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如何培養(yǎng)大鼠平滑肌細胞？2022/10/24

一、器械顯微器械：眼科剪一把，直彎眼科鑷各一把，細結(jié)鑷一把，手術刀一把，針頭諾干殺老鼠器械：手術剪一把，大鑷子一把，彎眼科鑷一把，組織鉗一把，50ml燒杯一個（錫紙包好）另外：10ml離心管兩個，培養(yǎng)皿兩個，10ml的瓶子三個，小濾器兩個，硅膠板一塊，培養(yǎng)瓶蓋子諾干二、試劑D-HANKS液250ml，雙抗2ml（青霉素16萬U/ml鏈霉素15萬U/ml），一型膠原酶，木瓜酶，BSA。后三種加上D-HANKS配成1ml的消化液，終濃度皆為1mg/ml。無血清DMEM和含20％FBS的DMEM三、步

大鼠平滑肌細胞的貼壁培養(yǎng)方法2022/10/24

貼壁法：器械顯微器械：眼科剪一把，直彎眼科鑷各一把，細結(jié)鑷一把，手術刀一把，針頭諾干殺老鼠器械：手術剪一把，大鑷子一把，彎眼科鑷一把，組織鉗一把，50ml燒杯一個（錫紙包好）另外：10ml離心管兩個，培養(yǎng)皿兩個，10ml的瓶子三個，小濾器兩個，硅膠板一塊，培養(yǎng)瓶蓋子諾干貳。試劑D-HANKS液250ml，雙抗2ml（青霉素16萬U/ml鏈霉素15萬U/ml）。FBS和含20％FBS的DMEM叁。步驟1．取大鼠，稱重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉2．綁好大鼠，先剪開腹腔，剪斷腹部大動脈放血

正常大鼠原代主動脈平滑肌細胞培養(yǎng)方法2022/10/24

PriCells–正常大鼠原代主動脈平滑肌細胞培養(yǎng)一、實驗試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10%DMSO3、洗滌液：1×PBS（pH7.4）+1%P/S4、染色液：0.4%TrypanBlue5、消化液：PriCellsIsolationofPrimaryCellKit6、檢測試劑：肌動蛋白、a-SMA或Desmin抗體，熒光標記二抗，4%多聚甲醛二、實驗器械1、培

懸浮細胞培養(yǎng)的方法2022/10/20

材料與儀器凍存HeLaS3細胞70%乙醇*MEM-10胰酶／EDTA旋轉(zhuǎn)瓶*培養(yǎng)基-525cm2組織培養(yǎng)瓶C02培養(yǎng)箱SorvallH-6000A轉(zhuǎn)子100ml或200ml通氣旋轉(zhuǎn)瓶和帶濾膜的瓶蓋步驟1.將含有凍存HeLaS3細胞的安瓿放入37℃水浴中解凍。2.用70%乙醇對安瓿的頂端進行消毒，打開安瓿，用吸管將細胞轉(zhuǎn)移到含有5ml*MEM-10培養(yǎng)基的25cm2組織培養(yǎng)瓶中，輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使細胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中，放入5%CO2加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過夜。3.將培養(yǎng)基吸出，用0.5ml37℃

如何提高細胞的轉(zhuǎn)染效率？2022/10/20

總有一種轉(zhuǎn)染方法適合你一、怎樣提高細胞的轉(zhuǎn)染效率?有的同學做了轉(zhuǎn)染，連接目的基因的載體帶熒光，轉(zhuǎn)染后48小時在熒光顯微鏡下觀察，卻發(fā)現(xiàn)只有約百分之15左右的熒光，問該怎么提高轉(zhuǎn)染效率?有沒有必要接著往下做篩選?還是重新轉(zhuǎn)染一次?1、如果要是做穩(wěn)定篩選的話，15%的轉(zhuǎn)染率應該夠了。提高轉(zhuǎn)染效率的話，可以適當降低轉(zhuǎn)染時細胞的密度(我試過60～70%的密度比90%更好一些)，另外還有可能就是細胞的生長狀態(tài)，還有在接種后24h內(nèi)進行轉(zhuǎn)染。2、轉(zhuǎn)染應該在對數(shù)生長期內(nèi)進行才能保證轉(zhuǎn)染效率，因為該時期細胞生長

