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上海心語生物科技有限公司
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細(xì)胞培養(yǎng)基的配制的小竅門2015/01/05
一、實驗?zāi)康氖炀氄莆张囵B(yǎng)基(RPMI1640和DMEM)的配制，了解其他培養(yǎng)基配制方法。二、實驗原理組織培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基一般是由合成培養(yǎng)基和小牛血清配制而成。合成培養(yǎng)基有商品出售，它是根據(jù)細(xì)胞生長的需要按一定配方制成的粉狀物質(zhì)。其主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子和其他輔助物質(zhì)。它的酸堿度和滲透壓與活體內(nèi)細(xì)胞外液相似。小牛血清含有一定的營養(yǎng)成分，更重要的是它含有細(xì)胞生長所必須得生長因子、激素、貼附因子等，這是合成培養(yǎng)基所無法替代的。此外它還能中和有毒物質(zhì)的毒性。故一般體外培養(yǎng)細(xì)胞時要
細(xì)胞的細(xì)菌、真菌污染及排除的具體方法2015/01/02
細(xì)胞的細(xì)菌、真菌污染及排除真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中zui常見的一種，尤其在梅雨季節(jié)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)更易污染。污染培養(yǎng)細(xì)胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見，較易被發(fā)現(xiàn)，短期內(nèi)培養(yǎng)液多不混濁，倒置顯微鏡下可見于細(xì)胞之間縱橫交錯穿行的絲狀、管狀、及樹枝狀菌絲，并懸浮飄蕩在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡可見到有鏈狀排列的菌珠；念珠菌或酵母菌形態(tài)呈卵形，散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間生長。鏡下看時，要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶
細(xì)胞系的建立2015/01/02
一、概念1、細(xì)胞系(CellLine)：原代培養(yǎng)舞經(jīng)傳代成功即成細(xì)胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系(LineageofCells)所組成。2、細(xì)胞株(CellStrain)：通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，稱為有限細(xì)胞株(finitecellstrain);如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細(xì)胞株(continuouscellstrain)。對于人類腫瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)
細(xì)胞培養(yǎng)需要具備的條件2015/01/02
(1)溫度溫度過低時細(xì)胞生長緩慢甚至不生長。利用冷凍保藏細(xì)胞可保持細(xì)胞的原有分裂分化能力。溫度過高導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要是由酶和蛋白質(zhì)所需要的zui適溫度決定的。多數(shù)生物大分子遇到高溫后容易導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)改變或者喪失(變性)。細(xì)胞膜遇到高溫后容易變態(tài)。在自然界，既有耐高溫的細(xì)胞，也有耐低溫的細(xì)胞。在情況下生長的生物對付環(huán)境的機(jī)制研究在生物進(jìn)化和農(nóng)業(yè)、環(huán)保、發(fā)酵工業(yè)中意義重大。(2)pH過酸或過堿可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要與蛋白質(zhì)的變性和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)受損有關(guān)。(3)滲透壓細(xì)胞內(nèi)外可溶于水的物質(zhì)比例和種類決
BSA等級的劃分及使用說明2014/12/31
一、使用等級劃分牛血清白蛋白等級從低到高：牛血清白蛋白，牛血清白蛋白第五組分，牛血清白蛋白(無必須脂肪酸)，牛血清白蛋白(無蛋白酶)，牛血清白蛋白(細(xì)胞培養(yǎng)級)，金標(biāo)級牛血清白蛋白，交聯(lián)牛血清白蛋白。二、各等級BSA說明1、等級zui低的BSA，這個是普通意義上的BSA，只要主要成分是BSA的產(chǎn)品都可以成為牛血清白蛋白，所以他也涵蓋了其他等級的BSA，所以客戶要注意其純度。作用：一般是工業(yè)生產(chǎn)用。2、牛血清白蛋白第五組分，英文名稱：BSAV，這個是生物技術(shù)級的產(chǎn)品，適用范圍是zui廣的，有些廠家
細(xì)胞操作的注意事項2014/12/31
原代動物細(xì)胞培養(yǎng)：1、實驗材料要新鮮，從活體分離材料后要低溫保存，并盡快進(jìn)行細(xì)胞分離實驗。2、無菌操作。操作時用的培養(yǎng)液，可加平時細(xì)胞培養(yǎng)液5倍含量的青鏈霉素。3、用酶法分離細(xì)胞時，注意酶液的濃度和控制消化時間。貼塊法分離細(xì)胞時，注意動作要輕柔，不要傷到細(xì)胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利于細(xì)胞游離。4、培養(yǎng)液的選擇。不同的細(xì)胞有對培養(yǎng)液中營養(yǎng)的要求不同，根據(jù)所分離細(xì)胞的特性選擇。傳代細(xì)胞培養(yǎng)：1、無菌操作2、控制消化時間3、及時關(guān)注細(xì)胞生長狀態(tài)
