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BCA 蛋白定量檢測(cè)試劑盒測(cè)蛋白濃度步驟2024/09/19: 取適量未變性的總蛋白溶液，用BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒（G2026-200T；G2026-1000T）測(cè)蛋白濃度，蛋白樣品在進(jìn)行SDS-PAGE電泳等實(shí)驗(yàn)研究之前要進(jìn)行精確的定量，以保證同一實(shí)驗(yàn)中不同樣品之間上樣量的一致性以及結(jié)果可比性。因此，蛋白濃度測(cè)定是研究蛋白中常用、最基本的分析技術(shù)之一。BCA原理：在堿性條件下，蛋白質(zhì)分子中的肽鍵結(jié)構(gòu)能與Cu2+結(jié)合生成絡(luò)合物，同時(shí)將Cu2+還原為Cu+。BCA試劑可靈敏特異的與Cu+結(jié)合，形成穩(wěn)定的紫色絡(luò)合物，562nm處有最高的吸收值，可在562nm測(cè)

基因擴(kuò)增技術(shù)PCR反應(yīng)原理及特點(diǎn)分享2024/09/09: 基因擴(kuò)增技術(shù)(PCR)聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction簡(jiǎn)稱PCR)又稱無細(xì)胞分子克隆系統(tǒng)或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增法，是基因擴(kuò)增技術(shù)的一次重大革新。PCR擴(kuò)增DNA的原理是：先將含有所需擴(kuò)增分析序列的靶DNA雙鏈經(jīng)熱變性處理解開為兩個(gè)寡聚核苷酸單鏈，然后加入一對(duì)根據(jù)已知DNA序列由人工合成的與所擴(kuò)增的DNA兩端鄰近序列互補(bǔ)的寡聚核苷酸片段作為引物，即左右引物。此引物范圍就在包括所欲擴(kuò)增的DNA片段，一般需20-30個(gè)堿基對(duì)，過少則難保持與DNA單鏈的結(jié)合。

聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）體系主要成份組成解讀2024/09/02: 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）是一種常用的分子生物學(xué)技術(shù)，可用于擴(kuò)增DNA序列。在PCR反應(yīng)中，引物是起關(guān)鍵作用的短鏈DNA分子，它們會(huì)與待擴(kuò)增DNA序列的兩端匹配，指示聚合酶在這些位置開始復(fù)制DNA。PCR反應(yīng)體系由反應(yīng)緩沖液（PCRBuffer）、脫氧核苷三磷酸底物（dNTPmix）、TaqDNA聚合酶（Taq酶）、寡聚核苷酸引物（Primer1，Primer2）、Mg2+、靶序列（DNA模板）主要成份組成。各個(gè)組份對(duì)PCR結(jié)果至關(guān)重要。1、反應(yīng)緩沖液（PCRBuffer）（1）、反應(yīng)緩沖液一般含1

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）測(cè)定技術(shù)要點(diǎn)匯集2024/08/29: 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）是將抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，利用抗原抗體的特異性結(jié)合以及抗體或者抗原上標(biāo)記的酶催化特定底物發(fā)生顯色反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物檢測(cè)的免疫分析方法，可測(cè)至皮摩爾（pmol）級(jí)別。技術(shù)原理：ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。（1）、將已知的抗體或抗原結(jié)合在某種固相載體上，并保持其免疫活性。（2）、測(cè)定時(shí)，將待檢樣本和酶標(biāo)抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)。（3）、用洗滌的方法分離抗

大鼠 SCUBE1ELISA試劑盒試驗(yàn)操作步驟及注意事項(xiàng)2024/08/19: 試驗(yàn)原理：大鼠SCUBE1ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知待測(cè)物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系。大鼠SCUBE1ELISA試劑盒操作步驟：1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然

ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)灰區(qū)結(jié)果分析2024/08/12: 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA測(cè)定的陽(yáng)性判斷值,通常是將大量陰性和陽(yáng)性人群的測(cè)定數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析后確定的,其確定依據(jù)為判斷結(jié)果的假陽(yáng)性和假陰性率最di。在陽(yáng)性判斷值周圍一定范圍內(nèi)之外的測(cè)定結(jié)果可歸為可疑,亦即ELISA測(cè)定的“灰區(qū)"。“灰區(qū)"的大小可用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定。測(cè)定結(jié)果處于“灰區(qū)"的樣

酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀應(yīng)用常見問題解析2024/08/05: 酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專用儀器。?？珊?jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個(gè)比色計(jì)，即用比色法來分析抗原或抗體的含量。酶標(biāo)儀檢測(cè)技術(shù)是一種高通量微孔板檢測(cè)技術(shù)，操作簡(jiǎn)便，被廣泛應(yīng)用各領(lǐng)域。任何儀器在使用時(shí)往往都會(huì)出現(xiàn)一些小故障，酶標(biāo)儀儀器也一樣，下面將與大家分享酶標(biāo)儀的一些常見故障及處理方法：1、打印機(jī)不工作⑴、酶標(biāo)儀后部DIL開關(guān)設(shè)置不正確。DIL標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置:左下下下下下下上下上上下下上下上上右(人站在儀器后部，面向儀器)。⑵、酶標(biāo)儀內(nèi)置

微生物培養(yǎng)基滅菌實(shí)驗(yàn)方法匯總2024/07/30: 培養(yǎng)基是將微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的各種營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生存空間。滅菌的方法，通?？梢苑譃樗拇箢悾?、加熱滅菌：包括直接灼燒滅菌、干熱滅菌、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒；2、過濾去菌；3、射線滅菌和消毒；4、化學(xué)藥劑滅菌和消毒。在本實(shí)驗(yàn)中，介紹與培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌有關(guān)的部份滅菌方法。1.干熱滅菌法（即熱空氣滅菌法）干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器。前面所包裝好的玻璃器皿，如帶棉塞的三角瓶，試管、包裝好的吸管、培養(yǎng)皿等，放入電

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備與步驟2024/07/22: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。PCR實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)中常見用的實(shí)驗(yàn)之一，在基因擴(kuò)增、核酸檢測(cè)、基因檢測(cè)等方面廣泛應(yīng)用。一、PCR實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備:在開始PCR實(shí)驗(yàn)之前，必須準(zhǔn)備好DNA模板（基因組DNA或逆轉(zhuǎn)錄制備的cDNA）、特異性引物（自己設(shè)計(jì)或用軟件設(shè)計(jì)），并選擇合適的商業(yè)酶（選擇符合您實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡拿?1、DNA聚合酶。有許多商業(yè)DNA聚合酶，它們具有不同的特性。一般分為兩類：高保

ELISA試劑盒中HRP底物使用操作步驟2024/07/15: ELISA試劑盒中HRP底物范圍較廣，HRP即辣根過氧化物酶（HorseradishPeroxidase）比活性高，穩(wěn)定，分子量小，純酶容易制備，所以zui常用。過氧化物酶作為多個(gè)試劑盒顯色體系的關(guān)鍵成分，對(duì)試劑盒的質(zhì)量有重要影響。HRP底物主要包括二氨基聯(lián)苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。一、二氨基聯(lián)苯胺／金屬鹽DAB是辣根過氧化物酶最敏感、常用的底物。它產(chǎn)生強(qiáng)烈的棕色產(chǎn)物，在水和醇中不溶解。多數(shù)情況下，推薦在DAB中加入不同的金屬離子。當(dāng)加入金屬鹽如鈷、鎳至底物液中，辣根過氧化物酶可以更

細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇技術(shù)操作步驟2024/07/09: 細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇技術(shù)操作步驟：一、原理在不加條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過細(xì)胞易受損的－5～0℃，細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，活力受損不大。目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對(duì)細(xì)胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿

PCR反應(yīng)條件溫度和時(shí)間選擇2024/07/01: PCR反應(yīng)條件的選擇技巧主要體現(xiàn)在溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)上，溫度過高，延伸時(shí)間不夠都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大的影響，以下總結(jié)方法技巧。溫度與時(shí)間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因(長(zhǎng)度為100～300bp時(shí))可采用二溫度點(diǎn)法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94

ELISA試驗(yàn)重點(diǎn)操作步驟闡述2024/06/28: 酶聯(lián)免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)是一種特殊的試劑分析方法，在免疫酶技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù)，其試劑易于保存、結(jié)果判斷較為客觀，是目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)抗原抗體經(jīng)濟(jì)、普遍的試驗(yàn)診斷方法。ELISA試驗(yàn)重點(diǎn)操作步驟闡述如下：1、試劑的準(zhǔn)備試劑的質(zhì)量如抗原抗體的純度及親和力、標(biāo)記物的比活性、滴度及特異性等直接影響檢測(cè)結(jié)果，為保證檢測(cè)質(zhì)量，所有試劑必需經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊(cè)批準(zhǔn)、批檢測(cè)合格，臨床評(píng)估特異性、敏感性、穩(wěn)定性較高且

