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RIPA裂解液使用問題看這篇就夠了！2023/07/21

1.什么是RIPA裂解液？RIPA裂解液（RadioImmunoprecipitationAssayLysisbuffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統(tǒng)的可用于裂解細胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細胞膜（包括核膜），從組織或細胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規(guī)的WB、IP、co-IP等實驗。2.RIPA裂解液里有什么？RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細胞膜和蛋白

WB試驗中常用細胞裂解液及酶抑制劑介紹2023/07/21

1、細胞裂解液細胞裂解液作用：(1)利用去污劑破壞脂質雙分子層，破裂細胞；(2)溶解蛋白；(3)蛋白變性使其穩(wěn)定；(4)抑制蛋白酶活性。細胞裂解成分一般使用的是表面活性劑，常用的有曲拉通X-100（TritonX-100）、脫氧膽（deoxycholate）、乙基苯基聚乙二醇（NonidetP40，NP-40）、十二烷基磺酸鈉（SDS）。其中TritonX-100和NP-40為非離子型，deoxycholate和SDS為離子型。不同裂解成分的裂解強度不同，一般來說TritonX-100和SDS的

標準品的制備、鑒定、與計量說明2023/07/20

一、標準品的制備標準品的制備是非常復雜的問題，也是標記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標準品(或商品化試劑中標準品)的制備。（1）基質的制備：如前所述，作為標準品的介質(基質)成分應與被測樣品相同。對大多數(shù)用于測定血清中某物質的標準品，應用不含被測物質的零血清制備，以求反應的介質環(huán)境相當。但有時零值血清的制備十分困難，所以有些標準品用適當?shù)木彌_液制備，并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其與樣品的介質環(huán)境相近。零值血清的制備方法有：A、吸

免疫定量分析中標準品的制備要求2023/07/20

標準品是標記免疫分析定量的依據(jù)。標準品的正確與否直接影響樣品的測定結果。如果在連續(xù)測定中，或各實驗室之間使用的標準品不一致，則可影響到實驗結果的可比性。為此，對標記免疫分析所使用的標準品應滿足如下要求。1、化學結構：原則上標準品應與被測物具有wan全相同的化學結構，包括相同的立體化學結構。但在實際工作中，用化學結構wan全相同的物質作標準品是十分困難的。這是由于一方面來源有限，另一方面有些被測物本身的化學結構還不清楚，或是有明顯的異型性。所以有時也用結構類似的物質作標準品。此時，應充分了解這些物

溶菌酶的制備原理和操作方法2023/07/19

實驗概要本實驗介紹了溶菌酶（lysozyme）的制備及其性質測定的原理和操作方法。實驗原理溶菌酶（lysozyme）是由弗萊明在1922年發(fā)現(xiàn)的，它是一種有效的抗菌劑，全稱為1，4-β-N-溶菌酶，又稱作粘肽N-乙?；邗Ｋ饷富虬谫|酶?；钚灾行臑樘於彼?2和谷氨酸35，是一種糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N-乙酰氨基葡萄糖（NAG）與N-乙酰胞壁酸（NAM）間的β-1，4糖苷鍵，相對分子質量14700Da，由129氨基酸殘基構成，由于其中含有較多堿性氨基酸殘基，所以其等電點高達10.8左

細菌的接種與分離技術方法介紹2023/07/19

（一）平板劃線分離法在被檢標本中，?；祀s有多種細菌，平板劃線分離法可使這多種細菌在培養(yǎng)基表面分散生長，各自形成菌落，以便根據(jù)菌落的形態(tài)及特征，挑選單個菌落進行純培養(yǎng)。常用的平板劃線分離法有以下兩種：1.連續(xù)劃線分離法此法主要用于雜菌不多的標本。用接種環(huán)取標本少許，于平板1/5處密集涂布，然后來回作曲線連續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。2.分區(qū)劃線分離法本法適用于雜菌量較多的標本。先將標本均勻涂布于平板表面邊緣一小區(qū)（第一區(qū)）內(nèi)，約占平板1/5面積，再在二、三、……區(qū)依次連續(xù)劃線。每

藥物雜質的分類和研究規(guī)范2023/07/18

藥物雜質因其可能對藥品質量、安全性和有效性產(chǎn)生影響，目前成為國內(nèi)外藥品監(jiān)管機構的重點關注內(nèi)容之一。那么，你知道藥物雜質都是怎么劃分的嗎？接下來跟著遠慕一起了解一下。雜質控制要合理，即合理地確定雜質檢查項目與限度，合理地選擇雜質檢查方法。有機雜質在藥品質量標準中的項目名稱：1、以雜質的化學名稱作為項目名稱當被檢查的雜質是已知化合物時(特定雜質)，就以該化合物的化學名稱作為質量標準中的項目名稱。例如:卡比馬唑及其片劑中的“甲巰咪唑',阿司匹林中的“游離水楊酸”、磷酸可dai因中的“ma啡”等。如果雜

