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使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品的十個(gè)注意事項(xiàng)2022/10/21: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)樣品使用的十個(gè)注意點(diǎn)正確使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)樣品是保證測(cè)量量值準(zhǔn)確、可靠的重要手段。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的正確使用包括正確的選擇、正確的使用（防止誤用）和使用中的注意事項(xiàng)。1、使用者根據(jù)要進(jìn)行的測(cè)量程序之目的，從國(guó)家質(zhì)檢總局發(fā)布的“標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品目錄”中選擇相應(yīng)種類的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。從“目錄”中發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)特性量值選擇與預(yù)期應(yīng)用測(cè)試量值水平相適應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。使用者不應(yīng)選用不確定度超過(guò)測(cè)量程序所允許水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。在一般工作場(chǎng)所可以選用二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。對(duì)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證、方法驗(yàn)證、產(chǎn)品評(píng)價(jià)與仲裁等可以選用

遠(yuǎn)慕分享：流式抗體選擇小技巧2022/10/20: 由于在流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，熒光抗體對(duì)單細(xì)胞懸液的標(biāo)記效果直接影響實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)質(zhì)量。因此，需要考慮各種影響流式抗體品質(zhì)及檢測(cè)效果的因素，例如抗體特異性、熒光素信號(hào)強(qiáng)弱、熒光素標(biāo)記方式、同型對(duì)照等。流式抗體的選擇：1.流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標(biāo)蛋白特異性，反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。2.流式抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，盡量減少實(shí)驗(yàn)工序和過(guò)程，以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi)，建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而

多肽合成的技術(shù)原理與合成方法你知道嗎2022/10/20: 多肽合成又叫肽鏈合成，是一個(gè)固相合成順序一般從C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。過(guò)去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法。多肽的合成主要分為兩條途徑:化學(xué)合成多肽和生物合成多肽。多肽合成的原理多肽合成就是如何把各種氨基酸單位按照天然物的氨基酸排列順序和連接方式連接起來(lái)。由于氨基酸在中性條件下是以分子內(nèi)的兩性離子形式(H3+NCH(R)COO-)存在，因此，氨基酸之間直接縮合形成酰胺鍵的反應(yīng)在一般條件下是難于進(jìn)行的。氨基酸酯的反應(yīng)活性較高。在100℃下加熱或者室溫下長(zhǎng)時(shí)間放置都能聚合生成肽酯

多肽常用的幾種水解方法2022/10/20: 雖然多肽合成的氨基酸組成分析方法較多，且趨向更靈敏、更精確、更簡(jiǎn)便、更快速，但還沒(méi)有一種方法可以單獨(dú)適用于所有氨基酸殘基的檢測(cè)，并且很多因素如溫度、時(shí)間、水解試劑、水解方法及多肽合成樣品中添加劑等對(duì)水解程度均有影響。常用的水解方法作簡(jiǎn)要介紹如下:1.酸性水解酸性水解是應(yīng)用最為廣泛水解方法，可以使大多數(shù)氨基酸殘基完/全水解，最/通用的水解劑是6mol/LHCI。條件:6mol/LHCI、真空、110℃.水解時(shí)間為20-24h。即可用于液相水解模式也可用于氣相水解模式。但在該條件下，天冬酰胺和谷氨酰

遠(yuǎn)慕分享：透明質(zhì)酸的種類介紹2022/10/20: 透明質(zhì)酸的生產(chǎn)過(guò)程和技術(shù)決定了質(zhì)量?jī)?yōu)劣的差異，所以在使用上一定要是正確來(lái)源生產(chǎn)的產(chǎn)品才能有治療的功效。一般而言，提煉的方法有三種：1、動(dòng)物組織：主要原料是雞冠和牛眼玻璃體等。用丙酮或乙醇將原料脫脂、脫水，用蒸餾水浸泡、過(guò)濾，然后以氯化鈉水溶液和氯仿溶液處理，之后加入胰蛋白酶保溫后得到混合液，最后用離子交換劑進(jìn)行處理、純化得到精制的透明質(zhì)酸。這種方法提取率極低，僅1%左右，分離過(guò)程復(fù)雜，致使透明質(zhì)酸價(jià)格昂貴，達(dá)5000美元/公斤，限制了在化妝品中大的量使用。2、微生物發(fā)酵：以葡萄糖作為碳源發(fā)酵液，

