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多能ES細(xì)胞的培養(yǎng)2022/12/01: 材料與儀器PBS胰酶溶液MEF滋養(yǎng)板巴斯德吸管ES生長培養(yǎng)基步驟1.準(zhǔn)備下列試劑和材料：60mmMEF滋養(yǎng)板（接種不能超過7天）帶棉塞無菌巴斯德吸管無Ca2+和Mg2+PBSES生長培養(yǎng)基胰酶溶液2.PBS沖洗ES細(xì)胞，巴斯德吸管加胰酶溶液覆蓋培養(yǎng)皿底（2ml/p60）3.37℃孵育5分鐘左右，至細(xì)胞脫落。4.巴斯德吸管輕輕吹吸胰酶處理細(xì)胞4~6次，分散ES細(xì)胞。分散的細(xì)胞，包括單細(xì)胞和小的細(xì)胞團(tuán)，轉(zhuǎn)移至裝有2ml預(yù)熱（37℃）ES生長培養(yǎng)基的15ml離心管。5.離心收集細(xì)胞。吸掉上清，留約兩倍

DAPI染DNA的原理及使用方法2022/12/01: 材料與儀器DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式為C16H15N5·2C3H6O3，分子量457.48。DAPI是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料。它結(jié)合到雙鏈DNA小溝的AT堿基對(duì)處，一個(gè)DAPI分子可以占據(jù)三個(gè)堿基對(duì)的位置。結(jié)合到雙鏈DNA上DAPI分子的熒光強(qiáng)度提高大約20倍，常用與熒光顯微鏡觀測(cè)，根據(jù)熒光的強(qiáng)度可以確定DNA的量。另外，因?yàn)镈API可以透過完整的細(xì)胞膜，它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。在熒光顯微鏡

測(cè)定蛋白含量都有哪些方法？2022/11/01: 蛋白的含量的測(cè)定方法主要有紫外分光光度法、Lowry法、BCA法等。紫外分光光度法原理蛋白質(zhì)中的酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)在275~280mm有一紫外吸收峰。在一定濃度范圍內(nèi)，其在280mm的吸光度與蛋白濃度成正比。方法取適量蛋白溶液（約3.5ml），置于光徑為1cm的石英比色杯、用與溶解蛋白的緩沖液相同的緩沖液為對(duì)照，在280mm波長處測(cè)定吸光度，吸光度為1.0的蛋白溶液，蛋白濃度約為1.0mg/ml。當(dāng)溶液中含少量核酸時(shí)，應(yīng)同時(shí)測(cè)定260nm波長處的吸光度，以下式估算蛋白濃度：蛋白濃度（mg/

怎樣辨別是否細(xì)胞污染？2022/11/01: 培養(yǎng)細(xì)胞最擔(dān)心的就是細(xì)胞污染，這期繼續(xù)分享如何辨別細(xì)胞污染的經(jīng)驗(yàn)?！镒R(shí)別支原體污染這是一種很難發(fā)現(xiàn)卻經(jīng)常存在的問題。支原體是最小的（0.3μm）能夠自我復(fù)制的有機(jī)體，倒置顯微鏡下通常觀察不到。支原體沒有細(xì)胞壁，對(duì)常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺的，可能直到出現(xiàn)了可以觀察到的病變或發(fā)現(xiàn)細(xì)胞正常功能喪失的時(shí)候，才意識(shí)到是發(fā)生了支原體感染。在沒有采用特殊的染色方法，也沒有觀察到病變的情況下，實(shí)驗(yàn)總是不成功，就應(yīng)懷疑被支原體污染。預(yù)防支原體污染的惟-途徑是經(jīng)常對(duì)細(xì)胞進(jìn)行篩選。★防止支原體感染

