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IDT寡核苷酸合成領(lǐng)域的翹楚----CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)2023/10/30

美國IntegratedDNATechnologies公司（以下簡稱IDT）創(chuàng)辦于1987年，是寡核苷酸合成領(lǐng)域的翹楚，在過去的30多年里IDT致力于為學(xué)術(shù)研究、農(nóng)業(yè)發(fā)展、醫(yī)療診斷、藥物研發(fā)等領(lǐng)域開發(fā)和制造核酸產(chǎn)品，IDT可以為客戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品、專業(yè)的技術(shù)支持和個性化的定制服務(wù)。在分子生物學(xué)領(lǐng)域，IDT為二代測序、基因編輯、qPCR和RNA干擾等領(lǐng)域開發(fā)了一系列專有技術(shù)。IDT生產(chǎn)的GMP級別產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于多種癌癥以及遺傳和感染性疾病的診斷試劑研發(fā)，并通過不斷優(yōu)化自動化合成平臺的處理技術(shù)來

選擇脂質(zhì)時應(yīng)考慮哪些問題？2023/10/25

A.相變溫度相變溫度定義為誘導(dǎo)脂質(zhì)物理狀態(tài)從有序凝膠相轉(zhuǎn)變?yōu)闊o序液晶相（其中烴鏈隨機(jī)取向）所需的溫度和液體。1有幾個因素直接影響相變溫度，包括烴長度、不飽和度、電荷和頭基種類。在開發(fā)新產(chǎn)品、程序或方法時，控制脂質(zhì)的轉(zhuǎn)變溫度可能很有用。選擇脂質(zhì)囊泡始終處于凝膠相的高轉(zhuǎn)變脂質(zhì)將提供無泄漏的包裝系統(tǒng)?；蛘?，當(dāng)脂質(zhì)經(jīng)過其相變溫度并且囊泡變得滲漏時，具有在系統(tǒng)的起始溫度和結(jié)束溫度之間的轉(zhuǎn)變溫度的脂質(zhì)將提供釋放包裝材料的手段。此外，人們還應(yīng)該考慮脂質(zhì)的轉(zhuǎn)變溫度如何影響加工步驟。當(dāng)需要過濾時使用高過渡脂質(zhì)可能

陽離子脂質(zhì)體的制備及細(xì)胞轉(zhuǎn)染2023/10/25

設(shè)備及材料1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺陽離子脂質(zhì)氯仿蒸餾水緩沖帶聚四氟乙烯內(nèi)襯的玻璃瓶玻璃注射器氮?dú)饣驓鍤庹婵障到y(tǒng)0.22μm過濾器（可選）程序?qū)⒚糠N脂質(zhì)成分（例如，DOTAP/DOPE）溶解在氯仿中至方便的工作濃度（1-10mg/mL）。使用玻璃注射器將所需量的每種成分等分到玻璃瓶中。有關(guān)處理脂質(zhì)有機(jī)溶液的更多信息。全部混合玻璃瓶中的成分。使用氮?dú)饣驓鍤饬餍⌒牡卣舭l(fā)氯仿（在充分通風(fēng)的情況下）。將脂質(zhì)殘留物放在真空泵上10-15分鐘，以除去任何殘留的有機(jī)溶劑。從真空泵中取出小瓶，并

脂質(zhì)的儲存和處理2023/10/24

有機(jī)解決方案以有機(jī)溶液形式提供的磷脂應(yīng)儲存在-20°C±4°C下充有氬氣或氮?dú)獾牟Ａ萜髦?。不建議將有機(jī)溶液儲存在-30°C以下，除非該溶液包裝在密封的玻璃安瓿中。小瓶的封口應(yīng)襯有聚四氟乙烯。有機(jī)溶液切勿儲存在聚合物或塑料容器（聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯等）中，因?yàn)檫@會將雜質(zhì)從容器中濾出。水中的脂質(zhì)可以儲存在塑料中。轉(zhuǎn)移有機(jī)溶液始終使用玻璃、不銹鋼或聚四氟乙烯來轉(zhuǎn)移以有機(jī)溶液形式儲存的脂質(zhì)。請勿使用塑料移液器吸頭轉(zhuǎn)移脂質(zhì)的有機(jī)溶液*。請勿將Eppendorf管與有機(jī)溶劑一起使用請勿將封口膜與有機(jī)溶

