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牛血清白蛋白(BSA)試驗(yàn)應(yīng)用介紹2023/09/01: 牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一種球蛋白，包含607個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用。主要成分：1.蛋白質(zhì)——是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類(lèi)蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。2.多肽——血小板促生長(zhǎng)因子能促細(xì)胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細(xì)胞增殖因子；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等，血清中含量雖很少，但對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)也有一定作用。3.激素——胰島素：促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄

單克隆抗體制備的基本原理與過(guò)程2023/09/01: 單克隆抗體制備的原理：B淋巴細(xì)胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對(duì)這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細(xì)胞的這種能力和量是有限的,不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的、將這種B細(xì)胞與非分泌型的骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，再進(jìn)一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞是既具有瘤的無(wú)限生長(zhǎng)的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的高效價(jià)、單一的特異性抗體.這種技術(shù)即稱(chēng)為單克隆抗體技術(shù)。單克隆抗體制備的過(guò)程：免疫

電泳緩沖液的作用介紹2023/08/31: 緩沖液在電泳過(guò)程中的一個(gè)作用是維持合適的pH。電泳時(shí)正極與負(fù)極都會(huì)發(fā)生電解反應(yīng)，正極發(fā)生的是氧化反應(yīng)（4OH--4e-2H2O+O2)，負(fù)極發(fā)生的是還原反應(yīng)（4H++4e-2H2)，長(zhǎng)時(shí)間的電泳將使正極變酸，負(fù)極變堿。一個(gè)好的緩沖系統(tǒng)應(yīng)有較強(qiáng)的緩沖能力，是溶液兩極的pH保持基本不變。電泳緩沖液的另一個(gè)作用是使溶液具有一定的導(dǎo)電性，以利于DNA分子的遷移，例如，一般電泳緩沖液中應(yīng)含有0.01-0.04mol/L的Na+離子，Na+離子的濃度太低時(shí)電泳速度變慢；太高時(shí)就會(huì)造成過(guò)大的電流使膠發(fā)熱甚至熔

電泳法分離混合蛋白質(zhì)的基本原理2023/08/31: 不同的電泳法有不同的原理，下面是其不同的方法和原理。（一）一般是通過(guò)生化方法吧蛋白提取出來(lái)，蛋白質(zhì)帶有電荷么，是將混合樣品中的蛋白質(zhì)，其原理是第一向基于蛋白質(zhì)PI不同用等電聚焦，電泳時(shí)的正極與負(fù)極都會(huì)發(fā)生電解反應(yīng)，向著與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象稱(chēng)為電泳。（二）利用溶解度差別影響蛋白質(zhì)溶解度的外部因素有：1、溶液的pH；2、離子強(qiáng)度；3、介電常數(shù)；4、溫度。但在同一的特定外部條件下，不同蛋白質(zhì)具有不同的溶解度。1、等電點(diǎn)沉淀：原理：蛋白質(zhì)處于等電點(diǎn)時(shí)，其凈電荷為零，由于相鄰蛋白質(zhì)分子之間沒(méi)有靜電

有機(jī)化合物的主要特點(diǎn)介紹2023/08/30: 有機(jī)化合物的主要特點(diǎn)介紹：1.有機(jī)化合物數(shù)目繁多，且自成系統(tǒng)有機(jī)化合物之所以數(shù)目眾多，主要有兩個(gè)原因：（1）碳原子彼此之間能夠進(jìn)行多種方式的結(jié)合，生成穩(wěn)定的、長(zhǎng)短不同的直鏈、支鏈或環(huán)狀化合物；（2）碳是周期表中第二周期第四族的元素，不僅能與電負(fù)性較小的氫原子結(jié)合，也能與電負(fù)性較大的氧、硫、鹵素等元素形成化學(xué)鍵。有機(jī)化合物的數(shù)目雖然很多，但根據(jù)它們之間的相互關(guān)系，可以統(tǒng)一在一個(gè)完整的體系中。2.熱穩(wěn)定性差容易燃燒與典型的無(wú)機(jī)化合物相比，有機(jī)化合物一般對(duì)熱是不穩(wěn)定的，有的甚至常溫下就能分解。雖然大多

化合物純度的鑒定方法2023/08/30: TLC純度的鑒定：1展開(kāi)溶劑的選擇，不只是至少需要3種不同極性展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)，是首先要選擇三種分子間作用力不同的溶劑系統(tǒng)，如氯/仿\甲醇，環(huán)己/烷\乙酸乙酯，正/丁醇\醋酸\水，分別展開(kāi)來(lái)確定組分是否為單一斑點(diǎn)。這樣做的好處是很明顯的，通過(guò)組份間的各種差別將組分分開(kāi)，有可能幾個(gè)相似組份在一種溶劑系統(tǒng)中是單一斑點(diǎn)，因?yàn)樵撊軇┫到y(tǒng)與這幾個(gè)組分的分子間力作用無(wú)顯著的差別，不足以在TLC區(qū)分。而換了分子間作用力不同的另一溶劑系統(tǒng)，就有可能分開(kāi)。這是用3種不同極性展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)所不能達(dá)到的。2對(duì)于一種溶劑系統(tǒng)

