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淺談培養(yǎng)細胞的實驗中的幾種試劑2022/12/19

細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。在培養(yǎng)細胞的實驗中有有幾種試劑是經(jīng)常用到的。1、高糖DMEM溶液用新配制的三蒸水配制，高糖DMEM干粉（規(guī)格10×1L），溶入約總量的1/3的三蒸水，并用水洗凈包裝袋，在磁力攪拌器上攪拌30分鐘，加入NaHCO23.75克，補加水至最終量。用1NHCL調(diào)整PH為7.2，0.22μm濾膜抽濾除菌，分裝-20℃保存，使用時加10%的胎牛血清及雙抗溶液（最終濃度：青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml）2、胎牛血清使用前56℃水浴30

血清保存需把控的要點2022/12/13

血清是血液從體內(nèi)取出后發(fā)生凝血后的上層澄清液體,凝血的主要反應(yīng)是纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,所以血清中不再含有纖維蛋白原。血清保存需把控的要點：1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已wan全解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必

淺談細胞轉(zhuǎn)染的途徑2022/12/06

細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)。轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染的途徑大致可分為物理介導(dǎo)、化學介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類：1、物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独?、化學介導(dǎo)：方法很多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)。3、生物介導(dǎo)：方法有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細胞轉(zhuǎn)

抗體的特異性的四個方面表現(xiàn)2022/11/25

抗體(antibody)免疫細胞分泌免疫物質(zhì)，是哺乳動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細胞（效應(yīng)B細胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細胞殺傷等來清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展，抗體已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生命科學各個領(lǐng)域，包括科學研究、診斷、治療等。特異性（specificity）的本質(zhì)含義是“Connectedwithoneparticularthingonly"即只與唯yi的特定事物相關(guān)，具有專一性

抗體IgG生理特性具體講述2022/11/14

抗體又被稱為免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig），這是因為，血清蛋白通過物理的溶解度定義，可以被簡單的區(qū)分為白蛋白（albumin）和球蛋白(globulin)，進一步通過電泳技術(shù)對血清蛋白進行精確的分析，發(fā)現(xiàn)大部分的抗體蛋白都集中在伽馬球蛋白（gammaglobulin）所在的條帶，因此抗體也被稱為免疫球蛋白。作為一種功能蛋白，抗體整體由四條多肽鏈構(gòu)成，分別為兩條結(jié)構(gòu)相同的輕鏈（Lchain）和兩條結(jié)構(gòu)相同的重鏈（Hchain），四條鏈形成典型的“Y”型抗體結(jié)構(gòu)。氨基酸序列比較研究

詳述ELISA常見四個問題與解決方法2022/11/07

ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測定，是一類常用的免疫酶技術(shù)。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，然后利用酶標記（偶聯(lián)）的抗體或抗原與之孵育，加入顯色劑顯色，通過酶標儀測定待測物顏色與標準物顏色的差異，繪制出酶活曲線得出待測物濃度。下面詳述ELISA常見四個問題與解決方法:1.陰性對照出現(xiàn)陽性結(jié)果①樣品、試劑被污染，或加樣時操作不當導(dǎo)致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染——更換試劑，小心操作。②酶標板洗滌不徹di——洗板前先將抗體溶液倒干凈，然后清洗液倒?jié)M板孔，確保能充分洗滌。③抗體量過多導(dǎo)致非

加大環(huán)保技術(shù)投資 促進跨國公司參與可持續(xù)發(fā)展2022/11/01

加大環(huán)保技術(shù)投資促進跨國公司參與可持續(xù)發(fā)展導(dǎo)讀：據(jù)了解，“十二五”期間，將以六個方面的問題為重點進行投資和戰(zhàn)略布局，包括飲水安全、空氣污染、重金屬污染、土壤污染、農(nóng)村生態(tài)整治和環(huán)保集成能力建設(shè)。相關(guān)人士分析，環(huán)保技術(shù)、裝備和服務(wù)等多個環(huán)節(jié)的綜合能力，將在“十二五”期間獲得大幅提升。他表示，隨著國內(nèi)環(huán)保裝備業(yè)自主化率的提升，企業(yè)將能減少設(shè)備引進成本，**市場主動權(quán)。中國政府對環(huán)境保護、節(jié)能減排、循環(huán)經(jīng)濟的日益重視正推動經(jīng)濟進一步轉(zhuǎn)型，也正創(chuàng)出造越來越多的新商機。包括福伊特在內(nèi)的許多大型跨國公司重視