實驗室數(shù)據(jù)誤差造成原因及解決方法2023/07/18

在日常檢測中，有的時候雖然我們的檢測方法優(yōu)良，儀器設備檢定合格，環(huán)境條件滿足檢測要求，檢測員技術嫻熟，但是，往往得到的檢測結果卻不可能是絕對準確的。即使是同一個檢測人員對同一個檢測樣品、對同一項檢測項目進行多次檢測，得到的結果也不會wan全相同，總會產(chǎn)生各種不同的差別，換句話說，任何項目的檢測都不可能是絕對準確的，測得值與真實值之間總是或多或少的存在著差別，即誤差。1、實驗室表示誤差的常用術語有哪些準確度測量結果與真實值之間一致的程度。（測量結果與真實值差值越小，準確度越高）準確度只是一個定性概

實驗室試劑變質還能用嗎？如何預防化學試劑變質2023/07/17

實驗室試劑在開啟后受到空氣、水分、光照和溫度的影響會發(fā)生物理化學變化，發(fā)生變質。一個實驗室，難免會有或多或少過期的化學試劑。過期的試劑還可以使用嗎？一般情況下，化學試劑的保質期為1-2年，有些性質穩(wěn)定的保存期就長點，這取決于正確的保存方法。這就需要考慮存儲條件是否符合說明書上的要求，例如溫度、光照和濕度等，對于那些沒有明確存儲條件的試劑，更要注意存儲條件，通常高溫、暴曬和高濕度，非常容易造成產(chǎn)品的失效。未開啟的化學試劑，保質期到了未必就不能用。如果你之前能夠記錄周圍環(huán)境的變化，特別是遇到一些ji

實驗室細胞培養(yǎng)被污染的處理方法2023/07/17

實驗室細胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。1.細菌污染細菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據(jù)感染菌的種類不同，可能會呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會變得渾濁、黃色，對細胞生長有明顯影響。2.霉菌污染正常情況下，培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩三天，在倒置顯微鏡下仍保持透明，無雜質。一旦出現(xiàn)絮狀雜質，顯微鏡下可見絲狀和團塊狀漂浮物，菌絲明顯。此時，雖然細胞仍在生長，但它們的生命狀態(tài)會在長時間后逐漸惡化。3.支原體污染支原體是隱蔽的污染物，不能通

化學試劑中液體試劑取用規(guī)則2023/07/14

化學試劑按照形態(tài)的差異分為固體、液體、粉末、顆粒等不同種類，針對不同的試劑需要選用符合其特性的試劑瓶，所以試劑在取用時也會有所差別。為了防止試劑灑出來，同時避免試劑揮發(fā)，液體試劑主要存放在瓶口較小的細口瓶中，取用時遵循以下規(guī)則：1、用少量液體試劑時，常使用膠頭滴管吸取，用量較多時則采用傾瀉法。2、從細口瓶中將液體傾入容器時，把試劑瓶上貼有標簽的一面握在手心，另一手將容器斜持、并使瓶口與容器口相接觸，逐漸傾斜試劑瓶，倒出試劑。3、試劑應該沿著容器壁流入容器，或沿著潔凈的玻棒將液體試劑引流入細口或平

瓊脂糖凝膠濃度選擇與平均孔徑的關系2023/07/14

瓊脂糖凝膠電泳儀是以瓊脂糖凝膠作為載體的電泳，廣泛用于核酸研究。瓊脂糖凝膠屬于大孔膠，可分析分子量為107的大分子，這種大孔特性有利于免疫電泳和微量制備。瓊脂糖形成凝膠后孔徑的大小取決于瓊脂糖凝膠濃度，瓊脂糖凝膠濃度與平均孔徑的關系如下：一、瓊脂糖凝膠濃度為0.075%時，平均孔徑為800nm。二、瓊脂糖凝膠濃度為0.16%時，平均孔徑為500nm。三、瓊脂糖凝膠濃度為1%時，平均孔徑為150nm。四、瓊脂糖凝膠濃度為2%時，平均孔徑為20nm。瓊脂糖凝膠的濃度選擇：目的產(chǎn)物大小80BP的片段，