流動(dòng)相的緩沖溶液制備注意事項(xiàng)2023/08/29: 在制備液相流動(dòng)相時(shí)，最讓人頭疼的一件事莫過(guò)于配緩沖鹽和調(diào)pH了，但是這確實(shí)準(zhǔn)確配置流動(dòng)相的關(guān)鍵，接下來(lái)遠(yuǎn)慕就和大家一起看看準(zhǔn)確配備流動(dòng)相的緩沖溶液的原則和需要注意的事項(xiàng)。緩沖溶液是指由弱酸及其共軛堿（或弱堿及其共軛酸）所組成的緩沖對(duì)配制的，且能夠在加入少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿時(shí)，可以有效減緩pH值改變的水溶液。緩沖溶液能幫助維持分析方法的穩(wěn)定，而不會(huì)因?yàn)槲⑷醯沫h(huán)境改變的情況下而造成分析結(jié)果的改變。緩沖溶液是被用來(lái)維持pH值的穩(wěn)定。它們是通過(guò)維持弱酸及其共軛堿的平衡從而防止了pH值的改變。緩沖溶液是如何工作

實(shí)驗(yàn)室一些典型的問(wèn)題解答2023/08/29: 一、標(biāo)準(zhǔn)溶液是自己配制出來(lái)的，它屬于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)嗎？要怎么做期間核查呢？參考解答：標(biāo)準(zhǔn)溶液是自己配制出來(lái)的，它屬于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，需要做期間核查（如果在很短時(shí)間內(nèi)用完了，這種情況不用核查）期間核查時(shí)候要區(qū)別是CRM還是RM，一般核查的時(shí)候主要關(guān)注標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1、性狀是否發(fā)生變化2、是否在有效期內(nèi)3、外觀是否變化，比如是否渾濁4、保存的環(huán)境條件是否合適必要時(shí)可以用些技術(shù)手段看看試劑值是否發(fā)生明顯變化。但是實(shí)驗(yàn)室一般不能對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行定值。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)值是否變化和對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值是2個(gè)問(wèn)題。二、作為企業(yè)內(nèi)部實(shí)驗(yàn)室，因涉

細(xì)胞免疫熒光的詳細(xì)操作步驟2023/08/28: 細(xì)胞免疫熒光的詳細(xì)操作步驟1，取出細(xì)胞爬片放到35mm或60mm用過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)皿里，PBS洗三遍。注意有的時(shí)候作的細(xì)胞爬片可能比較小，因此夾取的時(shí)候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分鐘，PBS洗三遍。4，與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，PBS洗三遍。5.，一抗4度濕盒內(nèi)過(guò)夜，也可37度2小時(shí)，感覺(jué)前者效果好，PBS洗三遍。6，二抗室溫2小時(shí)，或者37度1半小時(shí)，PBS洗三遍。7，最好用DAPI染核，然后直接照熒光片。8，蒸餾水洗掉PB

滴定分析的化學(xué)反應(yīng)要具備的條件2023/08/28: 滴定分析的化學(xué)反應(yīng)要具備的條件（1）反應(yīng)必須按方程式定量地完成，通常要求在99.9%以上，這是定量計(jì)算的基礎(chǔ)。（2）反應(yīng)能夠迅速地完成（有時(shí)可加熱或用催化劑以加速反應(yīng)）。（3）共存物質(zhì)不干擾主要反應(yīng)，或用適當(dāng)?shù)姆椒ㄏ涓蓴_。（4）有比較簡(jiǎn)便的方法確定計(jì)量點(diǎn)（指示滴定終點(diǎn)）。滴定分析分析法有以下兩種：1、直接滴定法：用滴定液直接滴定待測(cè)物質(zhì)，以達(dá)終點(diǎn)；2、間接滴定法：直接滴定有困難時(shí)常采用以下兩種間接滴定法來(lái)測(cè)定：a、置換法：利用適當(dāng)?shù)脑噭┡c被測(cè)物反應(yīng)產(chǎn)生被測(cè)物的置換物，然后用滴定液滴定這個(gè)置換

