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ELISA實驗關(guān)鍵的必要試劑2025/07/21

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）是一種廣泛應用于生物學、醫(yī)學和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域中的免疫分析技術(shù)。它通過抗原或抗體與固相載體的結(jié)合，以及酶標記物的催化反應，實現(xiàn)對特定分子的檢測和定量?；驹恚篍LISA利用抗原或抗體的特異性結(jié)合，將它們固定在固相載體上（如96孔板），然后通過酶標記的抗體與底物反應產(chǎn)生可檢測信號。這種方法可以實現(xiàn)對微量物質(zhì)的高靈敏度和高特異性檢測。ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）實驗中，三個關(guān)鍵的必要試劑：1.包被抗體/抗原：這是試劑盒的“靈魂”所在。它們預先被固定在96孔板內(nèi)壁上，用作捕

細胞培養(yǎng)過程關(guān)鍵步驟有哪些/2025/07/15

細胞培養(yǎng)是一種在實驗室環(huán)境中維持細胞生長和繁殖的技術(shù)，廣泛應用于生物學研究、藥物開發(fā)和醫(yī)學治療等領(lǐng)域。細胞培養(yǎng)過程包括以下幾個關(guān)鍵步驟：1.原代培養(yǎng)：從供體中取出組織，通過機械或酶消化分離成單個細胞或單一型細胞群。這需要在無菌、適當溫度和營養(yǎng)條件下進行，以確保細胞的生存、生長和繁殖。2.傳代培養(yǎng)：1)當細胞密度達到80%~90%時，移除培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞。2)加入胰蛋白酶消化細胞，使細胞從培養(yǎng)基中分離。3)終止消化后，用含血清的培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，然后吹打形成單細胞懸液。4)根據(jù)需要，將細

PCR（聚合酶鏈式反應）電泳沒有擴增條帶分析2025/07/08

PCR（聚合酶鏈式反應）電泳是一種常用的分子生物學技術(shù)，結(jié)合了PCR擴增和瓊脂糖凝膠電泳來檢測和分析DNA片段。PCR反應電泳中沒有擴增條帶可能由以下幾個原因?qū)е拢?.模板DNA問題：1)模板DNA質(zhì)量差或濃度低，可能導致PCR反應無法有效進行。2)DNA降解或污染，特別是RNA模板，需要確保無酶污染。2.引物設計或質(zhì)量：1)引物特異性不夠，導致非特異性擴增或全不擴增。2)引物二聚體嚴重，影響正常擴增。3.PCR反應條件：1)擴增條件設置不當，如退火溫度不合適、循環(huán)數(shù)不足等。2)反應試劑可能存在

標準物質(zhì)和標準樣品的使用說明2025/07/03

標準物質(zhì)和標準樣品的正確使用?是保證測量量值準確、可靠的重要手段。以下是正確使用標準物質(zhì)和標準樣品的關(guān)鍵步驟和注意事項：一、?選擇合適的標準物質(zhì)?：根據(jù)測量程序的目的，從國家質(zhì)檢總局發(fā)布的“標準物質(zhì)/標準樣品目錄”中選擇與預期應用測試量值水平相適應的標準物質(zhì)。不應選用不確定度超過測量程序所允許水平的標準物質(zhì)。對于實驗室認證、方法驗證、產(chǎn)品評價與仲裁等，可以選用高水平的一級標準物質(zhì)?。二、?仔細閱讀標準物質(zhì)證書?：標準物質(zhì)證書中給出的“標準物質(zhì)的用途”信息應受到使用者的重視。當標準物質(zhì)用于證書中所

競爭法ELISA試劑盒的特性及其檢測步驟2025/06/24

當目標分析物太小而不能用兩種抗體有效地夾住時，可采用競爭性法ELISA。競爭法ELISA適用于確定小分子的濃度，如前列腺素、cAMP、一氧化氮、皮質(zhì)醇等。該法也是將捕獲抗體包被在微孔板上。與夾心法ELISA不同的是，該法不使用標記的檢測抗體，而是使用標記的抗原。標記的抗原可與樣本中的目標抗原競爭性結(jié)合捕獲抗體。樣品中存在的抗原越多，能夠與捕獲抗體結(jié)合的標記抗原就越少。加入底物并產(chǎn)生信號，信號值與樣品中存在的蛋白量成反比。競爭法ELISA雖然適用于小分子抗原的檢測，但它也存在一些缺點：1.靈敏度相