如何才能把細(xì)胞培養(yǎng)好？2022/11/01: 一、細(xì)胞培養(yǎng)的基本概念（1）基本概念細(xì)胞培養(yǎng)：狹義的細(xì)胞培養(yǎng)主要是指分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)，廣義的細(xì)胞培養(yǎng)還包括單（個(gè)）細(xì)胞培養(yǎng)又稱克隆（clone），是指單個(gè)細(xì)胞通過有絲分裂形成的細(xì)胞群體。一個(gè)細(xì)胞克隆中的所有細(xì)胞均來源于同一個(gè)祖先細(xì)胞。原代培養(yǎng)：即第一次培養(yǎng)，指將培養(yǎng)物放在體外生長環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng)，中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程。傳代：原代培養(yǎng)成功后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長和細(xì)胞不斷分裂，一則細(xì)胞之間相互接觸發(fā)生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止；另一方面因營養(yǎng)物不足和代謝物積累不利于生長或發(fā)生中毒。需要將

細(xì)胞污染如何識(shí)別？2022/11/01: 在培養(yǎng)細(xì)胞過程中，同學(xué)們最擔(dān)心的就是細(xì)胞污染。因此，今天給大家分享如何辨別細(xì)胞污染的經(jīng)驗(yàn)，趕快學(xué)起來吧~一、肉眼觀察把培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿拿起來，對(duì)者光線檢查●渾濁情況：即使細(xì)胞密度很高，培養(yǎng)基也應(yīng)該是透明的。輕輕移動(dòng)或晃動(dòng)培養(yǎng)瓶，觀察培養(yǎng)基的渾濁或懸浮情況，一些霉菌可能會(huì)在培養(yǎng)基的表面形成菌落?！衽囵B(yǎng)基顏色的變化。酸性條件下，加了酚紅的培養(yǎng)基會(huì)由紅變黃，而堿性條件下會(huì)變成紅紫色。細(xì)菌污染常常會(huì)使培養(yǎng)基變成黃色，真菌污染會(huì)使培養(yǎng)基變成深紫紅色。注意：丟掉細(xì)胞以前要仔細(xì)檢查一下，快速生長和生長過量的細(xì)胞

Western Blot結(jié)果不理想怎么辦？2022/11/01: 1簡述WesternBlot（簡稱WB），蛋白質(zhì)免疫印跡法，是基于蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳分離和特異性抗體識(shí)別蛋白的特性，通過顯色技術(shù)，以達(dá)到檢測(cè)目的蛋白的技術(shù)。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于定性檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)，活性分析與鑒定。該實(shí)驗(yàn)步驟多，關(guān)鍵點(diǎn)多，耗時(shí)長，每個(gè)步驟可能都影響最終的結(jié)果，所以實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常出現(xiàn)各種問題。本文對(duì)WB實(shí)驗(yàn)中常出現(xiàn)的各種問題進(jìn)行歸納總結(jié)，并給出相應(yīng)的解決方法，以便了解WB實(shí)驗(yàn)中的注意點(diǎn)和規(guī)范操作的必要性，同時(shí)對(duì)WB出現(xiàn)的問題分析和解決提供參考。2實(shí)驗(yàn)原理WB以組織或細(xì)胞中的蛋白質(zhì)

為什么培養(yǎng)基的顏色會(huì)改變？2022/10/28: 我們剛剛購買回來的培養(yǎng)基是鮮紅色的，為什么不是綠色、藍(lán)色的呢？培養(yǎng)基的顏色主要來自酚紅，酚紅指示顏色非常靈敏，pH值范圍為6-8，顏色由黃變?yōu)樽霞t。為了培養(yǎng)方便，能讓我們直觀地感覺培養(yǎng)液的狀況，加入酚紅后，如果培養(yǎng)液偏酸，就顯示偏黃色，偏堿性則會(huì)顯示偏紫色。一般來說，污染細(xì)菌或者長時(shí)間不換液時(shí)，培養(yǎng)基變成黃色，主要是因?yàn)榧?xì)菌和細(xì)胞過度增長，產(chǎn)生了酸性物質(zhì)。開封后的培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳會(huì)逐漸溢出，pH偏堿性，所以培養(yǎng)基就偏紫色了。偏紫色的培養(yǎng)基，可以通入無菌過濾的二氧化碳，調(diào)