緩沖溶液的配置和計(jì)算2023/08/25: 緩沖溶液的配置和計(jì)算1.選擇緩沖對(duì)選擇緩沖對(duì)的原則：①緩沖對(duì)中共軛酸的pKa≈pH；②所選緩沖對(duì)除可與H+或OH-反應(yīng)外,不能與反應(yīng)系統(tǒng)中的其它物質(zhì)發(fā)生副反應(yīng)；③低毒、經(jīng)濟(jì).2.配制①選定緩沖對(duì)后,根據(jù)緩沖溶液pH計(jì)算公式pH=pKa-lg(ca/cb),計(jì)算ca/cb值；②使c總=0.01~0.1mol·L-1之間,分別計(jì)算所需酸、堿量；③按計(jì)算結(jié)果準(zhǔn)確稱(chēng)或量取試劑,按實(shí)驗(yàn)室一般溶液配制方法配制并定容；④用酸度計(jì)測(cè)定所配緩沖溶液的pH值,貼標(biāo)簽.緩沖溶液的緩沖原理具備緩沖作用的緩沖溶液，通常針

各種純度的試劑區(qū)別介紹2023/08/25: 科研實(shí)驗(yàn)中小伙伴免不了和各種試劑打交道，分析純、優(yōu)級(jí)純、色譜純這些詞早已耳熟能詳，那他們具體指的是什么呢？今天遠(yuǎn)慕就帶大家一起回顧一下試劑的分類(lèi)，快來(lái)查漏補(bǔ)缺吧！目前我國(guó)的試劑規(guī)格基本上按純度（雜質(zhì)含量的多少）劃分，分為高純、光譜純、基準(zhǔn)、分光純、優(yōu)級(jí)純、分析和化學(xué)純7種。國(guó)家和主管部門(mén)頒布質(zhì)量指標(biāo)的主要有優(yōu)級(jí)純、分析純和化學(xué)純3種。優(yōu)級(jí)純（GR，綠標(biāo)簽）（一級(jí)品）：主成分含量很高、純度很高，適用于精確分析和研究工作，有的可作為基準(zhǔn)物質(zhì)。分析純（AR，紅標(biāo)簽）（二級(jí)品）：主成分含量很高、純度較高

滴定分析法的滴定誤差解析2023/08/24: 1、滴定誤差要求：以不確定度表示，≤±0.2%；2、滴定誤差分類(lèi)：主要包括稱(chēng)量誤差、量器誤差、方法誤差。（1）稱(chēng)量誤差每次稱(chēng)量誤差：±0.0001g，一份試樣稱(chēng)量誤差±0.0002g，若相對(duì)誤差±0.1%，則每一份試樣的稱(chēng)量至少為0.2g。（2）量器誤差滴定管讀數(shù)誤差：±0.01ml,一份試樣量取誤差±0.02ml，若相對(duì)誤差±0.1%，則每一份試樣體積量至少為±20ml（3）方法誤差：主要是終點(diǎn)誤差。其原因有：指示劑不能準(zhǔn)確地在化學(xué)計(jì)量點(diǎn)時(shí)改變顏色；標(biāo)準(zhǔn)溶液的加入不可能恰好在指示劑變色時(shí)結(jié)束；

EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與標(biāo)定2023/08/24: EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：稱(chēng)取EDTA約14.6g，置小燒杯中，用熱水溶解后，加蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻備用。EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：常用基準(zhǔn)物ZnO、Zn粒、CaCO3等標(biāo)定，用EBT或XO作指示劑。取0.2gZnO固體（經(jīng)750℃~850℃高溫烘烤約1h），用少量水潤(rùn)濕，加入3mLHCl（1+1）溶液，移入250mL容量瓶定容，取35~40mL上述定溶液，用10%氨水調(diào)節(jié)pH于7~8，加入10mL氨-氯化銨緩沖溶液（pH=10），并加少量鉻黑T，用定容后的EDTA-Na2溶液進(jìn)行滴定，溶

幾種蛋白質(zhì)的提取方法介紹2023/08/23: 人的生命活動(dòng)不能缺少蛋白質(zhì)，很多食物里面都含有蛋白質(zhì)成分，正常的飲食可以為身體補(bǔ)充蛋白質(zhì)。實(shí)際上，在生物化學(xué)研究領(lǐng)域，蛋白質(zhì)的分離提取技術(shù)具有廣泛的應(yīng)用，想要把蛋白質(zhì)提取出來(lái)非常不容易，需要經(jīng)過(guò)很多工序，并且要找到專(zhuān)業(yè)的操作技術(shù)，現(xiàn)在有下列這些方法可以提取蛋白質(zhì)。1、超速離心法此法分離和純化抗原的原理是利用各顆粒在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。常用的密度梯度介質(zhì)有蔗糖、甘油、CsCl等。用超速離心或梯度密度離心分離和純化抗原時(shí)，除個(gè)別成