細(xì)胞組織消化常用哪幾種酶？2022/10/19: 直接從生物體獲取的組織，一般需要將其消化成單個(gè)細(xì)胞才能進(jìn)行體外培養(yǎng)。這種直接從離體組織獲得的細(xì)胞，更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)，且生物性狀尚未發(fā)生很大改變，因此在藥物篩選、細(xì)胞移植、類器官培養(yǎng)、腫瘤研究等眾多領(lǐng)域備受歡迎。但組織消化過(guò)程中常遇到多種問(wèn)題，例如消化不*、細(xì)胞死亡率高等。如何克服這些問(wèn)題，其實(shí)消化酶的選擇是關(guān)鍵。遠(yuǎn)慕生物將為您介紹一些常用的消化酶及其適用組織，供您參考。組織消化過(guò)程中常用的酶1.胰蛋白酶胰蛋白酶(Trypsin)是目前應(yīng)用最/廣泛的消化試劑，通過(guò)作用于與賴氨酸或精氨酸相

遠(yuǎn)慕淺談一下影響酶活性的因素2022/10/19: 1、酶濃度酶促反應(yīng)速度與酶分子的濃度成正比。當(dāng)?shù)孜锓肿訚舛茸銐驎r(shí)，酶分子越多，底物轉(zhuǎn)化的速度越快。但事實(shí)上，當(dāng)酶濃度很高時(shí)，并不保持這種關(guān)系，曲線逐漸趨向平緩。根據(jù)分析，這可能是高濃度的底物夾帶有許多的抑制劑所致。2、底物濃度在生化反應(yīng)中，若酶的濃度為定值，底物的起始濃度較低時(shí)，酶促反應(yīng)速度與底物濃度成正比，即隨底物濃度的增加而增加。當(dāng)所有的酶與底物結(jié)合生成中間產(chǎn)物后，即使在增加底物濃度，中間產(chǎn)物濃度也不會(huì)增加，酶促反應(yīng)速度也不增加。3、溫度各種酶在最適溫度范圍內(nèi)，酶活性最/強(qiáng)，酶促反應(yīng)速度最大

單個(gè)核細(xì)胞的分離純化方法2022/10/19: 外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC）主要指淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，是免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)最/常用的細(xì)胞，也是進(jìn)行T細(xì)胞和B細(xì)胞分離純化的重要環(huán)節(jié)。1．原理PBMC的密度與血液中的其他成分不同。紅細(xì)胞和粒細(xì)胞的密度較大，為1.092左右；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的密度為1.076～1.090；血小板為1.030～1.035。因此，利用一種密度介于1.076～1.090之間、近于等滲的溶液（分層液）進(jìn)行密度梯度離心，可使不同類別的血細(xì)胞按其相應(yīng)密度分布，從而被分離。

這幾種分析標(biāo)準(zhǔn)品的定義你知道嗎2022/10/19: 化學(xué)品的概念和定義化學(xué)品是指化學(xué)單質(zhì)、化合物和混合物，包括天然的以及合成的。分析標(biāo)準(zhǔn)品的定義有機(jī)分析標(biāo)準(zhǔn)品有機(jī)分析標(biāo)準(zhǔn)品(Organicanalyticalstandards)是測(cè)定有機(jī)化合物的組分和結(jié)構(gòu)時(shí)用作對(duì)比的化學(xué)試劑。其組分必須精確已知。也可用于微量分析。農(nóng)藥分析標(biāo)準(zhǔn)品農(nóng)藥分析標(biāo)準(zhǔn)品(Pesticideanalyticalstandards)適用于氣相色譜法分析農(nóng)藥或測(cè)定農(nóng)藥殘留量時(shí)作對(duì)比物品。其含量要求精確。有由微量單一農(nóng)藥配制的溶液,也有多種農(nóng)藥配制的混合溶液。原子吸收光譜標(biāo)準(zhǔn)品原子

