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原代細(xì)胞、細(xì)胞株與細(xì)胞系的解釋與選擇2023/06/07: 從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。這類細(xì)胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的生長(zhǎng)空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。原代細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，一般認(rèn)為，原代細(xì)胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)出現(xiàn)停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡。原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單

細(xì)胞選擇標(biāo)準(zhǔn)參考，養(yǎng)細(xì)胞必看！2023/06/07: 經(jīng)常聽到不少小伙伴抱怨——細(xì)胞養(yǎng)不出來(lái)，實(shí)驗(yàn)難以進(jìn)行，其實(shí)這也正常，細(xì)胞身嬌體貴難養(yǎng)活，養(yǎng)好細(xì)胞實(shí)屬不易，細(xì)胞沒養(yǎng)好，多半是你沒有給你心愛的細(xì)胞建造一個(gè)溫暖宜居的“房子”。首先，什么是細(xì)胞培養(yǎng)?細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)bi不可少的過(guò)程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)?？寺?。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)bi不可少的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本

標(biāo)準(zhǔn)品的命名規(guī)律及注意事項(xiàng)2023/06/07: 標(biāo)準(zhǔn)品的命名規(guī)律：1、工作標(biāo)準(zhǔn)品shou次標(biāo)定的批號(hào)取四位數(shù)，前兩位為代表標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)定的年份，后兩位為流水號(hào)，例：2010年第一次標(biāo)定批號(hào)為1001，第二次使用新制備的樣品進(jìn)行標(biāo)定批號(hào)則為1002。2、若同一批次重新標(biāo)定則在原批號(hào)加后綴，例如1001-1，第二次復(fù)標(biāo)則為1001-2，依次類推。3、內(nèi)部基準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品按上述原則載加P，例如P1001。無(wú)特殊規(guī)定時(shí)，有效期及復(fù)標(biāo)期如下：1、如無(wú)特殊情況，工作標(biāo)準(zhǔn)品的含量每半年復(fù)標(biāo)一次或另取新生產(chǎn)的樣品標(biāo)定。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品暫不使用時(shí)，復(fù)標(biāo)周期可能超過(guò)規(guī)定周期，在使

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在化學(xué)計(jì)量和測(cè)量中的作用2023/06/07: 隨著全球經(jīng)濟(jì)一體化步伐加快，食品安全、生物、環(huán)保等領(lǐng)域的檢測(cè)技術(shù)飛速發(fā)展，對(duì)于測(cè)量結(jié)果可靠性需求也不斷增加。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為分析測(cè)量過(guò)程中的“化學(xué)砝碼”，可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確一致的測(cè)量，保證量值有效傳遞。那究竟什么樣的物質(zhì)才可稱為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)？標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定義及特點(diǎn)國(guó)家質(zhì)檢總局1987年發(fā)布的《標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理辦法》指出“標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是指用于統(tǒng)一量值的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”。2012年實(shí)施的計(jì)量技術(shù)規(guī)范JJF1001-2011《通用計(jì)量術(shù)語(yǔ)及定義》中對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)則有了更清晰的定義：“標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)又稱參考物質(zhì)（ReferenceMateria

大腸桿菌菌株的分型及區(qū)別簡(jiǎn)介2023/06/06: 1：DH5a菌株DH5a是一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。E.coliDH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時(shí)，可與載體編碼的β－半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α－互補(bǔ)?？捎糜谒{(lán)白斑篩選鑒別重組菌株?；蛐停篎-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3)菌株該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體（如pET系列）的基因。T7

微生物檢驗(yàn)必須掌握的三大耐藥機(jī)制2023/06/06: 你知道什么是微生物檢驗(yàn)嗎?你對(duì)微生物檢驗(yàn)了解嗎?下面是遠(yuǎn)慕生物為大家?guī)?lái)的關(guān)于微生物檢驗(yàn)必須要知道的三大耐藥機(jī)制的知識(shí)，一起了解下吧。一、產(chǎn)生滅活抗生素的各種酶1、β—內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)β—內(nèi)酰胺類抗生素都共同具有一個(gè)核心β—內(nèi)酰胺環(huán)，其基本作用機(jī)制是與細(xì)菌的青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合，從而抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。產(chǎn)生β—內(nèi)酰胺酶是細(xì)菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物產(chǎn)生耐藥的主要原因。細(xì)菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶，可借助其分子中的絲氨酸活性位點(diǎn)，與β—內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)合并打開β—內(nèi)酰胺環(huán)，導(dǎo)致藥物失活。迄今為

