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上海信帆生物科技有限公司
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上海信帆生物:關(guān)于脫脂奶粉和BSA作為封閉劑的一些問題2016/04/28
Q:westernblot中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?A:脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白。原理就是用非抗原的蛋白去封閉膜,避免標(biāo)記抗體固定在膜上引起背景增高。Q:請問封閉液和抗體稀釋液用BSA和脫脂奶粉有什么區(qū)別呢?有人跟我說奶粉的封閉效果更好些,但是通常只能用于WesterBlot,如果要做elisa或者phagedisplay時(shí)候,蛋白鋪板的話,不能使用脫脂奶粉??墒且灿腥苏f可以,請問是否有這個(gè)說法呢?A:所謂封閉是用以減少或消除載體上的非特異性結(jié)合蛋白的分子,一般是脫脂奶粉或
上海信帆生物:紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量2016/04/27
考馬斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合,在0-1000ug/ml范圍內(nèi),于波長595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比,可用于蛋白質(zhì)含量的測定??捡R斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速,結(jié)合產(chǎn)物在室溫下10分鐘內(nèi)較為穩(wěn)定,是一種較好的蛋白質(zhì)定量測定方法。1.實(shí)驗(yàn)部分1.1儀器與試劑:LabtechUVPOWER紫外分光光度計(jì);玻璃比色皿一套;考馬斯亮藍(lán)G250;牛血清蛋白;超純水。1.2試液的制備:牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000ug/ml)的制備稱取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中,加入超純水溶解并定容。
上海信帆生物:免疫組化的儀器試劑和標(biāo)準(zhǔn)操作過程2016/04/26
(一)、儀器設(shè)備1)18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐;2)水浴鍋(二)、試劑1)pbs緩沖液(pH7.2~7.4):NaCl137mmol/L,KCl2.7mmol/L,Na2HPO44.3mmol/L,KH2PO41.4mmol/L。2)0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液(CB,pH6.0,1000ml):檸檬酸三鈉3g,檸檬酸0.4g。3)0.5mol/LEDTA緩沖液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10mmol/LNaOH調(diào)至pH8.0,加水至100
上海信帆生物:重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化、篩選和鑒定2016/04/26
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)克隆工作中zui常用的雙酶切;2、學(xué)習(xí)將外源基因與質(zhì)粒連接方法及操作技術(shù);3、學(xué)習(xí)氯化鈣法制備大腸桿菌(Escherichiacoli)感受態(tài)細(xì)胞的技術(shù);4、了解細(xì)胞轉(zhuǎn)化的概念及其在分子生物學(xué)研究中的意義。5、外源質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入受體菌細(xì)胞的技術(shù)以及篩選轉(zhuǎn)化體的技術(shù)。6、學(xué)習(xí)鑒定重組子的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理重組子的建立:采用雙酶切質(zhì)粒載體pBR322和pUC18,酶切后產(chǎn)生了互補(bǔ)的粘性末端,在T4DNA連接酶的作用下,兩個(gè)質(zhì)粒片段連接。感受態(tài)細(xì)胞(Competentcells):
上海信帆生物:實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)離心管分類有多少種2016/04/26
