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細(xì)胞培養(yǎng)的各種器皿的物理消毒滅菌法2017/02/23: 轉(zhuǎn)化細(xì)胞通過高潮、射線、微波以及器械進(jìn)行滅菌或除菌的方法均為物理滅菌方法。(1)紫外線消毒用于消毒空氣、操作臺面和一些不能用干熱、濕熱滅菌的培養(yǎng)器皿，如塑料培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板等。這是常使用的消毒方法之一。(2)干熱滅菌主要用于玻璃器皿的滅菌。將用于細(xì)胞培養(yǎng)的器皿放人干燥箱內(nèi)，加熱至160℃，保溫90-120min。用于RNA提取實驗的用品則需180℃，保溫5-8h。(3)濕熱滅菌此方法也稱為高壓蒸汽滅菌，是zui有效的一種滅菌方法。主要應(yīng)用范圍是布類、橡膠制品(如膠塞)、金屬器械、玻璃器皿、某些塑料

神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)需要注意的操作方法2017/02/21: 神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)需要注意的操作方法神經(jīng)細(xì)胞（神經(jīng)元）不易培養(yǎng)，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經(jīng)生長因子和膠質(zhì)干細(xì)胞因子時，可出現(xiàn)一定程度的分化，長出突起等現(xiàn)象，但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。人、鼠等腦組織即可用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，不僅能獲得生長的膠質(zhì)細(xì)胞，也可形成能傳代的二倍體細(xì)胞系。一般說來，膠質(zhì)細(xì)胞在培養(yǎng)中生長不穩(wěn)定，不易自發(fā)轉(zhuǎn)化，但對外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV4等誘發(fā)轉(zhuǎn)化。1、從手術(shù)室無菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后，仔細(xì)剝除腦膜、

體外培養(yǎng)的細(xì)胞對培養(yǎng)基的基本要求2017/02/16: 體外培養(yǎng)的細(xì)胞對培養(yǎng)基的基本要求營養(yǎng)成分1.氨基酸：所有ATCC細(xì)胞都需要12種必須氨基酸：纈、亮、異亮、蘇、賴、色、苯丙、蛋、組、酪、精、胱氨酸。2.單糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。細(xì)胞對葡萄糖的吸收能力zui高，半乳糖zui低。體外培養(yǎng)動物細(xì)胞時，幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。3.維生素：生物素、葉酸、煙酰胺、泛酸、吡哆醇、核黃素、硫胺素、維生素b12都是培養(yǎng)基常有的成分。4.無機(jī)離子與微量元素：細(xì)胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基

貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)實驗操作方法2017/02/14: 貼壁細(xì)胞的傳代培養(yǎng)實驗操作方法實驗原理細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本飽和，為使干細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)是一種將細(xì)胞種保存下去的方法，同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。實驗材料CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、培養(yǎng)瓶、試管、移液管、巴斯德吸管、廢液缸、75％秀精棉球、酒精燈、貼壁細(xì)胞株、*培養(yǎng)基(RPMLI640或DMEM)、0.25％胰蛋白酶、PBS液。操作步驟(1)傳代前

細(xì)胞毒理試驗原理2017/02/09: 細(xì)胞毒理試驗原理新的藥物、化妝品、食品添加劑等在投放市場之前，都必須進(jìn)行大量的腫瘤細(xì)胞毒性試驗。細(xì)胞毒性主要包括殺死細(xì)胞、殺傷細(xì)胞、細(xì)胞新陳代謝發(fā)生改變等機(jī)理，表現(xiàn)為細(xì)胞凋亡、細(xì)胞壞死、細(xì)胞生長繁殖抑制等現(xiàn)象。細(xì)胞毒性試驗中，除了觀察測定上述現(xiàn)象外，還可以采集培養(yǎng)細(xì)胞在藥物處理前后的代謝變化指標(biāo)，如對處理細(xì)胞和對照細(xì)胞的DNA、RNA、蛋白質(zhì)、多肽等特定種類和含量進(jìn)行測定。用于抗腫瘤藥物與腫瘤細(xì)胞株系的體外試驗時，可以屬于細(xì)胞藥理試驗。如果針對某些抗腫瘤藥物是否對正常體細(xì)胞有毒性的體外試驗，則屬

ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基操作技術(shù)分析2017/02/07: ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基操作技術(shù)分析1.準(zhǔn)備一個培養(yǎng)瓶，加入適宜細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，液體體積按照說明書的推薦配置，并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH（CO2）。2.在37℃水浴中或ATCC細(xì)胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快，約2分鐘或直到冰晶融化即可。3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進(jìn)一步的操作均需在無菌操作臺中嚴(yán)格無菌條件下進(jìn)行。4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個含有9ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中。通過溫和離心（125×g10min）除去冷凍保護(hù)劑（DMSO）。棄去