抗體和重組蛋白的使用方法及儲(chǔ)存方式2023/08/23: 無(wú)論是保存還是運(yùn)輸，請(qǐng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融，冰晶會(huì)破壞抗體和重組蛋白的空間結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變，從而降低抗體的結(jié)合能力，也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度?？贵w和重組蛋白保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果，如果保存得當(dāng)，抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。1.收到抗體和重組蛋白后的操作收到抗體和重組蛋白后（大部分抗體和重組蛋白是溶液態(tài)），請(qǐng)務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，再打開(kāi)管蓋進(jìn)行分裝、溶解和保存（如果抗體和重組蛋白體積小于50

如何高效高質(zhì)量低風(fēng)險(xiǎn)的完成實(shí)驗(yàn)？2023/08/22: 實(shí)驗(yàn)室安全最重要1.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室要穿好工作服，不要存僥幸心里，如果一不小心碰到酸，心愛(ài)的衣服燒個(gè)洞是小事，燒傷皮膚就麻煩了。不要嫌麻煩，一定要戴手套才做對(duì)身體有危害的實(shí)驗(yàn)，要對(duì)自己的身體負(fù)責(zé)。2.實(shí)驗(yàn)前后清潔洗手，如果，實(shí)驗(yàn)中途去休息喝水的時(shí)候，也要洗手，不要以為剛才的實(shí)驗(yàn)藥品沒(méi)什么毒性，生命很重要，小心為妙，另外，如果手很臟還可能沾污實(shí)驗(yàn)儀器和試劑、樣品，引起實(shí)驗(yàn)誤差。干活的時(shí)候，不要不管手上沾了什么都往白大褂上擦。3.涉及到易揮發(fā)或有毒物品時(shí)一定要在通風(fēng)柜操作。4.一定要處理好廢液，分類(lèi)處理，

微生物實(shí)驗(yàn)室消毒處理方法，必看！2023/08/22: 一、無(wú)菌室1.紫外線(xiàn)消毒①在室溫20℃~25℃時(shí),220V30W紫外燈下方垂直位置1.0m處的253.7mm紫外線(xiàn)輻射強(qiáng)度應(yīng)≥70uW/cm2,低于此值時(shí)應(yīng)更換。適當(dāng)數(shù)量的紫外燈,確保平均每立方米應(yīng)不少于1.5W。②紫外線(xiàn)消毒時(shí),無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)保持清潔干燥。③在無(wú)人條件下,可采取紫外線(xiàn)消毒,作用時(shí)間應(yīng)≥30min。室內(nèi)溫度40℃、相對(duì)濕度大于60%時(shí),應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)照射時(shí)間。④用紫外線(xiàn)消毒物品表面時(shí),應(yīng)使照射表面受到紫外線(xiàn)的直接照射,且應(yīng)達(dá)到足夠的照射劑量。⑤人員在關(guān)閉紫外燈至少30min后方可入內(nèi)作業(yè)

重組質(zhì)粒(dna recombinant plasmid)的連接簡(jiǎn)介2023/08/21: 質(zhì)粒具有穩(wěn)定可靠和操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。如果要克隆較小的DNA片段(＜10kb)且結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，質(zhì)粒要比其它任何載體都要好。在質(zhì)粒載體上進(jìn)行克隆，從原理上說(shuō)是很簡(jiǎn)單的，先用限制性?xún)?nèi)切酶切割質(zhì)粒DNA和目的DNA片段，然后體外使兩者相連接，再用所得到重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細(xì)菌，即可完成。但在實(shí)際工作中，如何區(qū)分插入有外源DNA的重組質(zhì)粒和無(wú)插入而自身環(huán)化的載體分子是較為困難的。通過(guò)調(diào)整連接反應(yīng)中外源DNA片段和載體DNA的濃度比例，可以將載體的自身環(huán)化限制在一定程度之下，也可以進(jìn)一步采取一些特殊的克隆策略，如載體去磷

常見(jiàn)的輔酶功能特點(diǎn)介紹2023/08/21: 常見(jiàn)的輔酶硫胺素即維生素B1。它在生物體內(nèi)的輔酶形式是硫胺素焦磷酸(TPP)。硫胺素焦磷酸過(guò)去也稱(chēng)為輔羧酶。它在動(dòng)物糖代謝中起著重要作用，例如丙酮酸在脫羧作用時(shí)需要它。在TPP缺少的情況下，代謝中間物丙酮酸不能順利脫羧會(huì)積聚于血液和組織中而出現(xiàn)神經(jīng)炎癥狀。TPP還是其他酶例如-酮酸氧化酶、轉(zhuǎn)酮醇酶的輔酶。TPP催化的酶反應(yīng)還需要有鎂離子的存在。煙酰胺是一系列酶類(lèi)的輔酶的前體。很早就知道煙酰胺可以防止糙皮病。1904年已知酒精發(fā)酵時(shí)不能缺少一種叫輔酶Ⅰ的物質(zhì)，1933年這種輔酶Ⅰ被分離出來(lái)。193

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