不同類型的ELISA檢測方法的共同階段2025/06/17

ELISA檢測是一種免疫檢測方法，通常用于測量生物樣品中的抗體或抗原，包括蛋白質(zhì)或糖蛋白。像其他免疫檢測法一樣，它們依靠抗體與目標的結(jié)合來促進檢測。通常情況下，ELISA檢測是在96孔板中進行的，這種形式使其適合于一次篩選許多樣品。血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、細胞裂解液、唾液、組織裂解液和尿液都是用于這些檢測的常見樣品類型，但理論上大多數(shù)液體樣品類型都可以使用。然而，重要的是要考慮到一些樣品類型可能包括抑制性因素，如共享相似抗原表位的緩沖液成分或可能損害目標或檢測成分的蛋白酶等因素，這些因素可能

抗體與抗原結(jié)合的特異性保證機制歸納2025/06/10

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應。這種反應既可在機體內(nèi)進行，也可以在機體外進行?？乖贵w反應的過程是經(jīng)過一系列的化學和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。抗體與抗原結(jié)合的特異性主要通過以下機制保證：1.抗體的結(jié)構(gòu)設計：-抗體由可變區(qū)（Variableregion,V區(qū)）和恒定區(qū)（Constantregion,C區(qū)）組成。-V區(qū)中的互補決定區(qū)（ComplementarityDeterminingRegion,CDR）能

原代細胞和傳代細胞有哪些方面的區(qū)別？2025/06/04

細胞是生命的基本單位，根據(jù)細胞培養(yǎng)方式可以分為原代細胞和傳代細胞。原代細胞和傳代細胞有各自特點，充分了解它們優(yōu)缺點，有助于更好的理解兩種細胞類型。原代細胞：原代細胞是直接從組織或器官中分離出來的細胞。它的優(yōu)點在于它們保持著其天然狀態(tài)，并且保留了大部分的原始基因組。因此比細胞系更能反映體內(nèi)細胞的真實情況，例如細胞間相互作用和信號通路。原代細胞除了優(yōu)點之外，也有自己的缺點。原代細胞培養(yǎng)過程有限的生長潛力，在體外培養(yǎng)中通常只能進行有限次數(shù)的傳代，這限制了它們在長期研究中的應用。還有就是實驗結(jié)果差異性，

培養(yǎng)基性能特點及其制備介紹2025/05/27

培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準確性。一、培養(yǎng)基的購置與驗收1.購置從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看，不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。依據(jù)ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養(yǎng)基的供應企業(yè)進行評價后選擇合格的供應商，這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應選擇產(chǎn)品市場信譽

間接法和夾心法 ELSIA結(jié)果判斷方法2025/05/19

ELISA定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標本在該測定系統(tǒng)中有反應。"陰性"則為無反應。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應的強度，其實質(zhì)仍是一個定性試驗。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在

實時熒光定量PCR（ qPCR）探針類方法具體表現(xiàn)2025/05/14

實時熒光定量PCR（Real-timeQuantitativePCR,qPCR）的化學原理主要包括兩種類型：探針類和非探針類。其中，探針類方法具體包括：TaqMan探針法：原理：在PCR反應體系中，加入一對引物的同時再加入一個特異性的熒光探針。探針兩端分別標記一個熒光報告基團和一個淬滅基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收，PCR儀檢測不到熒光信號；PCR擴增時，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，實現(xiàn)

ELISA實驗洗板操作關(guān)鍵環(huán)節(jié)盤點2025/05/07

優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號。不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的結(jié)果。在做ELISA實驗時，洗板有兩種方法：手工法洗板和洗板機洗板。二者沒有本質(zhì)的差別，只要操作合乎要求，均能得到正確、可靠的結(jié)果。手工洗板-重點:手工洗板人為因素比較大，實驗人員必須經(jīng)驗豐富，洗滌次數(shù)要足夠，沖擊力又不要太大，加入的洗液量以剛滿反應孔為限，防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈，同

