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ELISA（EIA）酶結(jié)合物的制備2012/07/19: 酶結(jié)合物的制備免疫酶技術(shù)（immunoenzymatictechnique）又稱酶免疫測(cè)定法（enzymeimmunoassay,EIA）,是繼免疫熒光技術(shù)和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的又一種免疫標(biāo)記技術(shù)。它是把抗原抗體的特異性反應(yīng)和酶的催化作用相結(jié)合而建立的。該技術(shù)通過(guò)化學(xué)方法將酶與抗體或抗抗體結(jié)合，形成酶標(biāo)記物，這些酶標(biāo)記物仍保持免疫學(xué)活性和酶的活性，然后將它與相應(yīng)的抗體或抗原起反應(yīng)，形成酶標(biāo)記復(fù)合物，結(jié)合在免疫復(fù)合物上的酶，在遇到相應(yīng)的底物時(shí)，則催化底物產(chǎn)生水解、氧化或還原等反應(yīng)，而生成可溶

ELISA標(biāo)本收集處理方法2012/07/19: 標(biāo)本的收集與保存（上海聯(lián)碩生物科技有限公司，國(guó)內(nèi)免疫學(xué)產(chǎn)品主要供應(yīng)商之一）臨床檢驗(yàn)常見(jiàn)的標(biāo)本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些標(biāo)本收集的時(shí)間、方法和保存都有一定的要求。一、血液標(biāo)本有些生理因素，如吸煙、進(jìn)食、運(yùn)動(dòng)、情緒波動(dòng)、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無(wú)法避免，應(yīng)在標(biāo)本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無(wú)名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應(yīng)無(wú)凍瘡，炎癥，水腫

ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作及技術(shù)服務(wù)的常見(jiàn)問(wèn)題分析 ELISA2012/07/19: 一.ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。1.標(biāo)本的采取和保存大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)

ELISA材料和方法（檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒抗體）2012/07/19: ELISA材料和方法（檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒抗體）1材料（1）聚苯乙烯塑料微量組織培養(yǎng)板：4×10孔，上海塑料三廠生產(chǎn)。（2）包被液（pH值96）：NaHCO3293g、Na2CO3195g，蒸餾水加至1000ml，置4℃保存。（3）洗滌液（001mol/L、pH值74PBS）：NaCl80g、KH2PO402g、Na2HPO4?12H2O29g、KCl02g、Tween2005ml，加蒸餾水至1000ml。（4）保溫液：牛血清白蛋白（BSA）01g、005%PBSTween20100ml，4℃保

ELISA測(cè)定操作規(guī)程2012/07/19: （ELISA測(cè)定操作規(guī)程（以小鼠TNF-a為例）一、原理與意義通過(guò)抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象,對(duì)樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法,用抗小鼠TNF-a單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的TNF-a與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗小鼠TNF-a抗體,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素（Streptavidin）與生物素結(jié)合,加入酶底物鄰苯二胺（OPD）,出現(xiàn)黃色,加終止液濃硫酸,顏色變深,在492nm處測(cè)OD值,TNF-a

ELISA常見(jiàn)問(wèn)題2012/07/19: ELISA常見(jiàn)問(wèn)題ELISA操作常見(jiàn)問(wèn)題ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見(jiàn)ELISA操作過(guò)程中的問(wèn)題一一分析。1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽(yáng)性。因此，國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以

125I標(biāo)記物的純化2012/07/19: 125I標(biāo)記物的純化125I標(biāo)記物反應(yīng)后，標(biāo)記物需進(jìn)行分離純化以除去游離125I-和其他雜質(zhì)。純化標(biāo)記物的方法有利用分子篩機(jī)制的凝膠過(guò)濾法、利用游離125I-與標(biāo)記物分子極性差異進(jìn)行吸附解離的離子交換層析法、按分子所帶電荷和直徑不同在電場(chǎng)作用下分子遷移速率不同進(jìn)行分離純化的聚丙烯酰胺凝膠電泳法（PAGE）以及液相色譜法（HPLC）。以葡聚糖凝膠（如SephadexG-50）柱層析分離純化125I標(biāo)記物為例：標(biāo)記反應(yīng)混合液經(jīng)柱層析時(shí)，需定時(shí)或定量逐管收集層析洗脫液，并用丁計(jì)數(shù)儀測(cè)定每管的放射性強(qiáng)度

125I標(biāo)記物的鑒定2012/07/19: 標(biāo)記物的鑒定1．放射化學(xué)純度是指單位標(biāo)記物中結(jié)合于被標(biāo)記物上的放射性占總放射性的百分率，一般要求大于95％。常用的測(cè)定方法是利用三氯醋酸將待測(cè)樣品中（預(yù)加白蛋白助沉淀）所有蛋白質(zhì)沉淀，離心后測(cè)定沉淀物（標(biāo)記物）的放射性并計(jì)算其占待測(cè)樣品總放射性的百分率。該項(xiàng)參數(shù)還是觀察在貯存期內(nèi)標(biāo)記物脫碘程度的重要指標(biāo)。2．免疫活性（immunoreactivity）指制備的標(biāo)記物與抗體結(jié)合的能力。它反映標(biāo)記過(guò)程中被標(biāo)記物免疫活性受損情況。測(cè)定方法是用少量的標(biāo)記物與過(guò)量抗體反應(yīng)，然后測(cè)定標(biāo)記物與抗體結(jié)合部分的放