看血清的顏色能判斷質(zhì)量好壞嗎？2022/10/27: 你會(huì)根據(jù)顏色深淺判斷血清質(zhì)量好壞嗎？常規(guī)的細(xì)胞培養(yǎng)離不開血清，血清來源于動(dòng)物體內(nèi)，比例牛、馬、豬等，即使采集技術(shù)、純化工藝非常成熟，但因?yàn)閯?dòng)物本身存在個(gè)體差異，所以血清無法像培養(yǎng)基一樣做到產(chǎn)品質(zhì)量*的恒定均一。那怎么判斷血清質(zhì)量的高低呢？有的同學(xué)說看顏色，這個(gè)方法其實(shí)并不可取。血清中顏色偏紅，是由于血清內(nèi)存比較多的膽紅素，它來源于血紅蛋白，是由于在采集血清時(shí)，被采集動(dòng)物出現(xiàn)了較嚴(yán)重的溶血現(xiàn)象時(shí)，膽紅素才會(huì)大量存在于血清中，它與采集工藝的成熟度有關(guān)，與血清自身的質(zhì)量并沒有太大關(guān)系。而要判斷血清的質(zhì)

貼壁細(xì)胞培養(yǎng)如何選擇培養(yǎng)器皿？2022/10/27: 塑料培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿......你知道應(yīng)該怎么選擇嗎？這里介紹常見的幾種培養(yǎng)器皿，有什么樣的特點(diǎn)，給各位同學(xué)參考。多孔板，適合進(jìn)行多次微量細(xì)胞的重復(fù)實(shí)驗(yàn)，有蓋子，需要封口膜將蓋子邊緣密封，減少蒸發(fā)。對(duì)于單層培養(yǎng)物來說，細(xì)胞的產(chǎn)量和有效表面積成正相關(guān)，其他影響則是營養(yǎng)物濃度、氧含量等因素。所以，多孔板培養(yǎng)的微量細(xì)胞，不適合日常使用，需要轉(zhuǎn)換到培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿。培養(yǎng)瓶，由平面、淺層斜肩、襯墊和深螺旋瓶蓋組成。平面供細(xì)胞貼壁生長，斜肩可幫助收集消化細(xì)胞，深螺旋瓶蓋和襯墊提高培養(yǎng)瓶的密封性。型號(hào)如T

培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，如何確認(rèn)需要多少血清呢？2022/10/27: 配制完培時(shí)，是按10%加入血清還是15%、或甚至20%？加多了，經(jīng)費(fèi)在燃燒，加少了，細(xì)胞長不不好。如何優(yōu)化出最合適的血清濃度？我們可以通過觀察幾個(gè)參數(shù)來判斷，其中一個(gè)叫貼壁效率。具體做法是：將細(xì)胞以一個(gè)非常低的密度接種于多個(gè)培養(yǎng)瓶，例如1000個(gè)/瓶，然后使用含不同濃度血清的完培分別培養(yǎng)這幾瓶細(xì)胞，例如5%、10%、15%和20%。培養(yǎng)10-14天后觀察，并計(jì)算培養(yǎng)瓶內(nèi)有多少個(gè)細(xì)胞集落（約50個(gè)細(xì)胞堆在一起算一個(gè)集落）。如果兩瓶細(xì)胞的集落數(shù)量接近，則低濃度的血清是更優(yōu)的選擇。對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言，胎

培養(yǎng)基中加入雙抗細(xì)胞就可以避免被微生物污染了？？2022/10/27: 配制完培時(shí)，會(huì)根據(jù)情況加入很多添加物，其中就有雙抗。雙抗是指青霉素和鏈霉素按一定比例混合的抗生素溶液，它對(duì)微生物生長具有一定的抑制作用。但不少同學(xué)存在一個(gè)誤區(qū)，就是加入的雙抗可以殺滅細(xì)菌，加入雙抗后，細(xì)胞就可以避免被微生物污染。其實(shí)并不是，雙抗僅僅能對(duì)培養(yǎng)環(huán)境中的微生物繁殖產(chǎn)生一定的抑制作用，它無法深透徹消滅微生物污染，反而因?yàn)橛须p抗的存在，還增加了微生物污染的隱蔽性和長期風(fēng)險(xiǎn)。因?yàn)槲⑸锷L被抑制了，但還是存在，我們無法及時(shí)做出有效判斷，會(huì)以為并沒有污染，其次，微生物經(jīng)過長期的抗生素壓力篩選，

