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ELISA試劑盒曲線問題解析2025/02/25

ELISA試劑盒試驗標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結果，甚至是關系到實驗的成敗。下面將影響ELISA試劑盒曲線問題的原因做了總結：一OD值不正常的可能原因是：1、試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃；2、溫度控制不好，控制正確溫度；3、孵育時間不準確，控制孵育時間；4、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干；5、陽光直射，對著風直接吹，避風避光；6、酶標儀的波長錯誤，酶標儀的波長450nm；7、抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體；8、水質問題，用娃哈哈

聚合酶鏈反應(PCR)實驗問題解析2025/02/18

聚合酶鏈反應(PCR)技術是在體外進行的由引物介導的酶促DNA擴增反應。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應。兩個引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補，由此限定擴增片段。PCR反應由一系列的變性→退火→延伸反復循環(huán)構成，即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈，然后在較低溫度下同過量引物退火，再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進行延伸。理論上，經(jīng)過N次循環(huán)可使特定片段擴增到2n-1，考慮到擴增

影響ELISA檢測試劑盒實驗結果的干擾物質有哪些？2025/02/14

血清是常用的ELISA檢測試劑盒實驗標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內(nèi)源性物質和外源性物質兩種。一、內(nèi)源性物質有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應物質和其它物質等。1、類風濕因子人血清中IgM、IgG型類風濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕捉抗體及酶標記二抗的FC段直接結合，從而導致

微生物菌種的臨時存放及活化綜述2025/02/06

菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級擴大培養(yǎng)得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復壯過程，因為保存時的條件往往和培養(yǎng)時的條件不相同，所以要活化，讓菌種逐漸適應培養(yǎng)環(huán)境。一、一般菌種臨時存放及活化1.低溫保存管應存放于－20℃~－80℃之低溫條件下。2.準備37℃之70﹪酒精浴槽（只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險；若以37℃水浴取代，應避免水中微生物污染），其中事先安放小試管架，液面不可高達管塞。3.將低溫保

微生物實驗室培養(yǎng)基的制備及性能測試2025/01/21

培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。公司對微生物實驗室在培養(yǎng)基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質量控制措施進行討論，提一些建議。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。一、培養(yǎng)基的購置與驗收1.購置從培養(yǎng)基自身的質量來看，不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。依據(jù)ISO/IE

微生物培養(yǎng)基滅菌方法介紹2025/01/14

培養(yǎng)基是將微生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)物質，用人工方法配制而成的各種營養(yǎng)基質。培養(yǎng)基為微生物的生長提供營養(yǎng)物質和生存空間。滅菌的方法，通?？梢苑譃樗拇箢悾?、加熱滅菌：包括直接灼燒滅菌、干熱滅菌、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒；2、過濾去菌；3、射線滅菌和消毒；4、化學藥劑滅菌和消毒。在本實驗中，介紹與培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌有關的部份滅菌方法。1.干熱滅菌法（即熱空氣滅菌法）干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器。前面所包裝好的玻璃器皿，如帶棉塞的三角瓶，試管、包裝好的吸管、培養(yǎng)皿等，放入電

RT-PCR反應體系靈敏度及特異性提高指導2025/01/07

RT-PCR(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction)，也稱為逆轉錄PCR，是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。RT-PCR實驗需要追求一致性（穩(wěn)定性），不管RNA上樣量如何，反轉錄的效率都保持一致，確保cDNA的差異能夠真實反映mRNA的差異。在進行RT反應之前，考慮以下幾個方面，可以更好地進行RT-PCR實驗。一、增加反應體系的靈敏度：1.分離高質量RNA：成功的cDNA合成來自高質量的RNA。高質量的

抗體在各個實驗中的應用2024/12/24

抗體是一種由漿細胞（效應B細胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面?？贵w能識別特定外來物的一個特征，該外來目標被稱為抗原。1.做流式的抗體和免疫組化的抗體是一樣的嗎?不一定能通用。流式是用直接標記還是間接標記?如果是直接標記的話，那這個抗體一般不是FITC標記或者就是TRITC，PE之類的。如果恰好你的免疫組化，也是想用熒光素標記的抗體來直接標記，那就可以通用。如果你的免疫組化要用其它的標記的話，或者

雙抗體夾心法檢測抗原的操作步驟及靈敏度提高方法2024/12/17

雙抗體夾心法檢測抗原的操作步驟：1、包被抗體：將特異性抗體（捕獲抗體）包被在固相載體（如酶標板）表面，通常在4℃過夜，使抗體通過物理吸附固定在固相表面。2、封閉：用封閉液（如1%-5%的牛血清白蛋白溶液）封閉固相載體表面未被抗體占據(jù)的位點，以減少后續(xù)檢測中的非特異性結合。在37℃孵育1-2小時。3、加樣：將待測樣品加入到已包被和封閉好的固相載體孔中，在37℃孵育一定時間，使樣品中的抗原與固相載體上的捕獲抗體結合。4、洗滌：用洗滌液洗去未結合的物質，重復多次以確保洗干凈。5、加檢測抗體（酶標抗體）

RT-PCR反轉錄酶與合成 cDNA 引物的選擇2024/12/09

逆轉錄-聚合酶鏈反應(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數(shù)量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。一、反轉錄酶的選擇1．Money鼠白血病病毒（MMLV）反轉錄酶：有強的聚合酶活性，RNA酶H活