實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)離心管種類有多種。1、按材質(zhì)可分:塑料離心管、玻璃離心管和不銹鋼離心管等。2、按速度可分:低速離心管和高速離心管。3、按容量可分:微量離心管、小容量離心管和大容量離心管。一般稱容量大于100mL的離心管為離心瓶。4、按離心管口部形狀可分:縮口離心管和直口離心管。5、按離心管底部形狀可分:圓底離心管、尖底離心管和平底離心管。6、按離心管與蓋接合形式可分:摁蓋離心管和螺口離心管。7、按用途可分:制備型離心管和分析型離心管。elisa試劑盒,進(jìn)口elisa試劑盒,國產(chǎn)elisa試劑盒,el
上海信帆生物:人血漿中緩激肽定量檢測方法開發(fā)2016/04/26
緩激肽是一種含有9種氨基酸的生理和藥理活性肽,由蛋白質(zhì)的激肽基團(tuán)衍生而來。激肽是可以促使血管舒張、血管通透性增強(qiáng)、一氧化氮釋放和花生四烯酸流動的效應(yīng)因子。它是血壓、腎功能和心臟功能的重要調(diào)節(jié)因子,還參與炎癥反應(yīng)。緩激肽可引起血管擴(kuò)張,從而導(dǎo)致血壓降低。因此,對這種激素肽的變化進(jìn)行高靈敏度、高選擇性和高準(zhǔn)確度地定量,并將其作為疾病進(jìn)展或藥物治療的評估指標(biāo),將會極為有利。盡管以往都是通過配體結(jié)合試驗(yàn)(LBAs)對生物制劑進(jìn)行定量分析,但在過去幾年中利用LC-MS/MS分析大分子已成為一種趨勢。這在某
上海信帆生物:生物信息學(xué)方法2016/04/26
生物信息學(xué)主要應(yīng)用到HMM隱馬可夫鏈的方法。數(shù)學(xué)中具有馬爾可夫性質(zhì)的離散時(shí)間隨機(jī)過程。該過程中,在給定當(dāng)前知識或信息的情況下,只有當(dāng)前的狀態(tài)用來預(yù)測將來,過去(即當(dāng)前以前的歷史狀態(tài))對于預(yù)測將來(即當(dāng)前以后的未來狀態(tài))是無關(guān)的。在馬爾可夫鏈的每一步,系統(tǒng)根據(jù)概率分布,可以從一個(gè)狀態(tài)變到另一個(gè)狀態(tài),也可以保持當(dāng)前狀態(tài)。狀態(tài)的改變叫做過渡,與不同的狀態(tài)改變相關(guān)的概率叫做過渡概率。隨機(jī)漫步就是馬爾可夫鏈的例子。隨機(jī)漫步中每一步的狀態(tài)是在圖形中的點(diǎn),每一步可以移動到任何一個(gè)相鄰的點(diǎn),在這里移動到每一個(gè)點(diǎn)
上海信帆生物:如何選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)基2016/04/26
細(xì)胞培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室里zui常見和zui基本的實(shí)驗(yàn)了,但卻不是zui簡單的。別小看細(xì)胞培養(yǎng),這里可蘊(yùn)含著大學(xué)問。有時(shí)候細(xì)胞狀態(tài)不好,轉(zhuǎn)染、藥篩這些實(shí)驗(yàn)根本就沒辦法做。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多,讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起。經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種,Invitrogen(GIBCO)、thermofisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用zui廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)?!鬗EM是
上海信帆生物:實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)離心管分類2016/04/26
實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)離心管種類有多種。1、按材質(zhì)可分:塑料離心管、玻璃離心管和不銹鋼離心管等。2、按速度可分:低速離心管和高速離心管。3、按容量可分:微量離心管、小容量離心管和大容量離心管。一般稱容量大于100mL的離心管為離心瓶。4、按離心管口部形狀可分:縮口離心管和直口離心管。5、按離心管底部形狀可分:圓底離心管、尖底離心管和平底離心管。6、按離心管與蓋接合形式可分:摁蓋離心管和螺口離心管。7、按用途可分:制備型離心管和分析型離心管。elisa試劑盒,進(jìn)口elisa試劑盒,國產(chǎn)elisa試劑盒,el
上海信帆生物:新方法可生物試劑針對MMP胞外區(qū)域的高性能抗體2016/04/26