如何提高腫瘤細胞培養(yǎng)存活率和生長率？2022/10/20

原理根據(jù)人們的經(jīng)驗，腫瘤細胞在體外不易培養(yǎng)，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。當腫瘤組織或細胞初代接種培養(yǎng)后，常出現(xiàn)以下幾種情況：1.*無細胞游出或移動；2.有細胞移動和游出，但無細胞增殖，細胞長時間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代；3.有細胞增殖，傳若干代后停止生長或衰退死亡；4.傳數(shù)代后細胞增殖緩慢，經(jīng)過一段停滯期后，才又呈旺盛生長狀態(tài)，形成穩(wěn)定生長的腫瘤傳代細胞系。以上現(xiàn)象說明腫瘤細胞對體外生存條件有較高的要求，并需經(jīng)過對新環(huán)境的適應才能生長，因此欲獲得好的培養(yǎng)效果，不能局限于一般培養(yǎng)法，必須采用一

腫瘤細胞培養(yǎng)實驗2022/10/20

原理腫瘤組織及細胞在模擬體內(nèi)生長環(huán)境的條件下、與一般組織細胞一樣、也能夠生長發(fā)育乃至繁殖、為研究癌變機理、抗癌藥檢測、腫瘤分子生物學提供大量的實驗材料。材料與儀器腫瘤組織培養(yǎng)液Hanks胰蛋白酶EDTA膠原酶培養(yǎng)瓶培養(yǎng)皿吸管和膠帽眼科剪眼科鑷二氧化碳培養(yǎng)箱超凈工作臺步驟一、取材人腫瘤細胞來自外科手術或活檢瘤組織。取材部位非常重要，體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區(qū)，取材時盡量避免用退變組織，要挑選活力較好的部位。癌性轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)或胸腹水是好的培養(yǎng)材料。取材后宜盡快進行培養(yǎng)，如因故不能立即培養(yǎng)，可貯

細胞毒性分析2022/10/20

細胞毒性是指由細胞或化學物質(zhì)引起的單純細胞殺傷事件，不依賴于凋亡或壞死的細胞死亡機理。常用細胞毒性檢測方法有CCK-8法、MTT法、LDH法。1、與MTT法相比：1）CCK-8使用更為方便，無需洗滌細胞；2）CCK-8法能快速檢測；CCK-8法的檢測線性范圍廣，靈敏度更高；4）CCK-8法的重復性更好，MTT實驗生成的formazan不是水溶性的，需要使用DMSO等有機溶劑溶解；CCK-8法產(chǎn)生的formazan是水溶性的，既省去了溶解步驟，又可以減少該操作步驟帶來的誤差；5）CCK-8法對細胞

細胞增殖分析（CCK-8 法）2022/10/18

CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。CCK-8&MTT方法比較方法優(yōu)點缺點CCK-8法靈敏度高、不使用有機溶劑、檢測迅速、重復性好價格較MTT貴、CCK8試劑的顏色為淡紅色、與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，容易漏加或多加MTT法價格便宜操作步驟較多，需要使用有機試劑，靈敏度不如CCK-8，多數(shù)需要配制，檢測時間長，細胞毒性較高原理CCK-8是MTT的升級產(chǎn)品，其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(

細胞周期檢測（流式細胞術）2022/10/18

原理流式細胞周期檢測是一種常見的檢測細胞增殖情況的方法之一，細胞在不同周期時，其內(nèi)的DNA含量不同。碘化丙啶（PI）作為一種核酸嵌入型染料，能夠進入固定后的細胞中，與細胞內(nèi)的核酸結(jié)合，其熒光強度與DNA含量成正比。通過流式細胞儀檢測不同細胞中的熒光強度，從而判定不同組別中細胞周期發(fā)生的變化。用途檢測不同組別或處理對某種細胞周期的改變。材料與儀器【器材】流式細胞儀、移液器、槍頭、離心管、離心機、流式細胞儀、水浴鍋、流式管、濾頭；【試劑】0.25％胰蛋白酶溶液、PBS、RNA酶、PI染液、70％乙醇

