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ELISA（雙抗體夾心法）—檢測HBsAg2015/02/27

以已知抗體(抗HBs)包被載體，然后將含有抗原的待檢標本加入，共同孵育后，抗原結合于包被抗體上，再加入酶標記特異抗體(酶標抗HBs)，酶標抗體連接到抗原上，zui后加入底物溶液，根據(jù)顏色反應來判定抗原含量?！静牧稀縃BsAg試劑盒，本試劑盒含:1、包被抗-HBs反應條1瓶2、酶結合物1瓶3、HBSAg陽性對照1瓶4、HBsAg陰性對照1瓶5、洗滌液:用前每瓶作1：20稀釋1瓶6、顯色劑(TMB)A1瓶7、顯色劑(TMB)B1瓶8、終止液1瓶【方法】1、加入待測標本每孔0.05ml，并設HBsAg

自行配制DMEM的方法2015/02/27

以下是一份GIBCO的低糖DMEM粉劑配制說明(普通高糖的DMEM培養(yǎng)基配法是一樣的)以及李玲、李雪峰編著的《細胞生物學實驗》中配制方法。TOPREPARE1*LIQUID1.Measrueout5%lessdistilledwaterthandesiredtotalvolumeofmediumusingamixingcontainerthatisasclosetothefinalvolumeaspossible.2.Addpowderedmediumto15to30℃(roomtemperat

關于ELISA檢測試劑盒的組成以及常用ELISA試劑盒2015/02/02

ELISA快速檢測技術越來越多的用于疾病診斷、食品安全檢測中，那么elisa試劑盒的主要組成成份是什么呢？根據(jù)ELISA試劑盒的應用范圍，可將ELISA試劑盒分為拿幾種呢？完整的elisa試劑盒主要的組成成份如下：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)C的抗原或抗體(結合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標準品和控制血清(定量測定中);(5)結合物及標本的稀釋液;(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;

ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置方法2015/02/02

elisa實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總如下：(1)ELISA實驗包被緩沖液(2)ELISA實驗洗滌緩沖液(2)ELISA實驗洗滌緩沖液(3)ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7)ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。試劑(1)ELISA實驗包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaHC

免疫酶標技術—酶標記抗體制備2015/02/02

酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中zui常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經(jīng)適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質量的酶(如辣根過氧化物酶，簡稱HRP)國內已有商品供應。高質量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上，宜選用產率高、不影響結合物的活性和不混雜干擾性物質且操作簡便易行的方法。(一)酶制劑及其底物凡無毒

關于ELISA試劑盒如何正確選擇的一些個人心得2015/02/02

ELISA試劑盒以其敏感性高、特異性強、重復性好的優(yōu)點，在科研中深受廣大，科研工作者的喜愛．而市面上各種試劑盒，數(shù)不勝數(shù)．讓大家都產生了，選擇性綜合癥，也挑不出自已的那個試劑盒．現(xiàn)在我們公司列出了一下，一些選購的常識，希望能為大家選購時提供幫助．ELISA試劑盒雖然有多種類型，不過它們都有一個共同特點，就是進行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進行捕獲。In-cellELISA和酶聯(lián)免疫斑點ELISPOT是兩種特殊的類型，In-cellELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的

ELIS檢測試劑盒—酶標板性能2015/01/30

常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應后，分別測每孔溶液的吸光度。控制反應條件，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計算全部讀數(shù)的平均值。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應小于10%。以下以A、B、C三款酶標板為例。直接法：檢測HumanIgG在酶標板表面的吸附由上圖可以看出，這三類酶標板中，A類酶標板具有更好的蛋白吸附效果，同時也提高蛋白吸附的靈敏度，能夠提供更為可靠的實