病毒核酸檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的種類及制備2022/10/18: 病毒核酸檢測(cè)(nucleicacidtest，NAT)現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于血液及其制品的病毒篩查、臨床抗病毒/藥物治療療效監(jiān)測(cè)等。但核酸檢測(cè)容易受到檢測(cè)樣本的基質(zhì)效應(yīng)和檢測(cè)病毒的基因變異等多種因素的影響，使得不同的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用不同的方法學(xué)進(jìn)行核酸檢測(cè)的結(jié)果，在量值、靈敏度和特異性方面常出現(xiàn)較大的差異。為使不同實(shí)驗(yàn)室，不同方法間檢測(cè)的結(jié)果具有可比性，就必須使檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化，而標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化的核心。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的種類由于血清中病毒核酸的量值不能單獨(dú)應(yīng)用物理和(或)化學(xué)的方法進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定，必須通過(guò)一定的核酸擴(kuò)增

遠(yuǎn)慕分享：RT-PCR的定義與檢測(cè)方法2022/10/18: 1.定義：是以RNA為模板，聯(lián)合逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（reversetranscription，RT）與PCR，可用于檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞或少數(shù)細(xì)胞中少于10個(gè)拷貝的RNA模板。RNA擴(kuò)增包括兩個(gè)步驟：在單引物的介導(dǎo)下和逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，合成RNA的互補(bǔ)cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引物退火，并由DNA聚合酶催化引物延伸生成雙鏈靶DNA，最后擴(kuò)增靶DNA。2.檢測(cè)方法⑴一步法：利用同一緩沖液，在同一體系中加入逆轉(zhuǎn)錄酶、引物、Taq酶、4種dNTP直接進(jìn)行mRNA反轉(zhuǎn)錄與PCR擴(kuò)增。Taq酶不僅

原料藥物與制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則2022/10/18: 穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的是考察原料藥物或制劑在溫度、濕度、光線的影響下隨時(shí)間變化的規(guī)律，為藥品的生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸條件提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)通過(guò)試驗(yàn)建立藥品的有效期。穩(wěn)定性試驗(yàn)的基本要求是：（1）穩(wěn)定性試驗(yàn)包括影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)與長(zhǎng)期試驗(yàn)。影響因素試驗(yàn)用1批原料藥物或1批制劑進(jìn)行。加速試驗(yàn)與長(zhǎng)期試驗(yàn)要求用3批供試品進(jìn)行。（2）原料藥物供試品應(yīng)是一定規(guī)模生產(chǎn)的。供試品量相當(dāng)于制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)所要求的批量，原料藥物合成工藝路線、方法、步驟應(yīng)與大生產(chǎn)一致。藥物制劑供試品應(yīng)是放大試驗(yàn)的產(chǎn)品，其處方與工藝應(yīng)與大

PCR后出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增是什么情況？2022/10/18: PCR產(chǎn)物的電泳檢測(cè)時(shí)間一般為48h以內(nèi)，有些最好于當(dāng)日電泳檢測(cè)，大于48h后帶型不規(guī)則甚致消失。假陰性，不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質(zhì)量與特異性，③酶的質(zhì)量及，④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應(yīng)針對(duì)上述環(huán)節(jié)進(jìn)行分析研究。模板：①模板中含有雜蛋白質(zhì)，②模板中含有Taq酶抑制劑，③模板中蛋白質(zhì)沒(méi)有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時(shí)丟失過(guò)多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不*。在酶和引物質(zhì)量好時(shí)，不出現(xiàn)擴(kuò)增帶，極有可能是標(biāo)本的消化處理，模板核酸提取過(guò)程出了毛