固定化細胞的原理及固定化酶應用介紹2023/07/13

細胞的種類多種多樣，大小和特性個不相同，故此細胞固定化的方法有很多種。歸結起來，主要可以分為吸附法和包埋法兩大類。吸附法利用各種吸附劑，將細胞吸附在其表面而使細胞固定的方法稱為吸附法。用于細胞固定化的吸附劑主要有硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料、金屬絲網(wǎng)、微載體、和中空纖維等。酵母細胞帶有負電荷，在pH3~5的條件下能夠吸附在多孔陶瓷、多孔塑料等載體的表面，制成固定化細胞，用于酒精和啤酒等的發(fā)酵生產(chǎn)；在環(huán)境保護領域內(nèi)使用的活性污泥中含有各種各樣的微生物，這些微生物可以沉積吸附在硅藻土、多孔玻

間苯二酚分析實驗的試劑制備方法2023/07/13

一、溴滴定液（0.05mol/L）配制：取溴酸鉀3.0g與xiu化鉀15g，加水適量使溶解成1000mL，搖勻。標定：精密量取本液25mL，置碘瓶中，加水100mL與碘hua鉀2.0g，振搖使溶解，加鹽酸5mL，密塞，振搖，在暗處放置5分鐘，用硫代liu酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至近終點時，加淀粉指示液2mL，繼續(xù)滴定至藍色消失。根據(jù)硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）的消耗量，算出本液的濃度，即得。室溫在25℃以上時，應將反應液降溫至約20℃。本液每次臨用前均應標定濃度。貯藏：置玻璃塞

【技術干貨】PCR實驗中常見問題及解決方案2023/07/12

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。我們進行核酸擴增時，經(jīng)常會不定的出現(xiàn)一些異常問題，那么遇到這些問題該怎么解決呢？接下來跟著遠慕一起來看看前輩們的經(jīng)驗。沒有ct值檢測結果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:1.循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán)，不僅背景值提高,定量也不準);2.PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集，TaqMan法則一般在

動物血清的區(qū)分比較與作用2023/07/12

血清主要作用是提供基本營養(yǎng)物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用。由于血清來源于動物，且含有細胞培養(yǎng)中所需的各種營養(yǎng)（血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等），這奠定了血清是細胞培養(yǎng)實驗中最pu遍的試劑的基礎。市面上的牛血清產(chǎn)品名稱雖然五花八門，但根據(jù)其不同的特性，追其根本，但大致可分為以下四種。根據(jù)牛的取血年齡可以區(qū)分：胎牛血清（FoetalBovineSerum，簡稱FBS）指的是取自未出生，

實驗室培養(yǎng)基pH值監(jiān)控的注意事項2023/07/11

pH值是培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目，微生物的生長不僅依賴豐富的營養(yǎng)，還需要在適宜的pH值范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性，因此培養(yǎng)基pH值是否符合要求直接影響微生物檢驗結果。1、培養(yǎng)基配置：配料—溶解—調(diào)PH—過濾—分裝—包扎—滅菌—擺斜面—貯存1.配料配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。2.溶解淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃，且需要邊加

關于PCR常見問題與解決方法！2023/07/11

01、PCR產(chǎn)物的電泳檢測時間一般為48h以內(nèi)，有些最好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規(guī)則甚致消失。02、假陰性，不出現(xiàn)擴增條帶PCR反應的關鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備②引物的質量與特異性③酶的質量及活性④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應針對上述環(huán)節(jié)進行分析研究。一、模板1、模板中含有雜蛋白質2、模板中含有Taq酶抑制劑3、模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白4、在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚5、模板核酸變性不徹di。在酶和引物質量好時，不出現(xiàn)擴增帶，極有可能是標本的消化處理，模板

蛋白質、多肽液相色譜純化方法簡介2023/07/10

1、純化的一般目標和方法首先，自然來源或者重組表達的蛋白質經(jīng)過一些粗提的步驟(例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等)成為穩(wěn)定的可以用于色譜分離的樣品。然后進行捕獲色譜(capturechromatography)，主要目標是濃縮和去除大量的容易去除的雜質，此步最關心的是流速和載量，常采用高載量、快流速凝膠。經(jīng)過濃縮的部分純化的樣品進行中級色譜(intermediatechromatography)，目的是去除較難去除的雜質，此步最關心的是分辨率，常采用高分辨率的細顆粒凝膠。最后為了得到符合要求的最終產(chǎn)

真菌的DNA和RNA提取方法介紹2023/07/10

一、真菌DNA的提取(方法一)1.實驗試劑(1)DNA提取液:0.2MTris-HCl(pH7.5),0.5MNaCl,0.01MEDTA,1％SDS(2)3MNaAc(3)TE:10mmol/LTris-HClpH8.0,1mmol/LEDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:異戊醇(25:24:1)(5)氯仿:異戊醇(24:1)(6)異丙醇(7)無水乙醇(8)75%乙醇(9)RNaseA2.實驗步驟(1)取真菌菌絲0.5g,在液氮中迅速研磨成粉(2)加入4mL提取液,快速振蕩混勻(3)加入等體積