溶液的酸堿度pH值為何如此重要？2023/06/06: 在日常工業(yè)過(guò)程中，我們都需要測(cè)試水質(zhì)的pH值，即酸堿度。大家都知道弱堿性的水是健康的，什么是弱堿性呢，也就是在25度下，pH在7.1-7.5之間的水就是弱堿性的水。什么是pH值呢，pH值即氫離子活度的負(fù)對(duì)數(shù)，zui簡(jiǎn)單的方法是用pH試紙來(lái)檢測(cè)，但這種方法不準(zhǔn)確，因此現(xiàn)在都用pH電極來(lái)檢測(cè)，不僅方便，還能快速現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。pH測(cè)試的重要性主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：化學(xué)反應(yīng)速度pH值會(huì)影響溶液的化學(xué)反應(yīng)速度，比如在pH值5時(shí)，氫氟酸對(duì)玻璃的腐蝕性就沒有那么強(qiáng)。化學(xué)藥品的溶解度試劑在水中的溶解度也跟溶液的酸

細(xì)菌鑒定的酶類試驗(yàn)介紹2023/06/06: 細(xì)菌鑒定的酶類試驗(yàn)是細(xì)菌的生化反應(yīng)中酶類的存在與否等生化特性，這些反應(yīng)能夠?qū)е路磻?yīng)體系的PH值變化或產(chǎn)生顯色物質(zhì)，加入合適的酸堿指示劑或顯色劑就可以反映出來(lái)。氧化酶試驗(yàn)氧化酶（細(xì)胞色素氧化酶）是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶。具有氧化酶的細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C氧化，再由氧化的細(xì)胞色素C使對(duì)苯二胺氧化，生成有色的醌類化合物。試驗(yàn)方法1）菌落法：直接滴加氧化酶試劑于被檢菌菌落上；2）濾紙法：取潔凈濾紙一小塊，蘸取菌少許，然后加氧化酶試劑；3）試劑紙片法：將濾紙片浸泡于氧化酶試劑中制成試劑紙片，取菌涂

分離培養(yǎng)基上菌落的生長(zhǎng)現(xiàn)象2023/06/05: 分離培養(yǎng)基上菌落的生長(zhǎng)現(xiàn)象1.觀察菌落：菌落的各種特征包括大小、形狀、突起、邊緣、顏色、表面、透明度和粘度等。根據(jù)細(xì)菌菌落表面特征不同，可將菌落分為三型：（1）光滑型（S型）菌落（2）粗糙型（R型）菌落（3）粘液型（M型）菌落2.血瓊脂上的溶血α溶血：又叫草綠色溶血，菌落周圍血培養(yǎng)基變?yōu)榫G色環(huán)狀；紅細(xì)胞外形完整無(wú)缺。β溶血：又稱wan全溶血，紅細(xì)胞的溶解在菌落周圍形成一個(gè)wan全清晰透明的環(huán)。γ溶血：即不溶血，菌落周圍的培養(yǎng)基沒有變化；紅細(xì)胞沒有溶解或無(wú)缺損。雙環(huán)：在菌落周圍wan全溶解的暈圈外

增殖培養(yǎng)基的成分組成介紹2023/06/05: 培養(yǎng)基的成分包括:碳源、氮源、礦物質(zhì),以及其他必需物質(zhì)。這些成分通過(guò)生物反應(yīng)過(guò)程，生成生物物質(zhì)、生物化工產(chǎn)品，并放出CO2、H2O和熱量。培養(yǎng)基的成分還可以由發(fā)酵過(guò)程中所需的元素出發(fā)，如C、H、O、N、S、P、Mg、K等。此外,必要時(shí)還有一些需要量很少的微量元素,如Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo、B等。在發(fā)酵過(guò)程中某些生物本身不能合成的物質(zhì)，如氨基酸、維生素或核苷酸等，必要時(shí)亦作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)加入到培養(yǎng)基中。碳源具有雙重作用。生物在產(chǎn)生生物物質(zhì)或生物化工產(chǎn)品過(guò)程中，它不僅為其提供碳源，也為其提供

微生物的三種傳統(tǒng)檢測(cè)方法介紹2023/06/05: 傳統(tǒng)檢測(cè)有三種方法：1、直接顯微鏡觀察，正常情況，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、溫度以及培養(yǎng)時(shí)間），同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征?？梢酝ㄟ^(guò)顯微鏡觀察菌落特征對(duì)微生物種類進(jìn)行判斷。2、選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物或人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件，選擇培養(yǎng)基，其作用是允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。選擇培養(yǎng)一般是通過(guò)觀察微生物的同化作用類型或某一特征進(jìn)行間接判斷，得到的微生物往往并不只有一種，但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特征從而對(duì)其分類。3、鑒別培養(yǎng)基，根據(jù)微生物的代