克隆載體構(gòu)建入門攻略，小白進(jìn)來(lái)學(xué)習(xí)！2022/10/17: 載體構(gòu)建是分子生物學(xué)研究常用的手段之一。通俗地可以描述為將一段目標(biāo)片段（基因CDS或者用于轉(zhuǎn)錄的sgRNA）插入環(huán)形DNA里面，并在體內(nèi)（一般大腸桿菌）高保真復(fù)制擴(kuò)增后用于后續(xù)科研實(shí)驗(yàn)。根據(jù)后續(xù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡牟煌?，通常分為四種類型：擴(kuò)增目的基因——構(gòu)建克隆載體；表達(dá)目的基因——構(gòu)建表達(dá)載體；編輯基因——構(gòu)建基因編輯載體；轉(zhuǎn)染細(xì)胞——構(gòu)建病毒包裝載體。載體的基本構(gòu)造復(fù)制起始點(diǎn)：質(zhì)粒在大腸桿菌中的復(fù)制起點(diǎn)，使質(zhì)粒得以在大腸桿菌中復(fù)制，這意味著你插入到質(zhì)粒中的目標(biāo)基因可以享受大腸桿菌的高保真復(fù)制系統(tǒng)?？剐?

質(zhì)粒DNA的去磷酸化實(shí)驗(yàn)方法2022/10/17: 實(shí)驗(yàn)方法原理去除5'端的磷酸基可防止質(zhì)粒DNA的自身連接和環(huán)化。在體外連接反應(yīng)中，DNA連接酶可在鄰近的兩個(gè)分子間形成磷酸二酯鍵。但只有當(dāng)一個(gè)分子的5'端帶有磷酸基另一分子的3'端帶有羥基時(shí)，這一反應(yīng)才能完成。實(shí)驗(yàn)材料小牛腸堿性磷酸酶（CIP)或蝦堿性磷酸酶（SAP)蛋白酶K限制性內(nèi)切核酸酶載體DNA試劑、試劑盒EDTAEGTA乙醇酚氯仿SDSTETris-Cl儀器、耗材瓊脂糖凝膠水浴實(shí)驗(yàn)步驟一、材料1.緩沖液和溶液EDTA(0.5mol/L，pH8.0)，EGTA(0.5mol/L，pH8.0

檢測(cè)磷酸化蛋白，怎么選擇磷酸的位點(diǎn)？2022/10/17: 實(shí)驗(yàn)方法原理磷酸化位點(diǎn)的確定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白質(zhì)被純化，如果可能蛋白質(zhì)要均一；磷蛋白被特異性的化學(xué)或酶反應(yīng)切斷、產(chǎn)生肽混合物，其中含有一到兩個(gè)磷酸肽不同之處在干其分離磷酸肽的策略是為了確定氨基酸序列，定位肽段內(nèi)磷酸化的殘基。上面所述的分離方法，2D-PP作圖、HPLC或lMAC方法，也同樣適宜于微量制備磷酸肽用于確定磷酸化位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)材料蛋白樣品實(shí)驗(yàn)步驟過(guò)去確定磷酸化位點(diǎn)測(cè)序最/常用的是逐步化學(xué)降解法，如絲氨酸和蘇氨酸磷酸化分析方法、酪氨酸磷酸化分析方法,最近，此方法已經(jīng)主要被質(zhì)譜方法