細(xì)胞分化的特點主要可以概括成三點2017/01/24: 細(xì)胞分化的特點主要可以概括成三點①持久性:干細(xì)胞分化貫穿于生物體整個生命進(jìn)程中,在胚胎期達(dá)到zui大程度②普遍性:生物界普遍存在,是生物個體發(fā)育的基礎(chǔ)③穩(wěn)定性和不可逆性:一般來說,分化了的細(xì)胞將一直保持分化后的狀態(tài),直到死亡正常情況下，細(xì)胞分化是穩(wěn)定、不可逆的。一旦細(xì)胞受到某種刺激發(fā)生變化，開始向某一方向分化后，即使v引起變化的刺激不再存在，分化仍能進(jìn)行，并可通過細(xì)胞分裂不斷繼續(xù)下去。但大量科學(xué)實驗證明，在植物細(xì)胞中高度分化的植物細(xì)胞仍具有發(fā)育成完整植株的能力，即植物細(xì)胞的性。在動物干細(xì)胞中，部

流式細(xì)胞實驗中熒光染料如何選擇2017/01/21: 流式干細(xì)胞實驗中熒光染料如何選擇（1）確定熒光染料本身所適合的流式干細(xì)胞儀，需要了解染料的激發(fā)波長和發(fā)射波長、儀器所配制的檢測濾光片和激發(fā)光源。（2）了解熒光素的相對熒光強(qiáng)度：相對熒光強(qiáng)度反映的是熒光素-單抗結(jié)合物的亮度，其判斷標(biāo)準(zhǔn)是染色指數(shù)。影響相對熒光強(qiáng)度的因素包括：不同儀器的激光及濾片組合不同，熒光素的相對熒光強(qiáng)度不同；抗體上熒光素分子的多少會影響相對的熒光強(qiáng)度。（3）選擇原則：考慮抗原的密度【高密度表達(dá)的抗原可考慮選擇幾乎所有的熒光素；低密度表達(dá)的抗原需要可提供較高S/N比值的熒光素，如

如何識別細(xì)胞是屬于哪種生物污染2017/01/19: 如何識別細(xì)胞是屬于哪種生物污染ATCC細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種，分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染。他們在細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特點如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。2、支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感

細(xì)胞有機(jī)物中主要由幾大類分子所組成2017/01/17: 細(xì)胞有機(jī)物中主要由幾大類分子所組成（一）糖類干細(xì)胞中的糖類既有單糖，也有多糖。細(xì)胞中的單糖是作為能源以及與糖有關(guān)的化合物的原料存在。重要的單糖為五碳糖（戊糖）和六碳糖（己糖），其中zui主要的五碳糖為核糖，zui重要的六碳糖為葡萄糖。葡萄糖不僅是能量代謝的關(guān)鍵單糖，而且是構(gòu)成多糖的主要單體。多糖在細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分中占有主要的地位。細(xì)胞中的多糖基本上可分為兩類：一類是營養(yǎng)儲備多糖；另一類是結(jié)構(gòu)多糖。作為食物儲備的多糖主要有兩種，在植物細(xì)胞中為淀粉（starch），在動物細(xì)胞中為糖元（glycogen）

檢測干細(xì)胞四唑鹽比色法試驗原理2017/01/12: 檢測干細(xì)胞四唑鹽比色法試驗原理此法的原理是：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物，并沉積在細(xì)胞中，而干細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的藍(lán)紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測，以在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反應(yīng)活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶物形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比?！?.25%胰蛋白酶消化細(xì)胞使其成為單細(xì)胞，用含0.1%胎牛血清的RPMI培養(yǎng)基配成1x10^9個/L的但細(xì)胞懸液，將細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100ul?！駥⑴囵B(yǎng)

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的凍存和注意事項2017/01/10: 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的凍存和注意事項1.腫瘤細(xì)胞應(yīng)遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37。5度，取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。2.在無菌臺內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi)，約5ml左右，然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞，置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃，使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3.將貼壁細(xì)胞消化后離心收集，懸浮細(xì)胞直接離心收集，以*培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍。次日保

腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和繁殖2017/01/05: 腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和繁殖腫瘤細(xì)胞通常很小，需用顯微鏡才能見到，但也有肉眼可見的大型卵細(xì)胞。細(xì)胞的形狀因其生長、分化和功能的不同而有很大變化，有卵圓形、柱形、鱗形、梭形、樹枝形等。真核細(xì)胞的構(gòu)造主要可分為細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜三部分。細(xì)胞膜之內(nèi)的生活物質(zhì)包括細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)統(tǒng)稱為原生質(zhì)?；罴?xì)胞的化學(xué)組成主要是水，約占90%，其余為蛋白質(zhì)、核酸、脂類、糖類以及少量無機(jī)物質(zhì)。在細(xì)胞質(zhì)中有一些稱為細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)，如線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。植物細(xì)胞和動物細(xì)胞相比稍有不同，植物細(xì)胞外面有細(xì)胞壁，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)

ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基不同之處2017/01/03: 培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基絕大多數(shù)是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。zui廣泛應(yīng)用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是MEM，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。目前科研市場經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中DMEM、RPMI1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用zui廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于ATCC細(xì)胞的培養(yǎng)。1.MEM是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的，其中增加了組分的范圍及濃度。2.改良的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)基也就是我們所說的DMEM培養(yǎng)

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