培養(yǎng)基常溫儲(chǔ)存還是放冰箱？2022/10/27: 培養(yǎng)基從原來需要逐個(gè)成分配制，到現(xiàn)在可以直接購買不同類型的即用型液體培養(yǎng)基。使用上是越來越方便了，大家收到培養(yǎng)基時(shí)，會(huì)立即存放冰箱保存嗎？還是室溫放置？收到的常規(guī)培養(yǎng)基，例如1640、dmem、MEM等，如果不打開使用，可以存放于室溫，沒有必要放在冰箱內(nèi)。因?yàn)楝F(xiàn)在的培養(yǎng)基成分在室溫下都是穩(wěn)定的，即便是容易降解的谷氨酰胺，現(xiàn)在也有了功能相同但穩(wěn)定性高很多的替代物了。但如果已經(jīng)打開，并且加入了添加物，例如血清的話，還是需要放在冰箱儲(chǔ)存。新配制的完培養(yǎng)基，還應(yīng)該單獨(dú)吸取一部分到空白的培養(yǎng)瓶內(nèi)放置于培養(yǎng)

原代角質(zhì)形成細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法2022/10/26: 為什么越來越多的生物實(shí)驗(yàn)開始使用原代細(xì)胞？原代細(xì)胞在相關(guān)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)使用過程中越來越多，人們不再單單趨于使用細(xì)胞系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，因?yàn)榧?xì)胞系常常由于體外長期培養(yǎng)，而容易丟失原有的生物學(xué)特性，對(duì)藥物處理的反應(yīng)差距越來越大。原代細(xì)胞剛從組織中分離開，生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，仍保留原來的遺傳特性，也*為接近和反應(yīng)體內(nèi)生長特性，原代細(xì)胞的活力和生長狀態(tài)都比較好，細(xì)胞的純度和基因保留可達(dá)到90%以上，適宜用于藥物敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等試驗(yàn)研究，使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可以獲得更準(zhǔn)確的研究和數(shù)據(jù)。角質(zhì)形成細(xì)胞角質(zhì)

原代小鼠心肌成纖維細(xì)胞分離培養(yǎng)方法2022/10/25: 小鼠心肌成纖維細(xì)胞的組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常心臟組織，心臟是脊椎動(dòng)物身體中最重要的一個(gè)器官，主要功能是提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個(gè)部分。心臟的作用是推動(dòng)血液流動(dòng)，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等），使細(xì)胞維持正常的代謝和功能。心臟中，心肌成纖維細(xì)胞約占正常心肌組織細(xì)胞總數(shù)的60%-70%，是心臟中非心肌細(xì)胞的主要組成部分，廣泛存在于心臟組織中，包圍心肌細(xì)胞，連接心肌細(xì)胞間質(zhì)，與缺血性心臟病、炎癥、肥大、梗死等病理狀態(tài)密切

實(shí)驗(yàn)過程中不增殖的細(xì)胞有哪些？2022/10/25: 在生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常會(huì)用到大量的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而往往通過各種渠道得來的細(xì)胞數(shù)量都有限，無法滿足實(shí)驗(yàn)過程中所需要的細(xì)胞數(shù)量，所以為了使實(shí)驗(yàn)更順利的進(jìn)行，科研人員往往需要前期對(duì)所需的細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)充培養(yǎng)，以便在后期的實(shí)驗(yàn)中，可以不間斷使用。通常的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，很多科研人員都會(huì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案選擇常見的細(xì)胞，包括無限傳代的細(xì)胞系和有限傳代的原代細(xì)胞，一般的細(xì)胞都具有分裂增殖的能力，可以進(jìn)行凍存、復(fù)蘇及傳代，因?yàn)檫@樣的難度系數(shù)低，實(shí)驗(yàn)會(huì)少出現(xiàn)波折，也有少量的實(shí)驗(yàn)研究會(huì)用到一些特殊的細(xì)胞。細(xì)胞系可無限傳代，但是由