單細(xì)胞凝膠電泳標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，科研人必看！2022/10/17: 原理：在細(xì)胞核中，DNA是環(huán)狀附著在核基質(zhì)上，細(xì)胞裂解過(guò)程中，核基質(zhì)被溶解、抽提，DNA的結(jié)構(gòu)則未發(fā)生變化。如果DNA鏈上存在缺口，則使DNA超螺旋變的松弛，DNA環(huán)向外展，同時(shí)由于暴露了陰電荷，在電場(chǎng)力的作用下，松動(dòng)的DNA環(huán)向陽(yáng)極遷移，但是由于這種松動(dòng)的DNA環(huán)一端仍附著于核DNA，其遷移距離受到限制，因此尾長(zhǎng)并不總是真實(shí)反映鏈缺口的多少。實(shí)際應(yīng)當(dāng)依靠尾長(zhǎng)與尾部的熒光強(qiáng)度同時(shí)來(lái)進(jìn)行分析。操作步驟：1.分離制備單細(xì)胞懸液：（1）體外培養(yǎng)的細(xì)胞株：用胰酶消化，吹打成單細(xì)胞懸液（2）體內(nèi)臟器細(xì)胞：

遠(yuǎn)慕教你選擇合適的全血DNA、RNA提取方法2022/10/14: 從全血中提取DNA和RNA應(yīng)該說(shuō)是最基本的工作了，提取的DNA和RNA質(zhì)量的好壞直接影響了下游的實(shí)驗(yàn)和分析，可供選擇的方法非常多，亂花漸欲迷人眼，如何選擇最/適合的方法，成了很多人實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前最難以抉擇的事情。遠(yuǎn)慕生物從兩個(gè)方面，層層剝繭，分析*佳的實(shí)驗(yàn)方法。1、全血的采集保存和DNA的提取a、用含抗凝劑的采血管進(jìn)行采血，抗凝劑一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不會(huì)影響下游的反應(yīng)，如果沒(méi)有采血管，也可以自己添加抗凝劑EDTA，提前準(zhǔn)備0.04M的EDTA溶液，每5ml的血液中加入0.4ml配

遠(yuǎn)慕淺談蛋白柱的日常維護(hù)和常見(jiàn)問(wèn)題2022/10/14: 在蛋白分離時(shí)選擇了合適的蛋白柱，有時(shí)往往不能成功地完成蛋白的分離，同一根蛋白分離柱在不同的使用者手中可能會(huì)有不同的柱壽命及分離效果，正確的使用蛋白柱和正確的日常維護(hù)是保證成功分離蛋白及延長(zhǎng)柱壽命的關(guān)鍵。不論使用什么類型的蛋白柱，首先必須對(duì)其填料的性能有基本了解。如該柱適用什么樣的溶劑，什么類型的樣品，流速及耐壓范圍等，遠(yuǎn)慕提供的各種類型的蛋白柱，在柱箱內(nèi)均有詳細(xì)的說(shuō)明書，使用柱子前，務(wù)必要仔細(xì)閱讀，以保證正確使用這些柱子。下面遠(yuǎn)慕就蛋白分離中常出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行討論。①樣品不保留：在用離子交換柱分離

核酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（質(zhì)控品）的管控和使用2022/10/14: 在《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》，《三級(jí)綜合醫(yī)院評(píng)審標(biāo)準(zhǔn)（2011年版）》等文件中，都指出在臨床檢測(cè)報(bào)告的項(xiàng)目均應(yīng)開(kāi)展內(nèi)部室內(nèi)質(zhì)控，并參加外部室間質(zhì)評(píng)。在這兩項(xiàng)工作當(dāng)中，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的作用尤為重要，對(duì)它的管控不可/或缺。(一)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（質(zhì)控品）的來(lái)源與基本條件分子實(shí)驗(yàn)室中，一般將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分成兩類：1、用于儀器校準(zhǔn)、驗(yàn)證、測(cè)試和繪制工作標(biāo)準(zhǔn)曲線等目的的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；（一般是由廠商提供的質(zhì)控品）2、用于外部室間質(zhì)評(píng)、內(nèi)部室內(nèi)質(zhì)控、方法驗(yàn)證等目的的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，而在《2021臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（士）》的中，這類標(biāo)

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