多層囊泡 (MLV) 的制備2023/10/24

以下是用于制備脂質(zhì)體的凍干（冷凍干燥）脂質(zhì)混合物的方案的簡要概述：將脂質(zhì)溶解在氯仿中。以適當(dāng)?shù)谋壤旌现|(zhì)。使用干燥氮?dú)饬餍⌒恼舭l(fā)有機(jī)溶劑。將脂質(zhì)混合物重新懸浮在環(huán)己烷中。如果混合物未全部溶解在環(huán)己烷中，則添加少量乙醇（環(huán)己烷體積的1-2%）。不要使用過多的乙醇，因?yàn)檫^量的乙醇不會使溶液凍結(jié)。使用干冰冷凍環(huán)己烷溶液?？焖賹⒗鋬龌旌衔镏糜诟哒婵障到y(tǒng)（凍干系統(tǒng)）上。一般來說，“室內(nèi)真空”系統(tǒng)對于這個過程來說不夠強(qiáng)大。樣品應(yīng)保持冷凍狀態(tài)直至全部干燥；如果樣品開始解凍，則可能是真空不夠強(qiáng)，或者存在太多乙

無菌PVDF過濾膜的使用方法2023/10/23

1、將濾膜平放于清潔容器內(nèi),用70°C左右的蒸餾水浸泡,使其全部浸潤,4個小時以上,使用前再用蒸餾水清洗一次。2、將清洗的濾膜(濕)裝入配套使用的濾器中,防止周圍漏液,即可進(jìn)行過濾。由于濾膜的孔徑比較細(xì),采用常壓過濾的流速較慢,一般可真空泵負(fù)壓抽濾或者氣泵加壓過濾.3、在實(shí)際使用過程中,對于要求不是特別高的操作,可以不經(jīng)過上述步驟直接過濾,但是會對過濾速度或?yàn)V膜的柔韌性有輕微的影響,經(jīng)過浸泡處理過的濾膜柔韌性會更好一些不容易破，流速也會快一點(diǎn)。4、該精度屬于精濾范圍，一般不適合雜質(zhì)較多的液體過濾

如何提高噬菌體展示文庫的庫容?2023/10/19

噬菌體展示技術(shù)將基因型和表型統(tǒng)一于同一噬菌體顆粒，相較于傳統(tǒng)的抗體制備技術(shù)，提供了不經(jīng)免疫制備抗體的可能，可以解決因?yàn)槿蹩乖?、自身抗原、具有毒性的抗原等抗體制備的困難。因此也是目前抗體庫制備中應(yīng)用十分廣泛的一項(xiàng)技術(shù)。一個好的噬菌體抗體庫需要具備較大的容量和良好的多樣性，如果庫容量較小，則難以獲得高親和力的抗體。那么想要獲得較大庫容和多樣性豐富的噬菌體文庫，有哪些可以優(yōu)化的因素呢？一、選擇高轉(zhuǎn)化效率的大腸桿菌（感受態(tài)細(xì)胞）噬菌體文庫的庫容會受大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率的限制，選擇高效率的電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞，能有

模式識別受體的合作共贏，RIG-I與STING的聯(lián)盟2023/10/18

天然免疫系統(tǒng)對于限制病毒感染作用重大。其依靠若干組模式識別受體（PRRs）來識別病毒核酸[1]。這些PRRs包括胞漿DNA感受器（CDS），環(huán)鳥苷酸腺苷酸合成酶（cGAS），和細(xì)胞質(zhì)RNA感受器視黃酸誘導(dǎo)基因I（RIG-I）。這些受體一旦被活化，將誘導(dǎo)不同的信號通路導(dǎo)致一系列抗病毒分子的產(chǎn)生。有趣的是，有證據(jù)表明，這些信號通路之間存在緊密聯(lián)系以增強(qiáng)抗病毒反應(yīng)。感受器cGAS和RIG-I通過單獨(dú)的接頭蛋白來識別不同的核酸和信號。cGAS感受細(xì)胞質(zhì)中異常DNA的存在和濃度，而后通過環(huán)二核苷酸2’3’