PCR技術(shù)2014/12/29
PCR是現(xiàn)代分子生物學(xué)中的一種基本技術(shù)，所以它的任何創(chuàng)新或改進(jìn)都受到研究人員的極大歡迎。PCR方法，范圍很廣，從基本老式PCR反應(yīng)有效性和特異性的改進(jìn)，到技術(shù)如數(shù)字PCR。1、一種強大的耐熱dna聚合酶鏈置換活性可顯著改善DNA擴(kuò)增結(jié)果誰不喜歡一種多功能的工具呢?當(dāng)你可以用有些奇怪但很方便、孩子喜歡的叉勺時，為什么還去用勺子和叉子呢?在8月刊的BioTechniques，Ignatov等人描述了DNA聚合酶的叉勺等價物，一種可用于常規(guī)PCR反應(yīng)以及等溫擴(kuò)增的DNA聚合酶。直到現(xiàn)在，這兩種擴(kuò)增方法
STAP細(xì)胞或為胚胎干細(xì)胞2014/12/29
雖然一個長時間運行的干細(xì)胞研究慘敗，但日本理化學(xué)研究所(RIKEN)另一個調(diào)查委員會近日在東京發(fā)布了新報告。報告稱，所謂的刺激觸發(fā)采集功能(STAP)干細(xì)胞以及可能衍生自這些細(xì)胞的嵌合體小鼠和畸胎瘤，“都來源于受污染的(胚胎干)細(xì)胞培養(yǎng)，這個真相駁斥了兩篇論文的主要結(jié)論”。1月29日，這兩篇論文在線發(fā)表于《自然》雜志。該委員會斷定，3個假設(shè)的STAP干細(xì)胞系實際可能是3個預(yù)先存在的胚胎干(ES)細(xì)胞系。報告總結(jié)道：“不可能是被3種不同的ES細(xì)胞意外污染，人們懷疑污染是人為造成的?！钡撐瘑T會并沒
質(zhì)粒提取純化試劑盒的使用方法2014/12/29
生物柱離心式泰去內(nèi)毒素超純質(zhì)粒小量抽提試劑盒說明書：washA,washB和washC:用前按照試劑瓶上標(biāo)明的量分別加入分析純異丙純或95%的分析純乙醇，充分混勻，用后蓋緊蓋子。用1mlddH2O(滅菌)*溶解rna酶，將RNA酶放入水中煮，水沸后再煮沸20分鐘，關(guān)掉火，緩慢冷至室溫后，將RNA酶取出，全部加入solutionI，充分混勻后，將solutionI放入4℃保存.使用本試劑盒可從1—10ml過液培養(yǎng)菌液中抽提10—40ug超純度質(zhì)粒(OD260/OD280≈1.8)。所得到質(zhì)粒dna
ELISA實驗操作中注意事項小結(jié)2014/12/25
elisa實驗操作中常見問題分析由于ELISA(酶聯(lián)免疫試驗)具有靈敏度較高、特異性好的特點，已廣泛應(yīng)用于各種傳染性疾病的篩查如肝炎、愛滋、優(yōu)生優(yōu)育等。雖然洗板只是ELISA實驗重要環(huán)節(jié)中的一個，但作為專業(yè)的洗板機(jī)生產(chǎn)廠家，我們必須對影響ELISA實驗結(jié)果各因素有一定的認(rèn)識。的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。如不注意，就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本孔的OD值卻明顯偏高)是各個廠
ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置2014/12/21
elisa實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?1)ELISA實驗包被緩沖液(2)ELISA實驗洗滌緩沖液(2)ELISA實驗洗滌緩沖液(3)ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7)ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。試劑(1)ELISA實驗包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaHC
ELISA檢測試劑盒的組成和常用ELISA試劑盒2014/12/21
ELISA快速檢測技術(shù)越來越多的用于疾病診斷、食品安全檢測中，那么elisa試劑盒的主要組成成份是什么呢？根據(jù)ELISA試劑盒的應(yīng)用范圍，可將ELISA試劑盒分為拿幾種呢？完整的elisa試劑盒主要的組成成份如下：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)C的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
PTEN基因突變與遺傳性癌癥綜合征及其相關(guān)疾病的研究進(jìn)展2014/12/19
PTEN基因是具有雙重特異性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂質(zhì)磷酸酶活性降調(diào)PKB/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo),使細(xì)胞周期阻滯在G1期,誘導(dǎo)其凋亡.已證實在人類許多惡性腫瘤中存在體細(xì)胞PTEN基因突變,如神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、腎癌、乳腺癌等.近年來的研究發(fā)現(xiàn),PTEN基因種系突變與人類多種遺傳性癌癥綜合征有關(guān).本文概括介紹了PTEN基因種系突變與人類遺傳性癌癥綜合征及其相關(guān)疾病的關(guān)系,重點介紹了考登綜合征(Cowdensyndrome,CS)、Bannayan-Riley-Ruvalcabasyn
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