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遠慕簡述昆蟲細胞系統(tǒng)的蛋白表達與純化2023/06/25

昆蟲表達體系是四大蛋白表達系統(tǒng)（原核細胞，酵母，昆蟲細胞，真核哺乳動物表達體系）之一。昆蟲表達系統(tǒng)的原理是通過將轉(zhuǎn)移載體中的表達組件轉(zhuǎn)座到大腸桿菌中增殖的桿狀病毒穿梭載體上，提取穿梭質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染昆蟲細胞后，得到的子代病毒即為重組病毒。將病毒上清侵染昆蟲細胞，獲得表達的重組蛋白。昆蟲表達體系有很多優(yōu)點：1、具有糖基化，乙酰化，磷酸化作用等蛋白翻譯加工修飾；2、易于操作。桿狀病毒基因組較小，分子生物學(xué)特性簡單；3、昆蟲細胞懸浮生長，容易放大培養(yǎng)；4、可表達較大的外源性基因而不影響本身增殖；5、可以

細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)昆蟲細胞注意事項2023/06/25

昆蟲細胞是主要提取來自昆蟲的一類真核細胞。通過培養(yǎng)制造宿主的病毒，可以引起昆蟲流行病，但對人畜和植物無害，因而可作病毒殺蟲劑，還可以生產(chǎn)某些藥用蛋白。細胞培養(yǎng)瓶是培養(yǎng)昆蟲細胞常用的一種細胞培養(yǎng)耗材，那么在培養(yǎng)昆蟲細胞時需要注意哪些問題呢？1、溫度與環(huán)境：昆蟲細胞一般應(yīng)該在27℃、非濕化的環(huán)境中培養(yǎng)，建議不要進行二氧化碳交換，所以細胞培養(yǎng)瓶盡量選擇密閉的蓋子。2、培養(yǎng)基：不同細胞對培養(yǎng)基的需求也有所差異，應(yīng)該根據(jù)細胞生長特性，選擇昆蟲細胞專用的培養(yǎng)基。3、貼壁昆蟲細胞：細胞密度低于匯合狀態(tài)的20%

酶抑制劑的作用機制說明2023/06/21

酶抑制劑是指特異性作用于酶的某些基團，降低酶的活性甚至使酶wan全喪失活性的物質(zhì)。是很多外來化合物產(chǎn)生毒作用的機理?？煞譃椋孩俨豢赡嫘砸种?，抑制劑與酶活性中心的必需基團結(jié)合，這種結(jié)合不能用稀釋或透析等簡單的方法來解除。如有機磷農(nóng)藥與膽jian堿酶活性中心的絲an酸羥基結(jié)合，一些重金屬離子與多種酶活性中心半胱an酸殘基的－SH結(jié)合。②可逆性抑制，有競爭性和非競爭性兩種，競爭性抑制是抑制劑和底物爭相與酶結(jié)合，增加底物濃度可使抑制減弱，如丙二酸抑制琥珀酸脫氫酶；非競爭性抑制可以降低酶的活性，如qing

植物提取物常用檢測方法介紹2023/06/21

含量測定的定量分析法大類上主要包括：色譜分析法,光譜分析法，定量分析法。一、色譜分析法色譜分析法是一種分離分析方法，系根據(jù)混合物中各組分的色譜行為差異，將組分從混合物中分離后再選擇性對待測組分進行分析的方法。因此色譜分析法是分析混合物的最有力的手段。1.高效液相色譜法（HPLC）HPLC全稱是HighPerformanceLiquidChromatography（高效液相色譜法），又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，

表達蛋白檢測實驗操作步驟2023/06/20

實驗方法原理當(dāng)重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預(yù)期的大小以及是否從感染細胞中分泌。下面的步驟是介紹檢測非分泌性（細胞內(nèi)）蛋白的，如果重組蛋白是分泌到培養(yǎng)基中的，可按注解中的步驟操作。實驗材料生長至匯片的單層BS-C-1細胞重組痘苗病毒儲液試劑、試劑盒wan全MEM-5培養(yǎng)基胰酶細胞裂解液5×SDS樣品緩沖液儀器、耗材6孔組織培養(yǎng)板Sorvall離心機95℃水浴鍋實驗步驟1.用生長至匯片的單層BS-C-1細胞建立病毒感染細胞培養(yǎng)液（見基本方案1步驟1~5）。