原代細胞培養(yǎng)2022/10/18

簡介細胞培養(yǎng)是指將細胞從動物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。包括原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。原代與細胞系培養(yǎng)比較類型優(yōu)點缺點原代細胞培養(yǎng)非變異的、非永生化的細胞；具有更好的生理相關性，各方面更接近體內(nèi)狀態(tài)；具有一定的生命周期培養(yǎng)周期長、不同批次細胞差異大、培養(yǎng)原代細胞花費更高細胞系培養(yǎng)相對便宜，可以無限傳代；培養(yǎng)周期短，短時間可以獲得大量細胞發(fā)生異倍化，細胞生理活性等相關性能和正常細胞差異較

貼壁細胞傳代2022/10/18

簡介在動物細胞培養(yǎng)過程中，必須有可以貼附的支持物表面，其依靠自身分泌或培養(yǎng)基中的貼附因子才能在該表面生長增殖的離體動物的培養(yǎng)細胞。由于血清具有終止胰蛋白酶消化，提供細胞生長所需的貼壁因子、免疫球蛋白、胰島素等其它營養(yǎng)成分及細胞因子，因此成為體外細胞培養(yǎng)液中的常用添加成分，其對細胞的培養(yǎng)意義重大。原理細胞在人工基質(zhì)上單層生長（貼壁培養(yǎng)）貼壁細胞分類：皮細胞型，成纖維細胞型，游走細胞型和多型細胞型。在顯微鏡下觀察時，貼壁細胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不規(guī)則的三角形或扇形或其它形態(tài)，而且晃動培養(yǎng)液時，細

細胞凍存保種2022/10/18

細胞生長至對數(shù)中晚期，以培養(yǎng)基制備高濃度細胞懸液，加入細胞保護劑，等份轉(zhuǎn)移至凍存管中，緩慢冷凍。市場上有多家成熟的無血清凍存液，這些試劑簡單實用，極其便捷。對一些難復蘇的細胞極其友好。但是對于長期的細胞留庫保種還是建議采用傳統(tǒng)的方法。兩種凍存液比較方法優(yōu)點缺點傳統(tǒng)DMSO/甘油凍存法能較好的維持細胞的特性一些細胞凍存效果不佳無血清無蛋白凍存法使用方便，對新手友善同樣含有DMSO，某些敏感細胞慎用原理傳統(tǒng)上的細胞凍存（甘油/二甲基亞砜做保護劑）講求的是：慢凍速溶。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入的甘油或二

為什么細胞培養(yǎng)需要用到胎牛血清？2022/10/13

胎牛血清的作用：胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余

Biozellen基質(zhì)膠在小鼠皮下成瘤實驗的使用步驟2022/08/10

小鼠皮下成瘤、小鼠皮下血管生成實驗準備程序A、細胞房內(nèi)材料準備、試劑制備及步驟(1)材料準備:1.冰盒、2.37℃水浴槽、3.C緩沖溶液(10X)、4.含15-20%血清細胞培養(yǎng)液(例如:含15-20%血清的DMEM，DMEM-F12等，不可用PBS)、5.A膠(2X)、6.細胞培養(yǎng)液、7.23-26G針頭、8.1mL針筒、9.細胞。(2)試劑制備:1、C緩沖溶液(0.5X)制備:使用37℃水浴回溫含15-20%血清的細胞培養(yǎng)液(例如:含15-20%血清的DMEM或DMEM-F12等，不可用PB