抗體藥物作為生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的關(guān)鍵驅(qū)動力,能安全有效地對癌癥、自身免疫病和感染性疾病等進(jìn)行靶向治療,該藥物在2012年創(chuàng)下645.7億美元的銷售額,占生物制藥51.8%的份額。目前抗體藥物的市場需求量仍在攀升,預(yù)計(jì)到2015年,抗體藥物銷售額有望達(dá)980億美元左右。業(yè)內(nèi)人士認(rèn)為,隨著疾病譜變化,抗體藥物的黃金時(shí)代已經(jīng)來到。單抗藥物的作用靶點(diǎn)很重要的一部分是行使細(xì)胞功能*的跨膜蛋白,包括多通道膜蛋白MMP(如g蛋白偶聯(lián)受體)和離子通道,這些蛋白也是診斷檢測的重要分析靶點(diǎn)。目前跨膜蛋白占據(jù)了40%以上的
上海信帆生物:免疫金銀染色雙PAG法的操作步驟2016/04/26
雙PAG免疫金銀染色原理(一)染色流程:(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min.(2)0.1%胰蛋白酶37℃消化20min,或抗原修復(fù)20min(98℃),自然冷卻至室溫。(3)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×3min.(4)1%EA(卵蛋白)15min,不洗。(5)適當(dāng)稀釋的特異抗體室溫4h或4℃孵育20h,或37C孵育30min.(6)0.05mol/L(pH7.4)TBS洗3×5min.(7)0.02mol/L(pH7.4)TBS(內(nèi)含
上海信帆生物:免疫組化的方法和優(yōu)點(diǎn)2016/04/26
一、免疫組化技術(shù)的基本原理應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理,對組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。*,抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性,即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來,以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實(shí)驗(yàn)動物,制備特異性抗體,再用這種抗體(*抗體)作為抗原去免疫動物制備第二抗體,并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合,將抗原放大,由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免
上海信帆生物:關(guān)于293/293T細(xì)胞基本信息2016/04/26
關(guān)于293/293T細(xì)胞1、種屬都為人,不是鼠。2、來源:293細(xì)胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞系,293T細(xì)胞由293細(xì)胞派生,同時(shí)表達(dá)SV40大T抗原,含有SV40復(fù)制起始點(diǎn)與啟動子區(qū)的質(zhì)粒可以復(fù)制。用Ca3(PO4)2轉(zhuǎn)染效率可高達(dá)50%。蛋白表達(dá)水平高,轉(zhuǎn)染后2-3天用堿性磷酸酶分析可較容易地檢測到表達(dá)的蛋白。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞是過表達(dá)蛋白并獲得細(xì)胞內(nèi)及細(xì)胞外(分泌的或膜)蛋白的便捷方式。3、形態(tài)為上皮細(xì)胞,能致瘤。4、染色體核型:亞三倍體人細(xì)胞系。染色體眾數(shù)為64,30%的細(xì)
上海信帆生物:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及其產(chǎn)物分析2016/04/20
實(shí)驗(yàn)原理:PCR擴(kuò)增是模擬天然DNA復(fù)制過程,利用DNA聚合酶在體外(試管中)擴(kuò)增一對引物之間特異性DNA片段的方法。其主要熱循環(huán)過程可分為三個(gè)步驟:(1)高溫變性(denature):提供DNA復(fù)制的有效模板。(2)低溫退火(anneal):引物與模板DNA復(fù)性,提供游離3’-OH端供DNA復(fù)制起始;(3)中溫延伸(extend):依賴Mg2+,DNA聚合酶催化合成與模板互補(bǔ)的新的DNA分子。以上變性、退火、延伸三個(gè)過程組成一個(gè)循環(huán)周期;常循環(huán)25~40周期,經(jīng)過n輪循環(huán)后,靶DNA的拷貝數(shù)理
上海信帆生物:探索染色質(zhì)動力學(xué)2016/04/19
