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多克隆抗體的免疫電泳技術(shù)2012/07/19
多克隆抗體的免疫電泳技術(shù)實驗原理】免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術(shù),這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM,IgG,IgA含量水平的實驗方法。在這項實驗技術(shù)中,首先利用蛋白質(zhì)的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離,然后將特異性的抗體引入到與電泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗體的擴(kuò)散過程中,抗原和抗體適當(dāng)比例的結(jié)合會導(dǎo)致沉淀的產(chǎn)生。0.85%鹽不僅可以終止擴(kuò)散過程也可用于洗去未結(jié)合的蛋白,抗原和抗體結(jié)合所形成的沉淀線即可以肉眼觀察也可利用染色方法觀察。免
多克隆抗體的概念及制備流程2012/07/19
多克隆抗體的概念及制備流程多克隆抗體科技名詞定義中文名稱:多克隆抗體英文名稱:polyclonalantibody定義1:由多個B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體,可與不同抗原表位結(jié)合且免疫球蛋白類別各異。所屬學(xué)科:免疫學(xué)(一級學(xué)科);免疫系統(tǒng)(二級學(xué)科);免疫分子(三級學(xué)科)定義2:對特定抗原所產(chǎn)生的一組免疫球蛋白混合物,每種免疫球蛋白能識別抗原分子上的一個表位。所屬學(xué)科:生物化學(xué)與分子生物學(xué)(一級學(xué)科);總論(二級學(xué)科)定義3:多種抗原表位刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)后,機(jī)體產(chǎn)生的針對不同抗原表位的混合抗體。所屬學(xué)
ELISA 的概念、原理、操作步驟2012/07/19
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。(一)ELISA是酶原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多
ELISA 的操作要點2012/07/19
ELISA的操作要點的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。1標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛,體液、分泌物和排泄物)等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作
ELISA 常見問題2012/07/19
ELISA常見問題ELISA操作常見問題ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:①標(biāo)本因素;②試劑因素;③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1.樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽性。因此,國外檢測血清抗體的試劑盒,均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù),以
膠體金技術(shù)2012/07/19
膠體金技術(shù)膠體金技術(shù)是七十年代推出的一門檢測技術(shù),廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域,目前已成為一種常用的檢測技術(shù)。膠體金技術(shù)是以微孔膜作為固相,固相膜有很多孔,像濾紙一樣,常用的固相膜為硝酸纖維素膜,液體可以穿過流出,也可以通過毛細(xì)管作用在膜上向前移動。利用這兩種性能建立了兩種不同類型的快速檢測方法,前者叫免疫滲濾試驗,后者叫免疫層析試驗,兩者統(tǒng)稱為“金標(biāo)”。膠體金也稱金溶膠,是由金鹽被還原成原子金后形成的金顆粒懸液。膠體金具有膠體性質(zhì)、呈色性及光吸收性。因此可通過肉眼觀察結(jié)果,是zui簡單、方便的
酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇2012/04/09
酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇在免疫酶技術(shù)中,首先要確定的變異因素就是酶標(biāo)記物的工作濃度。因為酶標(biāo)記物濃度的很小變化,便可導(dǎo)致試驗結(jié)果產(chǎn)生很大的波動。另外,由于濃度過高,可使非特異性反應(yīng)增加,而濃度過低又可影響測定的敏感性。因此,正式試驗前必須準(zhǔn)確滴定其工作濃度。(一)酶標(biāo)記抗體的滴定方法:將抗原(或抗體)物理吸附于固相載體上,然后將經(jīng)過一系列稀釋的酶標(biāo)抗體(或抗Ig抗體)與吸附在載體上的抗原(或抗體)起反應(yīng),以酶與底物的顯色反應(yīng)程度來確定酶標(biāo)記抗體的效價,或稱工作濃度。(二)步驟:先將抗原(或抗體)
HRP標(biāo)記抗體之簡易過碘酸鈉法2012/04/09