DAB-12012/07/19: DAB染色試劑盒（藍(lán)）使用說(shuō)明DABKIT（blue）貨號(hào)：Kit-DAB-1二氨基聯(lián)苯胺（DAB）是辣根過(guò)氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物，反應(yīng)產(chǎn)物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產(chǎn)品采用特殊配方，靈敏度高，背景低，儲(chǔ)存穩(wěn)定，使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)、斑點(diǎn)印跡和生物芯片等的染色和顯色反應(yīng)。包裝試劑規(guī)格A液2ml（20X）B液2ml（20X）C液2ml（20X）用法使用前計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)需要的量（50-100ul每張切片），按1ml蒸餾水加A液，B液和C液各

DAB-22012/07/19: DAB染色試劑盒（黃）使用說(shuō)明DABKIT（yellow）貨號(hào)：Kit-DAB-2二氨基聯(lián)苯胺（DAB）是辣根過(guò)氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物，反應(yīng)產(chǎn)物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產(chǎn)品采用特殊配方，靈敏度高，背景低，儲(chǔ)存穩(wěn)定，使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)、斑點(diǎn)印跡和生物芯片等的染色和顯色反應(yīng)。包裝試劑規(guī)格A液2ml（20X）B液2ml（20X）C液2ml（20X）用法使用前計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)需要的量（50-100ul每張切片），按1ml蒸餾水加A液，B液和C

DAB KIT2012/07/19: DAB染色試劑盒（藍(lán)）使用說(shuō)明DABKIT（blue）貨號(hào)：Kit-DAB-1二氨基聯(lián)苯胺（DAB）是辣根過(guò)氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物，反應(yīng)產(chǎn)物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產(chǎn)品采用特殊配方，靈敏度高，背景低，儲(chǔ)存穩(wěn)定，使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)、斑點(diǎn)印跡和生物芯片等的染色和顯色反應(yīng)。包裝試劑規(guī)格A液2ml（20X）B液2ml（20X）C液2ml（20X）用法使用前計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)需要的量（50-100ul每張切片），按1ml蒸餾水加A液，B液和C液各

ELISA 標(biāo)準(zhǔn)操作及技術(shù)服務(wù)的常見(jiàn)問(wèn)題分析2012/07/19: 一.ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。1.標(biāo)本的采取和保存大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)

ELISA 材料和方法（檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒抗體）2012/07/19: ELISA材料和方法（檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒抗體）1材料（1）聚苯乙烯塑料微量組織培養(yǎng)板：4×10孔，上海塑料三廠生產(chǎn)。（2）包被液（pH值96）：NaHCO3293g、Na2CO3195g，蒸餾水加至1000ml，置4℃保存。（3）洗滌液（001mol/L、pH值74PBS）：NaCl80g、KH2PO402g、Na2HPO4?12H2O29g、KCl02g、Tween2005ml，加蒸餾水至1000ml。（4）保溫液：牛血清白蛋白（BSA）01g、005%PBSTween20100ml，4℃保

ELISA 測(cè)定操作規(guī)程2012/07/19: （ELISA測(cè)定操作規(guī)程（以小鼠TNF-a為例）一、原理與意義通過(guò)抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象,對(duì)樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法,用抗小鼠TNF-a單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的TNF-a與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗小鼠TNF-a抗體,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素（Streptavidin）與生物素結(jié)合,加入酶底物鄰苯二胺（OPD）,出現(xiàn)黃色,加終止液濃硫酸,顏色變深,在492nm處測(cè)OD值,TNF-a

ELISA中非特異性顯色原因分析2012/07/19: 影響ELISA中非特異性顯色的原因很多，如試劑盒特異性、檢驗(yàn)標(biāo)本中含酶標(biāo)記物的干擾物，操作過(guò)程中的問(wèn)題。本文就這一原因作一簡(jiǎn)要分析,以便可以通過(guò)以上措施把非特異顯色降至zui低限度，從而提高檢測(cè)的特異性，并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。【關(guān)鍵詞】ELISA非特異性顯色酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）自1971年自問(wèn)世以來(lái)，以其敏感性高，特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便、安全，而廣泛應(yīng)用于臨床診斷，開(kāi)創(chuàng)了免疫學(xué)診斷的新紀(jì)元。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會(huì)碰到非特異性問(wèn)題，本文就在實(shí)驗(yàn)

ELISA原理與分類2012/07/19: ELISA的原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定傷寒桿菌“O”抗體2012/07/19: 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是用酶標(biāo)記的抗體（或SPA）檢測(cè)未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強(qiáng)。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗(yàn)介紹，酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，見(jiàn)圖91.加抗原使之吸附于固相載體（如塑料反應(yīng)板）2.洗滌加待測(cè)血清3.洗滌加酶標(biāo)記SpA4.洗滌加酶的底物。經(jīng)酶的催化產(chǎn)生有色產(chǎn)物。材料：1.聚乙烯塑料反應(yīng)板（PH9.6時(shí)可吸附蛋白Ag）2.抗原：傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原3.待測(cè)血清4.凍干酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白（HRD—pro

ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作及技術(shù)服務(wù)的常見(jiàn)問(wèn)題分析2012/07/19: 一.ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。1.標(biāo)本的采取和保存大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)

免疫標(biāo)記技術(shù)2012/07/19: 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、熟悉酶免疫技術(shù)基本原理和方法、免疫熒光技術(shù)的基本原理。2、了解酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（間接法）的基本過(guò)程及其作用。目前應(yīng)用zui多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)均在載體表面進(jìn)行，從而簡(jiǎn)化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測(cè)抗原，也可檢測(cè)抗體。實(shí)驗(yàn)方法包括間接法、夾心法及競(jìng)爭(zhēng)法。為了檢測(cè)抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯制成的小管、小盤或小孔）上，然后加被測(cè)溶液，倘樣品中有相應(yīng)抗原，則與抗體在載體表面形成

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）操作要點(diǎn)2012/07/19: 標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)

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