常見污染培養(yǎng)細(xì)胞的類型探究2024/06/12: 由于缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)等的保護(hù)，體外培養(yǎng)的細(xì)胞沒有對(duì)微生物的防御能力。在體外培養(yǎng)環(huán)境中，有些微生物在攝取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)方面有競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)，并在短時(shí)間內(nèi)排出大量代謝產(chǎn)物；有些微生物則附著在細(xì)胞表面或進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。因此，微生物污染會(huì)對(duì)體外培養(yǎng)細(xì)胞的正常生存、生長(zhǎng)及功能活動(dòng)造成極大干擾，嚴(yán)重的可致細(xì)胞死亡。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性也大打折扣。所以，保持細(xì)胞生存環(huán)境無微生物污染是體外實(shí)驗(yàn)的前提條件。良好的無菌操作可大大降低細(xì)胞培養(yǎng)中的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)。微生物對(duì)細(xì)胞的影響因污染物和細(xì)胞種類的不同而表現(xiàn)各異，一般當(dāng)

PCR引物是如何合成？2024/06/03: PCR引物合成是指通過測(cè)定引物的OD值，溶解引物，最終合成引物的一個(gè)完善的過程。目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相鄰的核苷酸通過3′→5′磷酸二酯鍵連接。合成四步驟:第一步,是將預(yù)先連接在固相載體上的活性基團(tuán)被保護(hù)的核苷酸與三氯yi酸反應(yīng)，脫去其5′-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT，獲得游離的5′-羥基。第二步

細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)干貨分享2024/05/27: 細(xì)胞凍存是指將細(xì)胞放在低溫環(huán)境，以達(dá)到減少細(xì)胞代謝的作用，從而達(dá)到對(duì)細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存進(jìn)行保種的目的，以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)或臨床使用。細(xì)胞凍存一般采用慢凍原則，慢凍可使細(xì)胞逐步脫水，細(xì)胞不會(huì)因?yàn)楫a(chǎn)生大的冰晶而收到損害。一、原理當(dāng)溫度低至-70℃時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的代謝活動(dòng)及酶活性幾乎全部停止，低于-130℃時(shí)，細(xì)胞能達(dá)到最佳存活率。液氮可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的長(zhǎng)期保存。冷凍保護(hù)劑二甲基亞砜（DMSO）能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍存過程，同時(shí)增加細(xì)胞膜的通透性，提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而達(dá)到保

ELISA試驗(yàn)常見標(biāo)本收集介紹2024/05/20: 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學(xué)和分子生物學(xué)中廣泛使用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA的檢測(cè)目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，

蛋白質(zhì)鹽析法全方面分析2024/05/13: 蛋白質(zhì)通過鹽析的辦法沉淀的原理是降低蛋白質(zhì)的溶解度，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出。一般來說，所有固體溶質(zhì)都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出，這一過程叫鹽析。在生化制備中,許多物質(zhì)都可以用鹽析法進(jìn)行沉淀分離，如蛋白質(zhì)、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白質(zhì)沉淀最為常見，特別是在粗提階段。鹽析法分為兩類，第一類叫Ks分段鹽析法，在一定PH和溫度下通過改變離子強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)，用于早期的粗提液；第二種叫b分段鹽析法，在一定離子強(qiáng)度下通過改變PH和溫度來實(shí)現(xiàn)，用于后期進(jìn)一步分離純化和結(jié)晶。一．影響鹽析的若干因素1．蛋白

各種細(xì)胞培養(yǎng)基類型概述2024/05/06: 細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。常見的種類如下：1、無機(jī)鹽培養(yǎng)液中無機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素，細(xì)胞通常可耐受260mOsm/kg320mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng)。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時(shí)需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃

全方面闡述血清和血漿的關(guān)聯(lián)2024/04/28: 血清和血漿均是不含細(xì)胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區(qū)別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環(huán)境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細(xì)胞成分），分裝備用。2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件

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