什么是細(xì)胞遷移與侵襲？2022/10/25: 細(xì)胞遷移也叫做細(xì)胞爬行，細(xì)胞移動(dòng)或者細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，是細(xì)胞在化學(xué)信號(hào)（如：趨化因子）的驅(qū)使下沿著濃度梯度從一個(gè)區(qū)域轉(zhuǎn)移到另一區(qū)域的運(yùn)動(dòng)，是活細(xì)胞普遍存在的一種運(yùn)動(dòng)形式。細(xì)胞遷移在損傷修復(fù)，細(xì)胞分化，胚胎發(fā)育，腫瘤轉(zhuǎn)移等生理病理過程中普遍存在。細(xì)胞侵襲與細(xì)胞遷移比較類似，但是“侵襲”需要細(xì)胞穿過胞外基質(zhì)層（ECM）或基底膜基質(zhì)層（BME），在這個(gè)過程中細(xì)胞先酶解去除ECM/BME的阻礙，從而在趨化因子濃度梯度的驅(qū)使下完成從一處到另一處的移動(dòng)。常用來評(píng)估腫瘤細(xì)胞在正常組織中轉(zhuǎn)移的能力，但正常細(xì)胞，如巨噬細(xì)

如何做好HE染色？2022/10/25: HE染色是組織切片最為常用的染色法之一。其中，蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸表現(xiàn)為藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分呈現(xiàn)紅色。但如何保證自己每一次都能完成漂亮的染色呢？有道是老馬都可以失前蹄兒，為了讓大家對(duì)HE染色有著更清晰的認(rèn)識(shí)，小編搜集查詢了下面的內(nèi)容，希望能對(duì)大家的染色技巧有一定的提升。顏色篇（1）染色結(jié)果紅藍(lán)失調(diào)偏藍(lán)，蘇木精染色過深或伊紅染色時(shí)間太短導(dǎo)致其分化過度；偏紅，細(xì)胞核未成功染色，蘇木精染色過淺或伊紅染色過深，脫蠟不透徹也是一個(gè)原因。（

細(xì)胞培養(yǎng)常遇到的問題解決辦法2022/10/24: 養(yǎng)細(xì)胞是一件勞心勞力的事。要像照顧小孩一樣仔細(xì)對(duì)待，愛護(hù)它，呵護(hù)它。這次就來講講細(xì)胞培養(yǎng)常見問題的原因及解決辦法。1培養(yǎng)液pH值變化太快原因：CO2張力不對(duì)培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足培養(yǎng)液中鹽濃度不正確細(xì)菌、酵母或真菌污染解決辦法：按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5％到10％?；蛘吒挠貌灰蕾嘋O2培養(yǎng)液松開瓶蓋1/4圈加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’

實(shí)驗(yàn)新手如何養(yǎng)好細(xì)胞？2022/10/24: 常聽到一些新手同學(xué)養(yǎng)細(xì)胞，自己總是經(jīng)歷失望-絕望-希望的過程，現(xiàn)在為了方便一些新手同學(xué)養(yǎng)好細(xì)胞。把幾點(diǎn)注意問題跟大家分享一下，希望能夠?qū)π率謧兩杂袔椭?.細(xì)胞不要過度消化，有些貼壁不牢的如293T，加入胰酶在臺(tái)子里晃晃就可以了，不用放到溫箱中；2.傳代時(shí)，細(xì)胞分的稀了或者分的不均勻，形成單細(xì)胞的克隆群，細(xì)胞就會(huì)長成密密麻麻的一群，如293T會(huì)成為小方塊狀，而不是正常的不規(guī)則形狀，這時(shí)候，即使沒有長滿盤，也應(yīng)該消化重新鋪板。3.貼壁細(xì)胞的上清看起來清亮、顏色正常時(shí)，即使在鏡下檢測(cè)有些懸浮物，一般

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