ELISA檢測試劑盒—酶標板分類2015/01/30

一、根據(jù)孔數(shù)，可分為96孔、48孔等，由于酶標板主要是配合酶標儀用，目前市面上的酶標儀zui多為96孔，因此酶標板zui為常用的也是96孔。二、根據(jù)其底部的不同，又分為平底的，U型底、V型底等。平底的折射率低，適于在酶標儀檢測；U型底的酶標板折射率較高，方便加樣、吸樣、混勻等操作，可以不用放在酶標儀上，直接通過目測觀察顏色變化情況，從而判定有無相應的免疫反應。V底的酶標板可以的吸取樣品。三、根據(jù)酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同，又分為高結合力、中結合力和氨基化等。1）高結合力此種酶標板，表面

ELISA實驗不可忽視的小細節(jié)—酶標板2015/01/26

根據(jù)不同的分類標準，酶標板有著不同的分類。一、根據(jù)孔數(shù)，可分為96孔、48孔等，由于酶標板主要是配合酶標儀用，目前市面上的酶標儀zui多為96孔，因此酶標板zui為常用的也是96孔。二、根據(jù)其底部的不同，又分為平底的，U型底、V型底等。平底的折射率低，適于在酶標儀檢測；U型底的酶標板折射率較高，方便加樣、吸樣、混勻等操作，可以不用放在酶標儀上，直接通過目測觀察顏色變化情況，從而判定有無相應的免疫反應。V底的酶標板可以的吸取樣品。三、根據(jù)酶標板與蛋白和其它分子結合能力的不同，又分為高結合力、中結合

關于ELISA方法詳細過程及步驟2015/01/26

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領域。(一)原理ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、牽9體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物

胎牛血清（FBS）的主要作用2015/01/23

血清(serum)是細胞培養(yǎng)基中的成份之一，血清的主要成份如：血漿蛋白、多肽、生長因子、激素等可以促進細胞生長或抑制生長活性。胎牛血清(fetalcalfserum，簡稱FBS)是血清中的一種，主要是來自剖腹產的胎牛。什么是胎牛血清?胎牛血清(fetalcalfserum，簡稱FBS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛血清采自出生10至14天的小牛。胎牛血清的血清保存和使用須注意：血清應保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時，應先將血清至于2

血清保存時必須注意的事項2015/01/23

血清保存時需注意的事項;血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。我們在保存血清的時候需要注意以下幾點，以便順利完成您的實驗：1、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度

細胞培養(yǎng)無菌操作步驟和注意事項2015/01/23

1.打開無菌工作臺及凈化室的紫外燈，消毒半小時以上。2.進入凈化室前先關閉紫外燈，打開超凈臺風機，等待30min以上，以排盡臭氧。3.穿好隔離衣，戴好口罩，帽子。4.風淋2分鐘。5.0.1%過氧乙酸水泡手，擦干。6.點燃酒精燈;超凈臺內應避免放入過多的物品;使用的吸管，滴管，試管，培養(yǎng)瓶等均事先滅菌。7.打開各類瓶蓋前先過火，以固定灰塵;打開的瓶口、試管口過火焰，鑷子使用前應經(jīng)火焰燒灼。8.水平式風機的超凈臺，應使瓶口斜置，應盡量避免瓶口敞開直立。9.同一根吸管或滴管不應連續(xù)用于幾個不同的細胞系

常用試劑配制的注意事項2015/01/23

1、哪種濃度的酒精消毒效果?75%酒精殺菌力zui強，它能使蛋白質脫水和變性，在3～5分鐘內殺死細菌。因此，它用于消毒和防腐，適用于皮膚和器械、塑料制品等的消毒。高濃度的酒精(95～100%)能引起菌體表層蛋白質凝固，形成保護層，使酒精分子不易透入，因此殺菌能力反而弱。2、試劑的等級有哪些?根據(jù)化學試劑的純度，按雜質含量的多少可分為四級：一級試劑為純試劑，通常用G·R表示;二級試劑為分析純試劑，通常用A·R表示;三級試劑為化學純試劑，通常用C·R表示;四級試劑為實驗或工業(yè)試劑，通常用L·R表示。

