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介紹抗體的保存2022/08/01

抗體的保存方法一般會直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當(dāng)?shù)那闆r下，大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年，一般情況需嚴(yán)格按照抗體說明書來進行保存。一、抗體保存溫度和條件：1、抗體收到后，需在12000rpm離心1~5分鐘，再打開管蓋進行分裝和保存，如果抗體體積不足50ul，可延長離心時間至5分鐘，從而確?？贵w全部離心下來。2、對于多數(shù)抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是不錯之選。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存，因為該類產(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在置于4℃條件會導(dǎo)致抗體的降解。分裝成小等

PCR對照試驗結(jié)果好卻沒回收到目的片段參考見解2022/07/25

PCR對照試驗一般都會加陰性對照，陽性對照。如果你只想檢控PCR操作及擴增，就加水作為陰性對照，陽性質(zhì)粒或者DNA作為陽性對照。如果你想監(jiān)控整個核酸提取過程，及PCR過程的話，那就從核酸提取開始，就將水作為陰性樣本做對照，含模板DNA的菌或者病毒或者組織作為陽性對照。然而，PCR對照試驗結(jié)果好卻沒回收到目的片段參考見解：1、連接用室溫保溫1小時，能滿足大多數(shù)克隆，為提高效率，需4oC過夜。2、插入片段帶有污染，使3`-T缺失，或抑制連接，抑制轉(zhuǎn)化。為此，將插入片段和pGEM-T正對照混合，再連接

正確溶解與稀釋ELISA標(biāo)準(zhǔn)品了解下2022/07/18

標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA實驗成功與否的關(guān)鍵點。正確溶解、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品尤其重要，以下一起了解下：1.粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。2.根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待*溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:（1）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。若細(xì)胞上清樣本，建議用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度稀

ELISA試劑盒檢測血清使用說明2022/07/05

ELISA試劑盒檢測血清使用說明大部分elisa檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按慣例方法收集，應(yīng)留意防止溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會添加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，?菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃。超越一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡。混濁或有沉積的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，弄清后再

常見的化學(xué)試劑儲存及原則上處理辦法2022/06/28

很難說，一般買來的試劑打開用一次沒用完要放好，保質(zhì)期和儲存條件有很大關(guān)系。比如對于不耐熱的試劑特別是一些生物試劑，在冰箱冷藏又容易吸潮，往往是很不利的；有些試劑對光敏感或者對空氣敏感，所以很難找到一種*理想的儲存條件。原則上應(yīng)該這樣：1、對于便宜的試劑，買來用過按照瓶上建議的方式保存即可（反正壞了不心疼，有錢任性）2、價格昂貴的試劑，最要緊的是按照需要量購買，最好一次用完，不要剩下，因為很難說這種東西會受什么影響，一來價格貴，你不會有心情來試試它對光、氧、水的敏感性；二來昂貴藥品往往用在關(guān)鍵步驟

胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用2022/06/21

胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用：1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細(xì)胞不受傷害。7.參與細(xì)胞凍存。在細(xì)胞培養(yǎng)中，胎牛血清加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基的濃度大多為5%～20%

淺析幼倉鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)基本條件2022/06/14

幼倉鼠腎細(xì)胞培養(yǎng)基本條件：1、合適的細(xì)胞培養(yǎng)基合適的小鼠源細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之一，含有細(xì)胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。3、無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自

了解有關(guān)pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液必看2022/06/07

pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液定義：pH緩沖溶液是一種能使pH值保持穩(wěn)定的溶液。如果向這種溶液中加入少量的酸或堿，或者在溶液中的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生少量的酸或堿，以及將溶液適當(dāng)稀釋，這個溶液的pH值基本上穩(wěn)定不變，這種能對抗少量酸堿或大或稀釋，而使pH值不變化的溶液就稱為緩沖溶液。pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖液有以下特點：（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的pH值是已知的，并達到規(guī)定的準(zhǔn)確度；（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液的pH值有良好的復(fù)現(xiàn)性和穩(wěn)定性，具有較大的緩沖容量，較小的稀釋值和較小的溫度系數(shù)；（3）溶液的制備方法簡單；1.如何配制pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液？對于一般p