我的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實驗效率低，怎么辦？2022/07/29

脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染實驗指的是，脂質(zhì)包裹待轉(zhuǎn)染DNA形成復合體，與細胞膜融合或內(nèi)吞，進入細胞。然而，大量的脂質(zhì)體-DNA復合體，只有一小部分能運送到細胞質(zhì)并進入細胞核中。如何提高脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染效率的關鍵，就在這一步：提高復合體進入細胞質(zhì)的效率。1、避免使用陰離子試劑，使用新一代聚陽離子試劑，適用范圍廣，毒性相較以前的脂質(zhì)試劑小。2、使用陽離子脂質(zhì)與DNA的*佳比例，以及一定數(shù)量細胞的陽離子脂質(zhì)用量?？上蛸徺I試劑的公司進行詢問。這是因為過量的脂質(zhì)容易受到培養(yǎng)皿中其他帶電荷物質(zhì)的干擾，如細胞外基質(zhì)中的硫酸

怎么提高電穿孔法轉(zhuǎn)染的效率？2022/07/29

電穿孔法難點在于提高電穿孔的效率。實驗操作者一般能從電轉(zhuǎn)儀廠家得到轉(zhuǎn)染的詳細方案和優(yōu)化指導。當你需要自己優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率時，可以從以下方面進行：1、外加電場的強度：電壓過低，細胞膜不能形成小孔，使得外源分子通過；電壓過高，細胞會受到不可逆損傷，以至于裂解。對于大部分哺乳細胞來說，電壓250～500V/cm是合適的。實驗操作者需要查詢資料，找到所需細胞系轉(zhuǎn)染的合適電場強度。這部分的操作建議通過逐級增加電壓來確定*佳轉(zhuǎn)染電場強度。2、電脈沖時間的長短：一般電脈沖只進行1次。根據(jù)電轉(zhuǎn)儀的具體參數(shù)設置，不同

RAW264.7細胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA、siRNA在發(fā)表文章中的經(jīng)驗分享2022/06/17

石河子大學動物科學與技術學院，在2021年發(fā)表文章到FrontiersinImmunology的學術期刊中科研者使用美國zetalife轉(zhuǎn)染試劑，高效率轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA和siRNA到RAW264.7細胞，具體轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞方法經(jīng)驗如下：（注意：本文轉(zhuǎn)染實驗中使用的細胞數(shù)量、試劑用量和操作方法不適用于傳統(tǒng)lipo3000轉(zhuǎn)染試劑或類似產(chǎn)品）AllplasmidsａndsiRNAs(20uM/uL)weretransfectedusingtheAdvancedDNARNATransfecti

夏天到了，您做好預防細胞污染了嗎？2022/06/17

注意事項：夏天到了，天氣炎熱，空氣中的溫度濕度都在上升，這時最易滋生細菌等微生物，導致細胞培養(yǎng)過程會沒有那么的順利，總是被污染，而且微生物繁殖的速度非?？?。今天我們就來說道說道細胞污染應該怎么預防、處理。目前細胞污染大致可分為：細菌、真菌、支原體、黑膠蟲、病毒等污染。那么想要解決問題，我們就需要知道細胞是遭受了何種污染，才可對癥下藥。接下來我們將帶領大家逐步分析這些污染。細菌細菌污染時，培養(yǎng)基在短時間內(nèi)變成黃色或白色渾濁，有時稍加震蕩，便會有很多混濁物漂起。有些狀況下培養(yǎng)基顏色改變不明顯但細胞形

細胞侵襲實驗全步驟解析2022/06/08

實驗材料準備：細胞，可拍照的顯微鏡,Transwell小室,孔徑8μm,沒包被膠的Transwell,遷移實驗的細胞培養(yǎng)板24孔板。細胞培養(yǎng)板應當與購買的Transwell小室相配套,BD公司的Matrigel,無血清的基礎培養(yǎng)基，BSA，正常的*培養(yǎng)基,無菌PBS,棉簽,胰酶,4%多聚甲醛固定液或者甲醇,結(jié)晶紫染液(0.1%PBS結(jié)晶紫)Transwell操作步驟01用BD公司的Matrigel1:8或者根據(jù)細胞產(chǎn)生mmp的量來決定稀釋,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30m