液體細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作步驟2023/06/05: 以光合細(xì)菌培養(yǎng)方法為例光合細(xì)菌培養(yǎng)的方法，按次序分為容器、工具的消毒，培養(yǎng)基的制備，接種和培養(yǎng)管理四個(gè)步驟。（一）容器、工具的消毒參考、此處從略。（二）培養(yǎng)基的制備1．培養(yǎng)用水如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是淡水種，菌種培養(yǎng)可用蒸餾水，生產(chǎn)培養(yǎng)可用消毒的自來(lái)水（或井水）配制。如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是海水種，則用天然海水配制培養(yǎng)基，注意在海水中加入磷元素時(shí)，不能用磷酸氫二鉀，應(yīng)用磷酸二氫鉀，不然會(huì)產(chǎn)生大量沉淀。2．滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中對(duì)支原體污染的預(yù)防措施2023/06/02: 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室發(fā)生支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)較高。支原體天然存在于周圍空氣（氣溶膠形式）、人的體表（攜帶和隱藏）以及未徹di消毒的器物表面，而細(xì)胞培養(yǎng)基中由于含有血清，營(yíng)養(yǎng)豐富，很容易導(dǎo)致支原體的快速繁殖。支原體的污染肉眼不易察覺，直到嚴(yán)重的階段才會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)基變色、細(xì)胞異常等情況。支原體可造成細(xì)胞代謝改變，基因表達(dá)譜發(fā)生變化，從而嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。因此，在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，定期監(jiān)測(cè)是否存在支原體污染，及時(shí)預(yù)防支原體污染是每個(gè)科研人員的工作之一。為防止支原體污染細(xì)胞，可采取以下措施：1、保持無(wú)菌技術(shù)：始終在無(wú)

遠(yuǎn)慕簡(jiǎn)述幾種原代細(xì)胞傳代方法2023/06/02: 原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織（如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等）經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。一股認(rèn)為，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)抱培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代，進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞瘍變、細(xì)胞工程等問(wèn)題的研究。那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，我們應(yīng)該怎么做呢?一股有以下兩種方法：一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白鱷或與EDTA混合液）輕輕接動(dòng)

普通細(xì)菌培養(yǎng)鑒定操作規(guī)程簡(jiǎn)介2023/06/02: 1檢驗(yàn)?zāi)康淖黾膊〉牟≡瓕W(xué)診斷，查找于疾病有關(guān)的病原菌以及了解與疾病的關(guān)系，指導(dǎo)臨床治療及預(yù)后和流行病學(xué)的調(diào)查。2原理人體很多部位與外界相通，存在棲息菌群，但不致病，當(dāng)菌群失調(diào)或分離到致病菌則具有臨床意義；另外機(jī)體某些部位是無(wú)菌的，如檢出則視為致病菌。并排除采樣及操作污染。3標(biāo)本要求（1）標(biāo)本類型：，骨髓，腦脊液，胸水，腹水，尿液，等；痰液，前列腺液，膿液，組織分泌物或穿刺液等。（2）標(biāo)本采集：見標(biāo)本采集手冊(cè)（3）標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸：室溫放置，室溫運(yùn)輸并立即送檢。人泌尿生殖道標(biāo)本如白帶前列腺液等需臨床

遠(yuǎn)慕分享：細(xì)菌鑒定的五種方法2023/06/02: 1．生化鑒定是細(xì)菌鑒定中最重要的一種，主要是借助細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分解能力的不同及其代謝產(chǎn)物的差異對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒定，包括蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)、糖分解產(chǎn)物試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)等。2．血清學(xué)鑒定適用于含較多血清型的細(xì)菌，常用方法是玻片凝集試驗(yàn)，并可用免疫熒光法、協(xié)同凝集試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方法快速、靈敏地檢測(cè)樣本中致病菌的特異性抗原。用已知抗體檢測(cè)未知抗原（待檢測(cè)的細(xì)菌），或用已知抗原檢測(cè)患者血清中的相應(yīng)抗細(xì)菌抗體及其效價(jià)。血清學(xué)鑒定操作簡(jiǎn)單快速，特異性高，