熒光定量PCR的應(yīng)用領(lǐng)域2022/05/31

熒光定量PCR的應(yīng)用領(lǐng)域：1、核酸定量分析:對傳染性疾病進行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測,比如近期流行的甲型H1N1流感，轉(zhuǎn)基因動植物基因拷貝數(shù)的檢測，RNAi基因失活率的檢測等。2、基因表達差異分析:比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等)，特定基因在不同時相的表達差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證3、SNP檢測:檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義，因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性，一旦SNP的序

簡述各類抗體主要功能2022/05/31

抗體依據(jù)重鏈抗原性的不同分為五類：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。各類抗體主要功能有：IgG：血清中含量最高，因此是最重要的抗感染分子，包括抗菌、抗病毒、抗毒素等。IgG還能激活補體，結(jié)合并增強巨噬細(xì)胞的吞噬功能（調(diào)理作用和ADCC效應(yīng)），穿過胎盤，保護胎兒及新生嬰兒免受感染。IgA：分單體和雙體兩種。前者存在血清中，后者存在于黏膜表面及分泌液中，是黏膜局部抗感染的重要因素。IgM：是分子量最大，體內(nèi)受感染后最早產(chǎn)生的抗體，具有很強的激活補體和調(diào)理作用，因此是重要的抗感染因子，且常用于診

ELISA試劑盒解析泛素化結(jié)構(gòu)2022/05/24

ELISA試劑盒泛素化作為一類作用方式更加復(fù)雜且作用結(jié)果更加多樣的蛋白質(zhì)修飾,在細(xì)胞生命周期各個方面扮演著同樣重要的角色。泛素化過程通常需要3種泛素酶的協(xié)同作用，其中E1泛素激活酶(ubiquitin-activatingenzyme)與E2泛素偶聯(lián)酶(ubiquitin-conjugatingenzymes)激活泛素，將其鏈接到蛋白底物上，而泛素連接酶在靶蛋白的特異性識別以及泛素化系統(tǒng)活性的調(diào)控中起著zui重要的作用。RINGE3sRING-finger家族的E3均含有相似的E2結(jié)合結(jié)構(gòu)域，作

分享免疫熒光實驗要點2022/05/23

標(biāo)記免疫技術(shù)發(fā)展蕞早的一種是免疫熒光，它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)，通過將抗體與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。免疫熒光步驟包括，細(xì)胞固定和通透，封閉，孵育一抗，二抗等。除了這些基本步驟，接下來的實驗方法希望可以幫到您。1.細(xì)胞固定和通透為達到蕞佳的檢測效果，細(xì)胞需要經(jīng)過固定和通透。步驟很重要，細(xì)胞和抗原需要保證蕞佳的結(jié)構(gòu)，并利于抗體與抗原結(jié)合。通常情況下，2.抗體特異性免疫熒光需要用到特異性非常強的抗體，可以避免高背景和不理想的

人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)基本條件2022/05/17

人胰腺癌細(xì)胞培養(yǎng)基本條件：1、合適的細(xì)胞培養(yǎng)基合適的小鼠源細(xì)胞培養(yǎng)基是體外細(xì)胞生長增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細(xì)胞培養(yǎng)液中重要的成分之一，含有細(xì)胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。3、無菌無毒細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細(xì)胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自

清除被污染的細(xì)胞辦法2022/05/09

培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。在細(xì)胞培養(yǎng)中如果污染細(xì)胞價值不大，宜棄之；在尋找原因后*消毒操作室，復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞，再進行細(xì)胞培養(yǎng)。污染細(xì)胞價值較大，又難于重新得到，可采取以下辦法清除。1、細(xì)菌和真菌的清除抗生素對殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。2、支原體的清除(1)用MRA處理用MRA（MycoplasmaRemo