ELISA實驗各類組織勻漿樣本的處理說明2022/11/01

ELISA實驗中的各類組織勻漿有容易勻漿的組織和不易勻漿的組織的兩類樣本，下面分別介紹它們的采集、處理和保存。一、應(yīng)用ELISA實驗的各類組織勻漿（容易勻漿的組織）樣本的采集、處理和保存。1、采集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，剔除附屬的結(jié)締組織，稱取組織塊。2、用移液管量取0.1MPBS或者用0.86％冷生理鹽水，勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時操作要在冰水浴中進行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）。3、勻漿的方式有多種

論述ELISA常見檢測方法2022/10/24

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。在檢測時，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。ELISA的檢測方法有直接發(fā)、間接法、競爭法基雙抗夾心法四

PCR反應(yīng)中溫度的設(shè)置2022/10/17

在PCR自動熱循環(huán)中，最關(guān)鍵的因素是變性與退火的溫度。如操作范例所示，其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s,37℃60s,72℃120s，共25～30個循環(huán)，擴增片段500bp。在這里，每一步的時間應(yīng)從反應(yīng)混合液達到所要求的溫度后開始計算。在自動熱循環(huán)儀內(nèi)由混合液原溫度變至所要求溫度的時間需要30～60s，這一遲滯時間的長短取決于幾個因素，包括反應(yīng)管類型、壁厚、反應(yīng)混合液體積、熱源(水浴或加熱塊)以及兩步驟間的溫度差，在設(shè)置熱循環(huán)時應(yīng)充分給以重視和考慮，對每一儀器均應(yīng)進行實測。關(guān)于熱循環(huán)時間

探討影響ELISA實驗結(jié)果洗板操作2022/10/10

在做ELISA實驗時，洗板有兩種方法：手工法洗板和洗板機洗板。二者沒有本質(zhì)的差別,只要操作合乎要求,均能得到正確、可靠的結(jié)果。手工洗板是每次反應(yīng)溫育后,將反應(yīng)液吸出或甩干,然后在板孔中加滿洗液,放置2～3min后,將洗液吸出或甩干再在吸水紙上拍干。重復(fù)上述洗滌步驟3～4次,最后在吸水紙上拍干即可。手工洗板人為因素比較大,實驗人員必須經(jīng)驗豐富,洗滌次數(shù)要足夠,沖擊力又不要太大,加入的洗液量以剛滿反應(yīng)孔為限,防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈,同時防止孔與孔之間液體交叉。洗滌結(jié)束后扣干亦非常重要,否則易造成

探討抗體的分裝與保存2022/10/08

抗體（antibody）是指機體由于抗原的刺激而產(chǎn)生的具有保護作用的蛋白質(zhì)。它（免疫球蛋白不僅僅只是抗體）是一種由漿細胞（效應(yīng)B細胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面?？贵w能識別特定外來物的一個*特征，該外來目標被稱為抗原?？贵w的分裝與保存:抗體保存得當與否，直接決定了抗體的活性和使用效果！如果抗體保存得當，大部分抗體活性都可以維持數(shù)月甚至數(shù)年。1.收到抗體后請在12000rpm離心1-5min，將

冷凍細胞活化的正確操作步驟2022/09/26

細胞冷凍yellfreexirig是保存微生物或動植物細胞株的常用方法。冷凍細胞到底該如何活化，一個不小心，細胞就受損了，今日總結(jié)，冷凍細胞活化的正確操作步驟:1.冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對細胞造成傷害，導(dǎo)致細胞之死亡。2.細胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復(fù)正常(例如產(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質(zhì))。3.步驟：①操作人員應(yīng)戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。②自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易