免疫組化常見問題2023/10/17

免疫組化常見問題的處理1對照標(biāo)本無染色2弱陽性3非特異性染色免疫組化常見問題的處理對照/標(biāo)本無染色①確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。②確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時間。③對照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配，這一點(diǎn)是非常重要的。比如，如果一抗是兔來源的抗體，二抗一定要用抗兔的二抗來匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。④檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。⑤檢查抗

ELISA操作常見問題2023/10/17

ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。ELISA操作常見問題ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因

WB實(shí)驗(yàn)方案2023/10/17

蛋白免疫印跡（Westernblotting）一般由凝膠電泳、樣品的印跡和免疫學(xué)檢測三個部分組成。第一步是通過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測樣品中的蛋白質(zhì)混合物按分子量大小在凝膠中分成條帶蛋白免疫印跡（Westernblotting）一般由凝膠電泳、樣品的印跡和免疫學(xué)檢測三個部分組成。第一步是通過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，使待測樣品中的蛋白質(zhì)混合物按分子量大小在凝膠中分成條帶。第二步把凝膠中已分成條帶的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到一種固相支持物上，使用較多的是硝酸纖維素膜(NC膜)和PVDF膜，蛋白轉(zhuǎn)移的方法

細(xì)胞因子溶解注意事項(xiàng)2023/10/17

重組細(xì)胞因子溶解注意事項(xiàng)1．離心（Centrifuge）：高速離心(10,000rpm)20-30秒，或低速離心(2,000rpm)5分鐘。2．溶解（Reconstitution）：用去離子水或其它緩沖液（根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇）溶解至說明書要求的濃度(一般為0.1-1.0mg/ml)。溶解時不可振蕩，避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活，可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間，待細(xì)胞因子全部溶解后使用。溶劑的選擇：1）要求用去離子水溶解的產(chǎn)品，務(wù)必不可用鹽溶液，避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出；2)

ELISA檢測樣本的處理2023/10/12

在收集標(biāo)本前需有一個完整的計劃，需要清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。ELISA檢測提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測，對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的標(biāo)本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請取材后，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融?！笠后w類標(biāo)本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等?！笱澹菏覝匮鹤匀荒?0-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成

脂肪酸氧化在巨噬細(xì)胞極化中作用的探究2023/10/09

細(xì)胞內(nèi)代謝在細(xì)胞發(fā)育分化和功能方面所起的調(diào)節(jié)作用已經(jīng)引起了研究者非常大的興趣。在巨噬細(xì)胞的研究中，經(jīng)典的M1型細(xì)胞的活化被發(fā)現(xiàn)依賴于糖酵解功能，而M2型巨噬細(xì)胞的極化近來被注意到似乎需要脂肪酸氧化（FAO）的作用。脂肪酸氧化（FattyAcidOxidation,FAO）是指油脂水解產(chǎn)生的甘油和脂肪酸在供氧充足的條件下，可氧化分解生成二氧化碳和水，并釋放出大量能量供機(jī)體利用，過程可概括為活化、轉(zhuǎn)移、β氧化及最后經(jīng)三羧酸循環(huán)被全部氧化生成CO2和H2O并釋放能量幾階段。脂肪酸氧化（FAO）需要肉堿

抗體小妙招·如何正確保存2023/10/08

抗體作為嬌氣的蛋白質(zhì)，它的保存有很多需要注意的地方。如果保存得當(dāng)，大多數(shù)抗體的活性均可保持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。1.一般保存方法收到抗體后需要進(jìn)行如下步驟操作：離心并分裝：收到抗體后首先進(jìn)行離心操作使附著在管壁和蓋子上的抗體合并到管底，避免造成損失；離心后進(jìn)行分裝保存，建議分裝量以一次抗體使用量為準(zhǔn)（不低于10ul），抗體反復(fù)凍融會是蛋白變性，降低與目標(biāo)蛋白的結(jié)合率，同時也可以盡可能的降低污染的產(chǎn)生；抗體保存：抗體通常保存溫度為-20℃，但由于抗體存在形式不同，儲存條件會有區(qū)別，具體儲存方式要以產(chǎn)品說明