細胞培養(yǎng)基和血清的選擇2015/01/15

細胞培養(yǎng)是實驗室里zui常見和zui基本的實驗了，但卻不是zui簡單的。別小看細胞培養(yǎng)，這里可蘊含著大學問。有時候細胞狀態(tài)不好，轉染、藥篩這些實驗根本就沒辦法做。影響細胞培養(yǎng)的因素很多，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起。經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen(GIBCO)、thermofisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應用zui廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)?！鬗EM是

血清保存的六點注意事項2015/01/15

(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結冰時體積會增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。(2)一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾，切勿直接過濾血清。(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡

實驗室常用實驗生物試劑的配制大全2015/01/15

實驗室常用試劑的配制：無Ca2+、Mg2+Hanks液、Hanks液(原液)、甲基紅試劑、0.4%酚紅溶液、pH7.2Tris-NH4CI溶液(紅細胞崩解液)、0.05moI/LpH8.6巴比妥緩沖液、磷酸鹽緩沖液(PBS)、0.1mol/LPH8.4硼酸緩沖液(BBS)、0.05mol/LpH9.6碳酸緩沖液、0.01mol/LpH7.4PBS內含2%BSA(牛血清白蛋白)、底物溶液、清潔液的配制、柯氏試劑(靛基質試劑)。1.無Ca2+、Mg2+hanks液NaCl4.5gKCl0.2gNaH

細胞培養(yǎng)常用器材與試劑配制2015/01/15

器材與試劑干粉型培養(yǎng)基、胰蛋白酶，青霉素、鏈霉素.純凈水系統(tǒng)、電子天平、PH計、磁力攪拌器等具體步驟1.水：細胞培養(yǎng)用水必須非常純凈，不含有離子和其他的雜質。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水.2.PBS(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-hanks液的配制)：主要用于免疫組化染色時組織或細胞的漂洗溶解定容：將藥品(NaCl8.0g，KCl0.2g，Na2HPO4?H2O1.56g，KH2PO40.2g)倒入盛有雙蒸水的燒杯中，玻璃棒攪動，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中準確定容至1000

實驗室各種板子的用法比較2015/01/15

1.酶標板酶標板是一種配在酶標儀上做酶聯(lián)免疫實驗用的板子，常用的為96孔，主要是為了配合酶標儀所設計，另外還有48孔的，但不常用。在酶聯(lián)免疫實驗中，抗原、抗體和其它生物分子通過多種機制吸附至酶標板表面，然后于受檢樣本和酶標抗原或抗體按不同的步驟進行反應，通過酶標儀來進行檢測。2.培養(yǎng)板培養(yǎng)板是用來培養(yǎng)細胞或者細菌的，有6孔、12孔、24孔、48孔、96孔之分。和透明的酶標板樣子差不多，但是用途卻相差很大。在培養(yǎng)板的孔中加入適量的培養(yǎng)液，然后在適合的環(huán)境下進行細胞培養(yǎng)。一般的培養(yǎng)板都是平底的，適合

RNA病毒世界中*的分子結構:埃博拉病毒蛋白的秘密2015/01/06

目前西非爆發(fā)了埃博拉疫情，已經(jīng)報道了2000多個病例，強調了更深刻理解病毒的分子生物學的必要性，其可能對疫苗或抗病毒的藥物發(fā)展有著至關重要的作用，以治療或預防埃博拉出血發(fā)燒?，F(xiàn)在，美國弗吉尼亞大學(UVA)的一個研究組，在病毒學家丹·恩格爾博士和結構生物學家ZygmuntDerewenda博士的領導下，已獲得參與埃博拉病毒復制的關鍵蛋白質的晶體結構，扎伊爾埃博拉病毒核蛋白(NP)的C-末端結構域。該研究小組解釋說，他們的結構揭示了一個新的第三級折疊，這有助于導致對病毒核衣殼在感染的細胞中是如何組