細胞裂解液各成分的作用與制備過程2023/06/20

細胞裂解液各成分的作用：1、第一種50mmol/LTris-HCl是緩沖液，保證細胞裂解時PH值也能穩(wěn)定，Tris是一種有機堿。2、第二種1.0mmol/LEDTA是一種金屬螯合劑。3、第三種150mmol/LNaCl是等滲體系電解質(zhì)，用于協(xié)調(diào)細胞膜內(nèi)外離子平衡。4、第四種0.1%SDS是十二烷基硫酸鈉，是一種表面活性劑和還原劑，有增溶作用。制備細胞裂解液實驗流程：1.收集胰蛋白酶消化的細胞并離心，用PBS清洗。2.用100μl裂解緩沖液冰浴溶解沉淀10min（每500000個細胞20μl裂解緩

動物細胞融合的誘導(dǎo)方法介紹2023/06/20

動物細胞融合也稱細胞雜交（cellhybridization），是指兩個或多個動物細胞融合成一個細胞的過程，融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞（hybridcell）。誘導(dǎo)細胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動，電刺激）。某些病毒如：仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusionprotein），可介導(dǎo)病毒同宿主細胞融合，也可介導(dǎo)細胞與細胞的融合，因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導(dǎo)細胞融合?；瘜W(xué)

細胞融合的方法與注意事項2023/06/20

一、細胞融合的方法有三種：生物方法、化學(xué)方法、物理方法。二、細胞融合也稱細胞雜交,是指細胞通過介導(dǎo)和培養(yǎng),在離體條件下用人工方法將不同種的細胞通過無性方式融合(合并)成一個核或多核的雜合細胞的過程。體細胞融合后可形成四倍體或多倍體細胞，由此形成的雜交細胞，其特性會有很大的變化。三、化學(xué)誘導(dǎo)融合1.鹽類融合法。此法是應(yīng)用最早的誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法。鹽類融合劑對原生質(zhì)體的破壞小。今后研究應(yīng)提高其融合率,使其對液泡化發(fā)達的原生質(zhì)體能夠誘發(fā)融合。2.高鈣和高pH值融合法。高Ca2+和高pH值可以誘發(fā)融

細胞株凍存和復(fù)蘇實驗詳細說明2023/06/19

1.細胞株取材要求新鮮，無菌，解剖小鼠時，注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器，尤其是腸道等，防止污染脾臟。2.沖洗脾臟時要盡量洗凈血污，去除無用組織，并要防止組織干燥。3.碾磨后及時用清水沖洗篩網(wǎng)，防止組織、細胞阻塞網(wǎng)孔。4.計數(shù)前，注意吸盡平皿里的細胞，充分混勻，使細胞分散成單個細胞。5.實驗操作應(yīng)在操作臺*無菌區(qū)域內(nèi)進行，勿在邊緣非無菌區(qū)域操作。6.金屬器械不能在火焰中燒的時間過長，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。7.另外膠塞過火焰時也不能時間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害

培養(yǎng)細胞所需的基本條件說明2023/06/19

1.動物細胞培養(yǎng)在所有的細胞離體培養(yǎng)中，困難的是動物細胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件。⑴血清:動物細胞離體培養(yǎng)常常需要血清。常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子，如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。有一天人們真正學(xué)會了配制和血清一樣的培養(yǎng)液，那時血清才可被取代。在這里，血清等于是動物細胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液。⑵支持物:大多數(shù)動物細胞有貼壁生長的習(xí)慣。離體培養(yǎng)常用玻璃，高速冷凍離心機，塑料等作為支持物。⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細胞培養(yǎng)過程中不斷進行調(diào)節(jié)，不斷維持所需要的氣體條件，每一次

細胞老化還有救嗎？遠慕教大家如何防止細胞老化2023/06/19

大家在養(yǎng)細胞的時候，想必大家也一定遇到過細胞狀態(tài)差這種情況，但是細胞狀態(tài)差，有很多種原因造成。細胞狀態(tài)很差，常常出現(xiàn)的現(xiàn)象是：細胞邊緣不清晰、細胞不飽滿、折光性差、背景比較臟、黑點很多、細胞碎片多（細胞凋亡后的細胞碎片）、單個細胞內(nèi)有空泡（凋亡）且空泡比較多；如果細胞出現(xiàn)老化，也就是細胞比較扁平、增殖減緩、細胞核體積增大、細胞突觸變多，此時觀察到的細胞狀態(tài)也是不正常的。所以，除了考慮血清和細菌污染的問題，細胞老化也不容忽視~何為細胞老化？1882年，德國生物學(xué)家Weismann曾大膽預(yù)測“在細胞