如今,幾乎每位研究人員都或多或少地知道生成誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSC)的配方。拿出體細(xì)胞,加入四種轉(zhuǎn)錄因子,等待幾個(gè)星期,搞定!不過,這其中到底發(fā)生了什么,卻是一個(gè)謎,人們想了解卻還未了解。顯然,這涉及到表觀遺傳學(xué):從成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變成iPSC,意味著那些過去關(guān)閉的基因必須再次啟動。其他基因,比如細(xì)胞分化的標(biāo)志,則必須調(diào)低。西奈山醫(yī)院Lunenfeld-Tanenbaum研究所的資深科學(xué)家AndrasNagy談道:“每個(gè)細(xì)胞的基因組都幾乎是相同的。表觀基因組哪些基因表達(dá),哪些蛋白合成。”這些變化反映
上海信帆生物:從G蛋白偶聯(lián)受體到MAPK的通路圖2016/04/18
G-protein-coupledreceptors(GPCRs)areactivatedbyawidevarietyofexternalstimuli.UponreceptoractivationtheG-proteinexchangesgdpforGTP,causingthedissociationoftheGTP-boundGalphaandtheGbetagammasubunits,triggeringdiversesignalingcascades.Receptorscoupledto
上海信帆生物:分離鑒定氨基酸實(shí)驗(yàn)2016/04/14
一、目的通過氨基酸的分離,學(xué)習(xí)紙層析法的基本原理及操作方法。二、原理紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法。層析溶劑由有機(jī)溶劑和水組成。物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置是用Rf值(比移)來表示的:R=原點(diǎn)到層析點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)到溶劑前沿的距離在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸。三、器材1、層析缸①2、毛細(xì)管3、噴霧器4、培養(yǎng)皿5、層析濾紙(新華一號)四、試劑1、擴(kuò)展劑是4份水飽和的正
上海信帆生物:T細(xì)胞受體測序(TCR seq)2016/04/13
T細(xì)胞受體(Tcellreceptor,TCR)是T細(xì)胞表面特異性識別抗原和介導(dǎo)免疫應(yīng)答的分子,是人類基因組中多態(tài)性zui高的區(qū)域之一,決定著人的免疫系統(tǒng)如何適應(yīng)環(huán)境的變化。T細(xì)胞受體庫的多樣性(包括基因重組以及選擇性表達(dá))直接反映了機(jī)體免疫應(yīng)答的狀態(tài)。TCR可分為TCRα/β和TCRγ/δ兩種類型,外周血T細(xì)胞主要為TCRα/β的T細(xì)胞,是介導(dǎo)機(jī)體特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)的主要細(xì)胞。如圖1所示:TCRβ基因由可變區(qū)(V)、多變區(qū)(D)、結(jié)合區(qū)(J)和恒定區(qū)(C)四部分基因片段組成,形成互補(bǔ)決定區(qū)(c
上海信帆生物:PCR實(shí)用技巧2016/04/11
增加PCR的特異性:1.primersdesign這是zui重要的一步。理想的,只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的一些條件1)足夠長,18-24bp,以保證特異性.當(dāng)然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產(chǎn)量2)GC%40%~60%3)5'端和中間序列要多GC,以增加穩(wěn)定性4)避免3'端GCrich,zui后3個(gè)BASE不要有GC,或者zui后5個(gè)有3個(gè)不要是GC(有人說:3'端是GC/CG/CC/GG。)5)避免3'端的互補(bǔ),否則容易造
上海信帆生物:探索染色質(zhì)動力學(xué)的新工具2016/04/07
如今,幾乎每位研究人員都或多或少地知道生成誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSC)的配方。拿出體細(xì)胞,加入四種轉(zhuǎn)錄因子,等待幾個(gè)星期,搞定!不過,這其中到底發(fā)生了什么,卻是一個(gè)謎,人們想了解卻還未了解。顯然,這涉及到表觀遺傳學(xué):從成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變成iPSC,意味著那些過去關(guān)閉的基因必須再次啟動。其他基因,比如細(xì)胞分化的標(biāo)志,則必須調(diào)低。西奈山醫(yī)院Lunenfeld-Tanenbaum研究所的資深科學(xué)家AndrasNagy談道:“每個(gè)細(xì)胞的基因組都幾乎是相同的。表觀基因組哪些基因表達(dá),哪些蛋白合成?!边@些變化反映
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