PCR電泳原理與分析2024/12/03

PCR電泳原理：PCR電泳PCR電泳主要是瓊脂糖凝膠電泳。電泳儀有正負極的，而DNA是帶負電荷的。故而向正方向移動。然后DNA里是有堿基的。堿基可以吸收紫外光。最重要的是有染色劑，常用的有溴化乙錠等等。一般在配制凝膠的時候會加進去，或者跑完電泳然后將凝膠浸在含有染色劑的溶液里，染色劑可以插入DNA鏈中。在可見光下是看不見條帶的，但在紫外光照射下就能出現(xiàn)條帶。PCR擴增后一般進行瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳后一般有以下幾種條帶：1、引物帶。引物濃度過高或是擴增效率不是特別高時都會有，一般不呈現(xiàn)為細帶，

雞酸性磷酸酶（ACP）ELISA試劑盒樣本處理要求2024/11/25

雞酸性磷酸酶（ACP）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中酸性磷酸酶（ACP）含量。實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞酸性磷酸酶（ACP）水平。用純化的雞酸性磷酸酶（ACP）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入酸性磷酸酶（ACP），再與HRP標記的酸性磷酸酶（ACP）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的酸性

逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)實驗過程詳解2024/11/18

逆轉錄-聚合酶鏈反應（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR）可以：(1）分析基因的轉錄產(chǎn)物；（2）獲取目的基因；（3）合成cDNA探針；（4）構建RNA高效轉錄系統(tǒng)。實驗方法原理:逆轉錄-聚合酶鏈反應(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再

酶聯(lián)免疫吸附ELISA實驗檢測目的抗原方法講解2024/11/13

ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（captureAb）固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體（primarydetectionAb），形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經(jīng)用酶（enzyme）標記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質（substrate），作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深

血清的作用功能及其鑒別方法2024/10/28

血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和生長因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。血清是指在凝固后，血漿中所剩下的液體部分。血清中含有多種生物活性物質，具有以下幾個重要的作用功能：1、免疫功能：血清中含有免疫球蛋白（抗體），可以識別和中和病原體，參與機體的免疫應答。通過血清中的抗體，機體可以對抗感染，保護身體免受疾病的侵襲。2

各類聚合酶鏈式反應(PCR)技術特性及缺點2024/10/21

PCR(polymerasechainreaction)聚合酶鏈式反應，是體外DNA擴增技術之一，至今已經(jīng)超過30年的歷史。PCR基本原理：PCR可以將目標DNA片段擴增一百萬倍以上，其原理是在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。標準PCR過程分為三步：1.變性（Denaturation）：利用高溫使DNA雙鏈分離。DNA雙鏈之間的氫鍵在高溫下（93-98℃）被打斷。2.退火（Annealin

豬磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1) 酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒實驗操作介紹2024/10/14

豬磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關液體樣本中磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)含量。一、實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)水平。用純化的豬磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)，再與HRP標記的磷脂酰絲氨酸合酶-1(PTDSS1)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹di洗滌后加底物TM

細胞活躍快樂有效方法策略2024/10/08

細胞是生物體的結構和功能的基本單位生物學名詞。一般具有細胞核、細胞質和細胞膜。植物細胞的細胞膜外還有細胞壁。體形極微，在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣，主要由細胞核與細胞質構成，表面有薄膜。動植物細胞結構大致相同。植物細胞質膜外有細胞壁，細胞壁中常有質體，動物細胞質中常有中心體，而高等植物細胞中則無。細胞有運動、營養(yǎng)和繁殖等機能。細胞是許多生物學實驗的主角。如果細胞心情不好，那么實驗的結果也不會好到哪兒去。如何讓細胞快樂？下面就仔細了解一下吧!1.確保所有實驗室材料都無菌交叉污染是細胞培養(yǎng)的大敵

對照品和標準品比較事項2024/09/29

對照品和標準品一樣是指國家藥品標準中用于鑒別、檢查、含量測定、雜質和有關物質檢查等標準物質，它是國家藥品標準不可分割的組成部分。國家藥品標準物質是國家藥品標準的物質基礎，它是用來檢查藥品質量的一種特殊的專用量具;是測量藥品質量的基準;也是作為校正測試儀器與方法的物質標準。在藥品檢驗中，它是確定藥品真?zhèn)蝺?yōu)劣的對照，是控制藥品質量必須用的工具。一、概念：對照品與標準品是2個不同的概念，中國藥典凡例中已有明確的定義:文獻中常將2種概念混淆，認為對照品就是標準品，是1種物質2種提法而已，造成錯誤的原因，

標準物質管理使用規(guī)范2024/09/23

標準物質一般是指一種確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質或材料，作為分析測量行業(yè)中的“量具'，在校準測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質或材料特性值和考核分析人員的操作技術水平，以及在過程中產(chǎn)品的質量控制等領域起著*的作用。企業(yè)或實驗室應當建立標準物質的科學管理制度，以保證標準物質全流程的可追溯性、使信息傳遞正確有效，保證流轉過程數(shù)量和貯存準確、讓使用更規(guī)范與合理。一、標準物質來源合法，可追溯對標準物質的原材料選擇、制備方法、標定方法、標定結果、定值準確性、量值溯源、穩(wěn)定性等過程進行