按照培養(yǎng)基配方進(jìn)行培養(yǎng)。此外,細(xì)胞篩網(wǎng)的使用還需注意以下幾點(diǎn):1.細(xì)胞篩網(wǎng)的類型。細(xì)胞篩網(wǎng)通常分為單層和多層兩
PBS緩沖液的配置方法及作用2024/06/11
PBS緩沖液,是生物化學(xué)研究中使用最為廣泛的一種緩沖液,主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaC和KCI,一般作為溶劑,起溶解保護(hù)試劑的作用。由于Na2HPO和KH2PO4有二級(jí)解離,緩沖的PH值范圍很廣,而NaCI和KCI主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補(bǔ)加1mmoI/LCaCI2和0.5mmoI/LMgCI2,以提供二價(jià)陽離子。01、配置方法分別稱取8g的NaCI、0.2g的KCI、1.44g的Na2HPO4、0.24g的KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中,使用HCI調(diào)
影響ELISA試劑盒測(cè)定成果的解決辦法2024/06/06
一、類風(fēng)濕因子人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)能夠與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶符號(hào)二抗的FC段直接結(jié)合,然后導(dǎo)致假陽性。解決辦法:1.用F(ab)2替代完好的IgG;2.標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有用);3.檢測(cè)抗原時(shí),能夠用2-巰基yi醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使RF降解。二、補(bǔ)體ELISA系統(tǒng)中固相一抗和符號(hào)二抗過程中,抗體分子發(fā)作變構(gòu),其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來,使C1q能夠?qū)⒍哌B接起來,
什么是細(xì)胞培養(yǎng)?2024/06/04
培養(yǎng)的細(xì)胞從哪里來?1.細(xì)胞株簡(jiǎn)單說就是買的或送的。2.原代細(xì)胞組織或血液中提取的。一般細(xì)胞株可以連續(xù)傳代,而原代細(xì)胞養(yǎng)著養(yǎng)著就掛了。培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式有哪些?1.貼壁生長(zhǎng)必須貼附于支持物表面才能生長(zhǎng)。見于各種腫瘤細(xì)胞等。(你把培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶底朝上,細(xì)胞也不會(huì)掉下來。2.懸浮生長(zhǎng)于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng),不需要貼附于支持物表面。見于各種造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞等。每代貼附生長(zhǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)過程分為:1)游離期:細(xì)胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài),也稱懸浮期。2)貼壁期:細(xì)胞貼附于(膠原、玻璃、塑料、其他細(xì)胞等)。3
即用型RC膜的使用方法2024/05/20
一、膜技術(shù)參數(shù):生物技術(shù)RC膜(再生纖維素),重金屬離子和硫化物含量為痕跡級(jí)別,干型,膜表面有甘油保護(hù)層,使用前用溫水(60℃以內(nèi))浸泡10分鐘左右后,再以蒸餾水沖洗干凈即可。RC膜擁有廣泛的化學(xué)兼容性,能承受弱酸弱堿或稀釋的強(qiáng)酸強(qiáng)堿,絕大部分的醇類物質(zhì)。弱極性有機(jī)物或者稀釋過的強(qiáng)極性有機(jī)物,如DMSO,接觸強(qiáng)極性有機(jī)溶劑可能會(huì)損害RC膜。標(biāo)準(zhǔn)RC膜能適用pH值2-12以及溫度4-132°C之間。二、儲(chǔ)存條件:透析膜表面有甘油保護(hù)層,封放置于4-37°C之間環(huán)境。建議密封放在冰箱冷藏室4℃保存。
尖底離心管與圓底離心管的區(qū)別2024/05/16
尖底離心管和圓底離心管的主要區(qū)別在于它們的底部形狀和設(shè)計(jì),這些差異影響了它們的使用范圍和性能。以下是兩者之間的主要區(qū)別:形狀:①尖底離心管的底部是尖銳的錐形,這種設(shè)計(jì)可以集中樣品的沉淀于底部,從而提高沉淀物在底部的濃度和純度。②圓底離心管的底部是圓形的,有助于平衡樣品的沉淀和防止樣品干燥。用途:①尖底離心管則更適合用于分離較大的固體,如細(xì)胞、組織等,以及在需要進(jìn)行密度梯度收集的情況下。②圓底離心管通常用于沉淀較小的顆粒物或分離液體中的成分,以及在進(jìn)行加熱或高速旋轉(zhuǎn)的實(shí)驗(yàn)時(shí),因?yàn)樗鼈兊拿芊庑暂^好。
影響培養(yǎng)基滅菌效果的因素有哪些2024/05/11
1.營(yíng)養(yǎng)成分的保持濕熱滅菌時(shí),微生物被殺死的同時(shí),培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞,特別是氨基酸和維生素。如在121℃,僅20min,就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞,蛋氨酸和色氨酸也有相當(dāng)數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營(yíng)養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng),造成培養(yǎng)基中原有營(yíng)養(yǎng)成分的數(shù)量變化,因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。2.微生物的耐熱性細(xì)菌芽孢的熱阻較大,滅菌所需要的時(shí)間取決于把細(xì)菌芽孢減少到所規(guī)定數(shù)目的時(shí)間。3.pH值pH值對(duì)微生物的耐熱性影響很大。pH值介于6.0~8.0時(shí),微生
牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中的作用2024/05/10
牛血清白蛋白(BSA)在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,接下來為大家介紹其中兩種作用。牛血清白蛋白測(cè)定蛋白濃度:按50:1配置BCA工作液。10ulC液(蛋白標(biāo)準(zhǔn))+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測(cè)樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,室溫放置2小時(shí)。用酶標(biāo)儀測(cè)定蛋白濃度:測(cè)定A562,依標(biāo)準(zhǔn)曲線算出蛋白濃度。牛血清白蛋白SDS-PA
透析袋的使用技巧2024/04/29
1)除鹽透析時(shí)將高鹽的樣本加入透析袋中,夾緊,用你選擇的保存液進(jìn)行透析,一般在2-8度透析過夜,中間要更換一到兩次透析液,另外透析液體積盡量大些。先把透析液放進(jìn)容器中(容器的直徑小于透析袋長(zhǎng)度),再將夾好的透析袋豎直放進(jìn)去,這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的,幾乎整個(gè)透析袋都與透析液接觸,溶液的置換面積最大,置換速度最快。如果夾子很穩(wěn),那就夾好,先把透析液放進(jìn)容器中(容器的直徑小于透析袋長(zhǎng)度),再將夾好的透析袋豎直放進(jìn)去,這樣透析袋與透析液的接觸面積是最大的,幾乎整個(gè)透析袋都與透析液接觸,溶液
ELISA和WB區(qū)別2024/04/24
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色,待測(cè)的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液,因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù),這是與免疫組化的主要區(qū)別,操作上開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面,從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上,這就是“吸附”的含義。免疫組化和elisa所用到的原理大致相同,只是因?yàn)樗鶛z測(cè)的樣品不同,從而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析,其靈敏度非常高。Westernbolt(蛋白質(zhì)印跡法)先要進(jìn)行SDS-PAGE,
針頭式過濾器的使用方法2024/04/22
1.確保針頭式過濾器的濾芯是干凈和完好的,不存在損壞或污垢。確保濾座和濾頭也是完好的,沒有任何堵塞或損壞。收集所需的工具和材料,如螺絲刀、密封膠、連接管等。2.安裝過濾器:根據(jù)需要選擇合適的位置來安裝過濾器。確保過濾器安裝的位置能夠方便操作和維護(hù),并且不會(huì)對(duì)其他設(shè)備的正常工作造成于擾。根據(jù)管道的直徑,選擇合適的連接管,并使用密封膠確保連接緊密。使用螺絲刀將過濾器固定在合適的位置上。3.準(zhǔn)備濾芯:將濾芯按照過濾要求選擇合適的型號(hào),并確保濾芯的有效期沒有過期。如果需要,將濾芯浸泡在清水中一段時(shí)間以去
爬片的特點(diǎn)與注意事項(xiàng)2024/04/19
爬片又名細(xì)胞爬片,是指讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi),細(xì)胞在玻片上生長(zhǎng),主要用于組織學(xué),免疫組織學(xué),冰凍切片,細(xì)胞涂片,原位雜交等。細(xì)胞爬片特點(diǎn)1.玻片表面經(jīng)過TC處理,雙面均可使用.2.ybeita射線滅菌,保證無菌.3.使用便捷,只需打開包裝,將爬片放入孔板內(nèi),將細(xì)胞懸液滴到爬片上即可培養(yǎng).4.爬片厚度為0.17mm,直徑為8mm/14mm/20mm/25mm.分別適用于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板/24孔細(xì)胞培養(yǎng)板/12孔細(xì)胞培養(yǎng)板/6孔細(xì)胞培養(yǎng)板5.吸附強(qiáng):該玻片表面具有陽離子電荷,可以通過靜電作用吸附冰凍
B27和N2添加劑之間的區(qū)別2024/04/15
B27添加劑和N2添加劑是用于神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)的不同類型的營(yíng)養(yǎng)因子,它們的主要區(qū)別在于成分和用途。B27添加劑是一種無血清培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)因子,含有更多的添加成分,有利于干細(xì)胞的恢復(fù)和維持。它通常用于人的神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。相比之下,N2添加劑是用于神經(jīng)元培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)因子,適用于鼠的神經(jīng)元培養(yǎng)。在某些情況下,如人的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng),可以先用B27添加劑進(jìn)行成球,之后更換為N2添加劑進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)。需要注意的是,Invitrogen出品的B27添加劑有四種類型,建議選用不含視黃酸(RA)的那
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