無血清培養(yǎng)基的組成和作用介紹2023/06/19

在細胞培養(yǎng)中大多數(shù)動物細胞體外培養(yǎng)時都需要加入血清提供營養(yǎng)，但由于血清存在很多潛在風(fēng)險，促使科學(xué)家們進行無血清馴化細胞的研究。所以，在1976年Hayashi等人提出了無血清培養(yǎng)基的概念，此后，大量生物醫(yī)藥學(xué)家開始對無血清培養(yǎng)基進行研制。80年代后，無血清培養(yǎng)基的研究與制備廣泛發(fā)展，到90年代已有一些商業(yè)化無血清培養(yǎng)基。與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比較，無血清培養(yǎng)基是不含動物血清，但仍可以維持細胞在體外較長時間生長、增殖的一種培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基由于其組成成分相對清楚，制備過程簡單，在現(xiàn)代生物技術(shù)學(xué)領(lǐng)域得到

指示劑的分類、用量以及配制說明2023/06/16

一、指示劑分類：1、酸堿指示劑。指示溶液中H+濃度的變化，是一種有機弱酸或有機弱堿，其酸性和堿性具有不同的顏色。指示劑酸HIn在溶液中的離解常數(shù)Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的顏色決定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又決定于[H+]。以甲基橙(Ka=10-3.4)為例，溶液的pH4.4時，呈堿性，具黃色;而在pH3.1~4.4，則出現(xiàn)紅黃的混合色橙色，稱之為指示劑的變色范圍。不同的酸堿指示劑有不同的變色范圍。2、金屬指示劑。絡(luò)合滴定法所用的指示劑，大多是染料，它在

實驗室生物安全，要注意這幾點！2023/06/16

1.質(zhì)量與生物安全管理體系的建立實驗室質(zhì)量管理體系的建立是要有明確的目的及規(guī)范的管理，有效的制約和高效的機制，能自我發(fā)展和完善的有機整體。在病原微生物實驗室進行的檢測工作的質(zhì)量管理作為單位質(zhì)量管理體系的有機組成部分有關(guān)生物安全方面的特殊要求包括：實驗室準(zhǔn)入，操作規(guī)范，個人防護、健康監(jiān)護、消毒效果評估，菌毒種保管，廢棄物處理和意外處置、實驗室生物風(fēng)險評估等各項生物安全規(guī)章制度應(yīng)編入單位實驗室質(zhì)量體系文件;質(zhì)量與生物安全管理體系必須確定總負責(zé)人，明確管理部門，檢測部門、保障部門、部門職責(zé)、相互關(guān)系以

實驗中移液管的使用訣竅分享2023/06/16

移液管是檢化驗經(jīng)常使用的玻璃計量儀器，有各種形狀，最普通的是中部吹成圓柱形，圓柱形以上及以下為較細的管頸，下部的管頸拉尖，上部的管頸刻有一環(huán)狀刻度。移液管為精密轉(zhuǎn)移一定體積溶液時用的。移液管的使用訣竅1、使用時，應(yīng)先將移液管洗凈，自然瀝干，并用待量取的溶液少許蕩洗3次。2、然后以右手拇指及中指捏住管頸標(biāo)線以上的地方，將移液管插入供試品溶液液面下約1cm，不應(yīng)伸入太多，以免管尖外壁粘有溶液過多，也不應(yīng)伸入太少，以免液面下降后而吸空。這時，左手拿橡皮吸球（一般用60mL洗耳球）輕輕將溶液吸上，眼睛注