HRP標(biāo)記抗體之簡易過碘酸鈉法本法是以NaIO4先將HRP表面的糖分子氧化成醛基,然后再與Ig上的氨基相結(jié)合,所獲酶標(biāo)記抗體的產(chǎn)率高,將近70%的HRP和Ig結(jié)合,99%的Ig與酶結(jié)合,酶與Ig的活性無重大損失,是目前zui常用的方法。1.原理經(jīng)典的過碘酸鈉法中需采用二硝基氟苯封閉HRP上殘留的α-和ε氨基基以避免酶分子之間的交聯(lián)。后來Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP,從而省去了二硝基氟苯封閉HRP步驟。HRP經(jīng)NaIO4氧化后形成的醛化酶可與抗體分子的氨基相連,形成斯夫氏鹼,
Folin-酚試劑法(又名Lowry)法2011/12/23
Folin-酚試劑法(又名Lowry)法Folin-酚試劑法zui早由Lowry確定了蛋白質(zhì)濃度測定的基本步驟。以后在生物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。這個測定法的優(yōu)點是靈敏度高,比雙縮脲法靈敏得多,缺點是費時間較長,要控制操作時間,標(biāo)準(zhǔn)曲線也不是嚴(yán)格的直線形式,且專一性較差,干擾物質(zhì)多。Folin-酚試劑法同時也適用于酪氨酸和色氨酸的定量測定。此法可測定范圍是20~250mg,檢測的zui低蛋白量可達(dá)5mg。Folin-酚法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的,只是加入了第二種試劑,即Folin—酚試劑,
蛋白質(zhì)的定量測定實驗2011/12/23
蛋白質(zhì)的定量測定實驗蛋白質(zhì)定量是生物化學(xué)、食品檢驗和其它生命學(xué)科zui常涉及的分析內(nèi)容,是臨床診斷的重要指標(biāo),也是許多生物制品、藥物、食品質(zhì)量檢測的重要指標(biāo)。生化實驗中,在對生化藥品,特別是蛋白質(zhì)、酶、某些多肽或蛋白質(zhì)激素的分離純化時,對蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確可靠的定量分析是非常重要的。然而蛋白質(zhì)的種類很多,結(jié)構(gòu)不均一,分子量又相差很大,功能各異,這給建立一個理想而又通用的蛋白質(zhì)定量分析的方法帶來了很大的困難。目前測定蛋白質(zhì)含量的方法有很多種,不同的方法各有其特點。紫外分光光度法是根據(jù)蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)來
凱氏定氮法2011/12/23
凱氏定氮法凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下,用濃硫酸消化樣品將有機(jī)氮都轉(zhuǎn)變成無機(jī)銨鹽,然后在堿性條件下將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨,隨水蒸氣餾出并為過量的酸液吸收,再以標(biāo)準(zhǔn)堿滴定,就可計算出樣品中的氮量。由于蛋白質(zhì)含氮量比較恒定,可由其氮量計算蛋白質(zhì)含量,故此法是經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法。凱氏定氮法是基于待測天然含氮有機(jī)物與濃硫酸共熱時,會被氧化成為二氧化碳和水,然后堿化蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù),即為蛋白質(zhì)含量。1.有機(jī)
血漿置換簡介2011/12/23
血漿置換簡介血漿置換是血液凈化療法之一。其方法是用血細(xì)胞分離機(jī)將全血分離成血漿和細(xì)胞成分(紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板),然后根據(jù)臨床需要,將患者全血漿或血漿的亞成分或某種細(xì)胞成分去除,并用健康人血漿或血漿代用品予以替補(bǔ),以達(dá)到治療疾病的目的。血漿置換液一般是正常人的血漿。如果血漿來源緊張,特別是遇突發(fā)大規(guī)模公共醫(yī)療事件,需要大量血漿時,可以部分使用706代血漿,或者用生理鹽水加白蛋白代替血漿,以緩解血漿來源的不足。血漿置換的量一般根據(jù)病情而定,通常以置換2000ml為宜。若患者病情嚴(yán)重,可反復(fù)做2~
血漿置換的作用機(jī)制及方法2011/12/23
血漿置換的作用機(jī)制及方法1、血漿置換的作用機(jī)制血漿置換可以有效地清除疾病相關(guān)性因子,如抗體、免疫復(fù)合物、同種異體抗原或改變抗原、抗體之間量的比例。這也是PE治療的主要機(jī)制。PE對致病因子的清除要較口服或靜脈內(nèi)使用免疫抑制劑迅速而有效。血漿置換還有非特異性的治療作用,可降低血漿中炎性介質(zhì)如補(bǔ)體產(chǎn)物、纖維蛋白原的濃度,改善相關(guān)癥狀。同時血漿置換還可以增加吞噬細(xì)胞的吞噬功能和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除功能。此外機(jī)體還可從置換液中補(bǔ)充機(jī)體所需物質(zhì)。應(yīng)該說明的是,血漿置換治療不屬于病因治療,因而不影響疾病的基本病理
HRP標(biāo)記抗體之戊二醛二步法2011/12/23