細(xì)胞不貼壁生長可能原因及解決方法2022/04/24

細(xì)胞不貼壁生長可能原因及解決方法：可能原因：支原體污染。培養(yǎng)瓶瓶底不干bai凈。培養(yǎng)液pH值過堿（NaHCO3分解）。消化du液或培養(yǎng)液配制錯誤、過期儲存、儲存不當(dāng)。細(xì)胞老化（如傳代前細(xì)胞已匯合導(dǎo)致失去貼附性）。接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度.分離培養(yǎng)物,檢測支原體.清潔支架和培養(yǎng)箱.如發(fā)現(xiàn)支原體污染,丟棄培養(yǎng)物.注意刷洗,或換用一次性塑料培養(yǎng)瓶.使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2（將培養(yǎng)液敞口放入培養(yǎng)箱也可）.重新配置消化液或培養(yǎng)液.啟用新

懸浮細(xì)胞的凍存及液氮罐使用說明2022/04/19

懸浮細(xì)胞的凍存：1.直接將細(xì)胞收集到離心管。2.200g離心5min，棄上清。3.以生長培養(yǎng)基（含20%胎牛血清）或100%胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約107/ml，加入10%的DMSO。4.以每管1ml分裝至凍存管中。5.置于4oC30min，再轉(zhuǎn)入-20℃2h后，再放入-80℃冰箱冷凍過夜，次日保存到液氮罐中；或置于程序降溫盒中，按相關(guān)的操作指南進行操作。液氮罐使用注意事項：1．初次使用前檢查容器內(nèi)膽是否清潔干燥，外部有無凹陷及嚴(yán)重碰傷，如有輕微凹陷及碰傷，經(jīng)試驗其蒸發(fā)性能不變，仍可繼續(xù)使用，

PCR三個基本反應(yīng)步驟2022/04/06

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；模板DNA與引物的退火（復(fù)性）：模板DNA經(jīng)

鋅指蛋白423抗體鑒定2022/03/29

鋅指蛋白423抗體鑒定：1、抗體的效價鑒定鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴散試驗,酶聯(lián)免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。2、抗體的特異性鑒定抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力?？贵w的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計

發(fā)酵培養(yǎng)基pH值影響有哪些2022/03/23

發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值，對微生物生長具有非常明顯的影響，也是影響發(fā)酵過程中各種酶活的重要因素。pH值對微生物的生長繁殖和產(chǎn)物合成的影響有以下幾個方面：①影響酶的活性，當(dāng)pH值抑制菌體中某些酶的活性時，會阻礙菌體的新陳代謝；②影響微生物細(xì)胞膜所帶電荷的狀態(tài)，改變細(xì)胞膜的通透性，影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝產(chǎn)物的排泄；③影響培養(yǎng)基中某些組分的解離，進而微生物對這些成分的吸收；④pH值不同，往往引起菌體代謝過程的不同，使代謝產(chǎn)物的質(zhì)量和比例發(fā)生改變。培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的代謝，是引起pH值變化的主要原因，

抗原抗體反應(yīng)四個主要特點2022/03/15

抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機體內(nèi)進行，也可以在機體外進行。在機體內(nèi)，當(dāng)免疫細(xì)胞被抗原激活后，由B細(xì)胞分化成熟為漿細(xì)胞后所合成、分泌的一類能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白（immunoglobulin，Ig），激活補體系統(tǒng)從而解除抗原對機體的損傷?？乖贵w反應(yīng)的主要特點有：1、特異性：特定的抗體只能與特定的抗原（肽段/蛋白）結(jié)合，這在WB一抗二抗的種屬及反應(yīng)性的選擇常用到；2、可逆性：抗原抗體的結(jié)合是非共價結(jié)合，在一定條件下這種非共價結(jié)合是