抗體的免疫學功能???????用途2022/09/19

抗原進入外環(huán)境，被吞噬細胞吞噬，露出特異性抗原。T細胞分泌淋巴因子，刺激B細胞，B細胞增殖分化，產(chǎn)生漿細胞，分泌抗體。有部分抗原直接刺激B細胞，B細胞增殖分化，產(chǎn)生漿細胞，分泌抗體。在二次免疫時，抗原直接刺激漿細胞，產(chǎn)生抗體?？贵w是機體依據(jù)抗原而特異性產(chǎn)生的一種蛋白?？贵w產(chǎn)生后的免疫學功能用途如下：1、特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用

實驗室技術(shù)操作要求2022/09/13

實驗室技術(shù)操作要求一、無菌操作要求食品微生物實驗室工作人員，必須有嚴格的無菌觀念，許多試驗要求在無菌條件下進行，主要原因：一是防止試驗操作中人為污染樣品，二是保證工作人員安全，防止檢出的致病菌由于操作不當造成個人污染。1．接種細菌時必須穿工作服、戴工作帽。2．進行接種食品樣品時，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。3．接種食品樣品時，應(yīng)在進無菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?．進行接種所用的吸管，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開包裝未使

ELISA測定標本處理保存需考慮方面2022/09/05

用于ELISA測定的標本最為常用的是血清(漿)，有時因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。目前臨床上使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集，要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可di松在早晨4～6點之間，會有一峰值出現(xiàn)：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放，因此，在測定此類激素時，有必要在密切相連的時間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本

抗生素的特性與作用機理介紹2022/08/30

抗生素（antibiotics）是由微生物（包括細菌、真菌、放線菌屬）或高等動植物在生活過程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其它活性的一類次級代謝產(chǎn)物，能干擾其他生活細胞發(fā)育功能的化學物質(zhì)。現(xiàn)臨床常用的抗生素有轉(zhuǎn)基因工程菌培養(yǎng)液液中提取物以及用化學方法合成或半合成的化合物?？股厥羌毦?、霉菌或其他微生物的代謝產(chǎn)物或人工合成的類似物，通俗地講，抗生素就是用于治療各種細菌感染或抑制致病微生物感染的藥物。其主要用途是抑制其他種類微生物的生長（抑菌作用）或?qū)⑺鼈儦⑺溃⒕饔茫?，一般情況下對其宿主不會產(chǎn)生嚴重的

雜交瘤細胞原代培養(yǎng)過程2022/08/22

雜交瘤細胞原代培養(yǎng)過程：1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內(nèi)，固定在泡沫板上。2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。6.加入10

WB實驗檢測結(jié)果背景過高原因分析2022/08/15

WesternBlot（WB）又名WesternBloting、Western、蛋白質(zhì)印跡法、免疫印跡試驗，WesternBlot基本原理：首先利用SDS-PAGE對蛋白質(zhì)樣品進行分離，然后轉(zhuǎn)移到固相載體上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。轉(zhuǎn)移后的膜就稱為一個印跡（blot）,用于對蛋白質(zhì)的進一步檢測。印跡首先用蛋白溶液處理以封閉膜上剩余的疏水結(jié)合位點，而后用所要研究的蛋白質(zhì)的抗體（一抗）處理，印跡中只有待研究的蛋白質(zhì)與一抗特異結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合

提取到質(zhì)量良好的RNA方法技術(shù)2022/08/08

提取到質(zhì)量良好的RNA（包括總RNA和mRNA，以下同），概括起來有兩種方法，總結(jié)如下：1、檢測RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0時，我們認為RNA中蛋白或者時其他有機物的污染是可以容忍的，不過要注意，當你用Tris作為緩沖液檢測吸光度時，R值可能會大于2（一般應(yīng)該是2.2時，說明RNA已經(jīng)水解成單核酸了。如果RNA的量夠，可在260nm