細胞適應無血清培養(yǎng)基具體分析2025/04/28

血清是細胞培養(yǎng)中重要的添加劑，提供了細胞生產(chǎn)所需的很多營養(yǎng)物質(zhì)，包括蛋白質(zhì)，生長因子，脂類，激素等等。然而，由于血清的成分比較復雜且無法測定，并且不同批次血清成分差異較大，使用無血清培養(yǎng)基可以很好的彌補使用血清帶來的一些問題，也為實驗的標準化和重復性帶來很大的幫助。一、無血清培養(yǎng)基的分類無血清培養(yǎng)基的發(fā)展經(jīng)歷了包括無血清來源，無動物來源，無蛋白和化學成分限定幾個階段。無血清培養(yǎng)基在發(fā)展中逐漸擺脫對天然血清和動物源成分的依賴，在成分上更加的精準，明確和標準化，也可以避免外源物的污染，在生命科學領(lǐng)域

生化試劑性能評價方法2025/04/15

生化試劑性能評價方法：一、主要性能指標1.穩(wěn)定性：指在規(guī)定條件下經(jīng)過一段時間的保存，仍能達到相應的性能指標，如試劑空白吸光度、線性范圍、靈敏度等。2.反應靈敏度：指單位濃度(或活性)的測定物反應所產(chǎn)生的反應度，反應度越高，靈敏度越大。3.精密度：結(jié)果間相互符合的一致程度4.準確度：與參考測定程序結(jié)果的一致性5.線性范圍：在規(guī)定的重復性和線性偏差下，測得的濃度或活性值與設定的濃度或活性值之間的比例關(guān)系的范圍。6.基質(zhì)效應：基質(zhì)指的是樣品中被分析物以外的組分。基質(zhì)常常對分析物的分析過程有顯著的干擾，

PCR反應模板核酸的提取方法2025/04/09

PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈式反應，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時，就可以合成模板DNA的互補鏈，反應完成后，將反應混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復多次，使所需要的DNA片段得到特異性的擴增。PCR反應的關(guān)鍵因素主要有引物的選擇與設計，酶的質(zhì)

ELISA檢測樣本細胞收集處理2025/04/01

利用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）進行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結(jié)果。下面整理了常見細胞樣本處理方法供大家參考。一、如何選擇細胞樣本收集方式：細胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清作為樣本。-目的物是分泌型，主要在胞外，即可選擇細胞培養(yǎng)上清作為樣本，細胞培養(yǎng)上清處理方法相對簡單，取細胞培養(yǎng)上清，10

細胞凍存實驗必看干貨分享2025/03/24

一、實驗原理細胞凍存隨著溫度降低，細胞內(nèi)的酶活性會逐漸降低，到-80℃左右，酶活性幾乎為0，代謝活動停止，可以實現(xiàn)長期保存。然而，隨著溫度降低，細胞內(nèi)外的水分也會“結(jié)冰”并形成冰晶，冰晶能導致細胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。因此常加入冷凍保護劑甘油或二甲基亞砜（DMSO）。DMSO能快速穿透細胞膜進入細胞，降低冰點，延緩凍存過程，同時增加細胞膜的通透性，提高細胞內(nèi)離子濃度，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而達到保護細胞的目的。二、實驗前準備1.細胞

實驗室微生物菌種的分離純化方法2025/03/17

從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。在分子生物學的研究及應用中，不僅需要通過分離純化技術(shù)從混雜的天然微生物群中分離出特定的微生物，而且還必須隨時注意保持微生物純培養(yǎng)物的“純潔”，防止其他微生物的混入。1、用固體培養(yǎng)基分離和純化單個微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞生長群體，稱為菌落。當固體培養(yǎng)基表面眾多菌落連成一片時，便成為菌苔。不同微生物在特定培養(yǎng)基上生長形成的菌落或菌苔一般都具有穩(wěn)定的特征，

實驗中抗體的具體作用功能是什么？2025/03/11

抗體是一種由漿細胞（效應B細胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。抗體能識別特定外來物的一個特征，該外來目標被稱為抗原。1.做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?不一定能通用。流式是用直接標記還是間接標記?如果是直接標記的話，那這個抗體一般不是FITC標記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標記的抗體來直接標記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用其它的標記的話，或者

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）出現(xiàn)灰區(qū)結(jié)果分析2025/03/04

酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。它是應用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA測定的陽性判斷值,通常是將大量陰性和陽性人群的測定數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析后確定的,其確定依據(jù)為判斷結(jié)果的假陽性和假陰性率最di。在陽性判斷值周圍一定范圍內(nèi)之外的測定結(jié)果可歸為可疑,亦即ELISA測定的“灰區(qū)"?！盎覅^(qū)"的大小可用統(tǒng)計學方法確定。測定結(jié)果處于“灰區(qū)"的樣