鈣鈦礦科學(xué)家榮獲諾貝爾化學(xué)學(xué)獎2023/10/07

10月4日，瑞典揭曉2023年諾貝爾化學(xué)學(xué)獎，美國科學(xué)家MoungiG.Bawendi等三人因其在量子點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)與合成方面的貢獻(xiàn)獲得殊榮。而三人之一的MoungiG.Bawendi，來自美國麻省理工學(xué)院，是一位真正的鈣鈦礦太陽能電池專家：-2019年2月，其研發(fā)的鈣鈦礦太陽能電池效率經(jīng)NREL認(rèn)證達(dá)到24.2%，成為鈣鈦礦太陽能電池第10個效率記錄點(diǎn)；-2019年9月，其研發(fā)的鈣鈦礦太陽能電池效率經(jīng)NREL認(rèn)證達(dá)到25.2%，成為鈣鈦礦太陽能電池第11個效率記錄點(diǎn)；-2021年2月，MoungiG

BSA的分類2023/09/28

牛血清白蛋白Albuminfrombovineserum，BSA，又稱為組分V或CohnV，名稱起源于BSA的分餾法——Cohn冷乙醇法，Cohn冷乙醇法是由哈佛大學(xué)EdwinCohn教授于1946年發(fā)明的。當(dāng)時基于戰(zhàn)爭創(chuàng)傷治療對注射級別蛋白的大規(guī)模需求，Cohn教授在較低的溫度下改變血漿的乙醇濃度和pH值，使其所含蛋白在不同乙醇濃度下析出，在第五個析出的組分中主要成分為BSA，所以BSA又稱組分V或CohnV。Cohn法仍然是目前非常普遍的BSA分餾法。美國大的生物原材料供應(yīng)商Equitech

原代細(xì)胞的培養(yǎng)及建系之原代細(xì)胞的培養(yǎng)篇2023/09/28

前面寫了原代細(xì)胞的取代、分離，今天講述一下原代細(xì)胞的培養(yǎng)：第三節(jié)原代和傳代細(xì)胞的培養(yǎng)和維持一、原代細(xì)胞的培養(yǎng)與維持(一)原代細(xì)胞培養(yǎng)1、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))凡經(jīng)消化液處理實(shí)體組織來源的細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性，細(xì)胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L，培養(yǎng)基可用Eagle(MEM)或DNEM培養(yǎng)，小牛血清濃度為10%～80%，有條件的應(yīng)在37℃5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂浮。若原代貼壁細(xì)胞不是用于

原代細(xì)胞的培養(yǎng)及建系之原代細(xì)胞分離篇2023/09/26

上篇寫到原代細(xì)胞的取材，這篇文章說一下原代細(xì)胞的分離制作：第二節(jié)原代細(xì)胞的分離和制作人或動物體內(nèi)（或胚胎組織）由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，即使采用1mm3的組織塊，也只有少量處于周邊的細(xì)胞可能生存和生長，若需獲取大量細(xì)胞，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來，常采用的方法如下：一、懸浮細(xì)胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘，若懸液量大，可適當(dāng)延長離心時間，但速度不能太高，延時也不能太長

原代細(xì)胞的培養(yǎng)及建系之原代細(xì)胞取材篇2023/09/26

細(xì)胞的來源多樣，培養(yǎng)方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。原代細(xì)胞經(jīng)分散接種之手段稱為傳代。凡能經(jīng)傳代方式進(jìn)行再次培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。若能穩(wěn)定生長傳至10~20代以上的細(xì)胞可確立為細(xì)胞系。若有條件能開展單細(xì)胞克隆、純化，經(jīng)大量擴(kuò)增后所形成的生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細(xì)胞群，稱之為細(xì)胞株或克隆細(xì)胞。此過程稱為細(xì)胞的純化或細(xì)胞克隆。這些基本技術(shù)是從事細(xì)胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ)，只有熟悉和掌握了基本技術(shù),才可能更快捷地學(xué)習(xí)和掌握其他方法,本章重