HRP標(biāo)記抗體之戊二醛二步法1.原理戊二醛為一種雙功能試劑,通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結(jié)合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結(jié)合物。2.試劑及器材(1)0.1MPH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS):取0.2MNa2HPO449ml,0.2MNaH2PO451ml,NaCl1.8克,加蒸餾水至200ml。(2)1.25%戊二醛液:取25%戊二醛50ml與PH6.8的PBS1ml混合。(3)1MPH9.5碳酸鹽緩沖液:取1M碳酸鈉3ml與1M碳酸氫鈉7ml混合。(4)0.2M賴氨酸溶液:稱賴氨
抗體的親和層析法純化技術(shù)2011/12/23
抗體的親和層析法純化技術(shù)實驗原理】如圖所示,親和層析的高度選擇性使得從某一初始材料中純化,富集某一含量較低的目的蛋白成為可能,因此親和層析是蛋白質(zhì)分離純化過程中zui有效的方法之一。另外,如果配基與蛋白質(zhì)的親和能力很強(qiáng),也可同時進(jìn)行樣品的濃縮。雖然多數(shù)情況下不需要將抗體與其他血清蛋白分開,但如果一旦需要,蛋白A親和層析是一種非常有效的分離方法。蛋白A是從Staphylococcusaureus中獲得,可與抗體重鏈的Fc片段相結(jié)合?,F(xiàn)在已知蛋白A可與多種哺乳動物的IgG相結(jié)合也可與某些IgM和Ig
ABC-ELISA材料和方法2011/09/27
BAS酶聯(lián)免疫吸附試驗材料和方法(以篩選抗空腸彎曲菌共同抗原的單克隆抗體為例)1材料(1)空腸彎曲菌共同抗原提取物,自制。(2)生物素化羊抗鼠IgG(BSAMG),衛(wèi)生部上海生物制品所。(3)ABC試劑,衛(wèi)生部上海生物制品所。如ABC試劑需自己配制,可按說明要求,將親和素與酶標(biāo)生物素按一定比例混合,置37℃孵育30min后使用。(4)被檢雜交瘤培養(yǎng)物上清液。(5)其他試劑及器材同常規(guī)ELISA法。2方法ABCELISA間接法程序(1)用包被液對空腸彎曲菌共同抗原提取物作適當(dāng)稀釋(1∶16),加入
J.Immuno.:細(xì)菌提高免疫系統(tǒng)的機(jī)制2010/09/15
科學(xué)家很早就知道某些特定類型的細(xì)菌能夠提高免疫系統(tǒng)?,F(xiàn)在芝加哥洛約拉大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)了細(xì)菌執(zhí)行這項重要任務(wù)的機(jī)制。文章的*作者KatherineL.Knight博士和她的同事在6月15日的JournalofImmunology雜志上發(fā)表了這項研究結(jié)果。KatherineL.Knight是洛約拉大學(xué)斯特里奇醫(yī)學(xué)院微生物和免疫學(xué)系主任。人體中含有大量的細(xì)菌,在我們每個人體內(nèi),細(xì)菌細(xì)胞的數(shù)量大約是人體細(xì)胞的10倍。細(xì)菌可以生活在人體皮膚,呼吸道,消化道等地方。單獨消化道就大概是500至1000種細(xì)菌
BMC Immunology :接種天花疫苗或可預(yù)防艾滋病2010/09/15
隨著天花在消失,天花疫苗已經(jīng)在停止接種,但美國科學(xué)家研究發(fā)現(xiàn),接種天花疫苗可能有效預(yù)防艾滋病傳播。如果這一研究成果得到證實,將使艾滋病防治工作進(jìn)入一個新的階段。這一研究是由美國加利福尼亞大學(xué)洛杉磯分校以及喬治·梅森大學(xué)的研究人員共同完成的。研究人員對曾經(jīng)接種天花疫苗和沒有接種天花疫苗的人進(jìn)行了分析對比。結(jié)果發(fā)現(xiàn),接種天花疫苗的人要比沒有接種天花疫苗的人更能有效抵御艾滋病病毒侵襲,后者感染艾滋病病毒的幾率要比前者高5倍。負(fù)責(zé)這項研究的喬治·梅森大學(xué)科學(xué)家雷蒙德·魏因施泰因說,關(guān)于目前艾滋病蔓延的解
水母,太陽能的未來?2010/09/15
據(jù)《大眾科學(xué)》報道,研究人員不再盯著植物作為樣板,轉(zhuǎn)而將目光投向擁有高超光伏轉(zhuǎn)化能力的水母,開發(fā)出提升收獲太陽能的技術(shù)。利用水母身上提取的綠色熒光蛋白(GFP),該小組制作的裝置可用這些“黏黏綠”將紫外光轉(zhuǎn)化為自由電子。該小組制造的電池由在二氧化硅基底上被一個小縫隔開的兩個簡單的鋁電極組成,GFP置于兩電極中間并起連接作用。當(dāng)把紫外光放進(jìn)來的時候,GFP不斷將光子抓走,并產(chǎn)生電子進(jìn)入電路產(chǎn)生電流。同時,GFP非常廉價,不需要昂貴的添加劑或昂貴的加工,此外,它還能被封裝成獨立的不需要外光源的燃料電
衛(wèi)生部副部長:中醫(yī)針灸已正式申遺2010/09/15
扶陽學(xué)派、嶺南羅氏婦科、新安醫(yī)學(xué)、海派醫(yī)學(xué)……這些你以前可能從未聽說的中醫(yī)學(xué)術(shù)流派昨日齊聚廣東,在國家中醫(yī)藥發(fā)展論壇“珠江論壇”上,就中醫(yī)藥發(fā)展展開“百家爭鳴”。記者從會上獲悉,我國中醫(yī)針灸正積極申請世界非物質(zhì)文化遺產(chǎn),申遺方案已提交。衛(wèi)生部副部長、國家中醫(yī)藥管理局局長王國強(qiáng),全國人大外事委員會副主任委員盧鐘鶴,省人大常委會副主任鐘陽勝,副省長雷于藍(lán),省政協(xié)副主席、省衛(wèi)生廳廳長姚志彬等出席會議。衛(wèi)生部副部長、國家中醫(yī)藥管理局局長王國強(qiáng)接受記者采訪時說,衛(wèi)生部正計劃將“中醫(yī)針灸”申請為世界非物質(zhì)文
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