雙向電泳的實驗過程介紹2023/06/16

實驗原理2-DE的第一向電泳等電聚焦是基于等電點不同而將蛋白粗步分離，第二向SDS-PAGE是基于蛋白質(zhì)分子量不同，而將一向分離后的蛋白進一步分離。這樣就可以得到蛋白質(zhì)等電點和分子量的信息。主要試劑1.BSA2.Bradford液3.DTT4.0.05%的溴酚蘭5.IPGbuffer(pH3-10)主要設(shè)備1.振蕩器2.高速離心機3.紫外分光光度計4.雙向電泳設(shè)備實驗材料純化后的晶體蛋白實驗步驟1.樣品的溶解取純化后的晶體蛋白3.0mg，加入300ul裂解液(1mg蛋白:100ul裂解液)振蕩器

實驗人請正確進行培養(yǎng)基質(zhì)量控制！2023/06/15

正確進行培養(yǎng)基質(zhì)量控制，并作為一項經(jīng)常性的工作，建立完整的檢驗資料，是實驗室今后通過相應(yīng)級別的認證，在整個檢驗質(zhì)量控制體系中所必須具備的文件資料。1、常用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制檢驗項目與方法：對新批號的干燥培養(yǎng)基物理、化學(xué)及生物學(xué)指標(biāo)鑒定。A：感官（外觀）研細程度和顏色（溶解前后），透明度，雜質(zhì)等。B：PH測定，按各種培養(yǎng)基要求的PH±0.2，蒸餾水的PH應(yīng)在6.4-7.0之間。C：生物學(xué)指標(biāo)檢定，被檢培養(yǎng)基相應(yīng)細菌生長率測試；菌落大小及特征的檢測。生長率測試：適用與液體和固體培養(yǎng)基：將菌培養(yǎng)液，用生

細菌的生化反應(yīng)檢查法介紹2023/06/15

由于細菌各自的酶系統(tǒng)不同，新陳代謝的產(chǎn)物也有所不同，而這些產(chǎn)物又各具有不同的生物化學(xué)特性。為此，可利用生物化學(xué)的方法來鑒別一些在形態(tài)和其它方面不易區(qū)別的細菌，這種試驗稱為細菌的生化反應(yīng)試驗。1、在培養(yǎng)物中加入某種底物與指示劑，經(jīng)接種、培養(yǎng)后，觀察培養(yǎng)基的PH值變化。2、在培養(yǎng)物中加入試劑，觀察它們同細菌代謝產(chǎn)物所生成的顏色反應(yīng)。3、根據(jù)酶作用的反應(yīng)特性，測定酶的存在。4、根據(jù)細菌對理化條件和藥品的敏感性，觀察細菌的生長情況。生化試驗的注意事項1、待檢菌應(yīng)是新鮮培養(yǎng)物。培養(yǎng)18-24h。2、待檢菌

大腸桿菌檢測培養(yǎng)基的配方及原理2023/06/15

本文主要對大腸桿菌微生物檢測培養(yǎng)基的配方及原理進行了介紹，為化學(xué)實驗從業(yè)人員提供參考！1、月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(LST)原理：月桂基硫酸鈉，別名月桂醇硫酸鈉，表面活性作用強，具有乳化作用。一種優(yōu)質(zhì)蛋白胨，是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化，濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等胰蛋白胨或胰酪胨20g提供碳源和氮源滿足細菌生長的需求。配方：（g/L）2、煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯（BrilliantGreenLactoseBileBroth

干粉培養(yǎng)基配制后出現(xiàn)沉淀原因總結(jié)2023/06/15

自己購買干粉培養(yǎng)基配制后，總是會出現(xiàn)沉淀的現(xiàn)象。現(xiàn)總結(jié)可能是以下幾種原因。一、稱量錯誤天平稱量不準(zhǔn)確、計算稱量錯誤導(dǎo)致配制培養(yǎng)基的濃度不正確，都有可能導(dǎo)致岀現(xiàn)部分沉淀。二、水質(zhì)不佳多數(shù)培養(yǎng)基的制備需要使用純化水、去離子水配制，而天然水中含有含有較多的礦物鹽離子，若錯誤的使用了自來水，礦泉水配制，或使用的純化水離子未除凈，都有可能導(dǎo)致培養(yǎng)基滅菌后岀現(xiàn)渾濁現(xiàn)象或沉淀（磷酸鹽含量高的培養(yǎng)基更易出現(xiàn)此類問題。三、培養(yǎng)基pH不正確偏酸或偏堿的pH有可能使培養(yǎng)基中的部分金屬離子產(chǎn)生沉淀。四、容器不干凈新開封