實(shí)驗(yàn)中使用培養(yǎng)箱需注意的技術(shù)細(xì)節(jié)2023/06/01: 使用培養(yǎng)箱注意一些技術(shù)細(xì)節(jié)：（1）培養(yǎng)箱應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，操作盤上的任何開關(guān)和調(diào)節(jié)旋扭一旦固定后，不要隨意扭動(dòng)，以免影響箱內(nèi)溫度，CO2、濕度的波動(dòng)，同時(shí)降低機(jī)器的靈敏度。（2）所加入的水必須是蒸餾水或無(wú)離子水，防止礦物質(zhì)儲(chǔ)積在水箱內(nèi)產(chǎn)生腐蝕作用。每年必須換一次水。經(jīng)常檢查箱內(nèi)水是否夠。（3）箱內(nèi)應(yīng)定期用消毒液擦洗消毒，擱板可取出清洗消毒，防止其它微生物污染，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。（4）定期檢查超溫安全裝置，以防超溫。方法為按進(jìn)監(jiān)測(cè)報(bào)警按扭，轉(zhuǎn)動(dòng)固定螺絲，直到超溫報(bào)警裝置響，然后關(guān)閉超溫安全燈。（5）如

影響免疫組化的因素及對(duì)策2023/06/01: 一）免疫組化染色假陽(yáng)性及其對(duì)策1、消除內(nèi)源酶的影響在涉及免疫過(guò)氧化酶的各種染色中，均用過(guò)氧化物酶來(lái)標(biāo)記抗體，酶的作用是催化底物，使顯色劑顯色，正常組織中也含有一定量的過(guò)氧化物酶，其同樣也能催化底物顯色，而影響免疫組化染色的特異性，因此在加入標(biāo)記酶前應(yīng)設(shè)法將其滅活，以保證染色反應(yīng)的特異性。通常情況下，去除內(nèi)源酶的方法是先用3%的過(guò)氧化氫溶液作用，但在含有豐富血細(xì)胞的標(biāo)本中，由于血細(xì)胞中存在大量具有活性的過(guò)氧化物酶，能與過(guò)氧化氫產(chǎn)生強(qiáng)烈的反應(yīng)，產(chǎn)生氣泡而破壞組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)。在OCT包埋的冰凍切片

質(zhì)粒克隆載體的設(shè)計(jì)和構(gòu)建的原則說(shuō)明2023/06/01: ①選擇合適的出發(fā)質(zhì)粒出發(fā)質(zhì)粒也叫親本質(zhì)粒，它應(yīng)含有質(zhì)粒克隆載體bi備的元件，如復(fù)制起始位點(diǎn)、選擇標(biāo)記基因、克隆位點(diǎn)、啟動(dòng)子和終止子等。②正確獲得構(gòu)建質(zhì)?？寺≥d體的元件一般采用限制性核酸內(nèi)切酶切割出質(zhì)粒DNA分子，獲得含有某種元件的DNA片段，還可以采用PCR技術(shù)從靶DNA中擴(kuò)增出含某種元件的特異性DNA片段。③組裝合適的選擇標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)?？寺≥d體應(yīng)該組裝什么樣的選擇標(biāo)記基因，必須根據(jù)要轉(zhuǎn)化的受體細(xì)胞的特性來(lái)決定。④選擇合適的啟動(dòng)子為了構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒的克隆載體，必須組裝合適的啟動(dòng)子，當(dāng)設(shè)計(jì)真核生

質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌實(shí)驗(yàn)操作步驟2023/06/01: 該實(shí)驗(yàn)主要有兩個(gè)用途：1．重組質(zhì)粒的鑒定。當(dāng)質(zhì)粒的重組或其它載體重組后，通常會(huì)發(fā)生質(zhì)粒的重組失敗，包括質(zhì)粒的自身環(huán)化。因而要求進(jìn)行篩選，把重組成功的質(zhì)粒找出來(lái)。在目前常用的質(zhì)粒和其它載體中含有相應(yīng)的抗生素抗性基因，一旦重組成功，質(zhì)粒環(huán)化（包括自身環(huán)化），抗生素抗性基因表達(dá)，被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌便具備抗相應(yīng)抗生素的能力，可以含該抗生素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)傳代，不然，重組失敗，大腸桿菌便不能抵抗該抗生素而死亡。2.為擴(kuò)增質(zhì)粒和其它載體作準(zhǔn)備。由于大腸桿菌繁殖快，在適宜的條件下繁殖一代僅需要20~30分鐘，而且

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