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細(xì)胞凍存，讓細(xì)胞重活過(guò)來(lái)！2022/01/15: 雖然目前組織和器官的冷凍保存極其困難，但是隨著生命科學(xué)的進(jìn)步，細(xì)胞凍存技術(shù)已經(jīng)成為了細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用，在科研實(shí)驗(yàn)中也是重要的一環(huán)。被凍存在液氮中的年輕細(xì)胞，不僅可以治療疾病，還能延長(zhǎng)壽命、延緩衰老等等，對(duì)于個(gè)人和未來(lái)醫(yī)學(xué)的發(fā)展都非常有意義。如為新生兒凍存臍

細(xì)胞培養(yǎng)遇到問(wèn)題？怎么解決？2022/01/15: 培養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中，時(shí)常會(huì)遇到各種的問(wèn)題，怎么辦？以下是整理的一些常用問(wèn)題的解決辦法。培養(yǎng)液pH值變化太快可能原因：(1)CO2張力不對(duì)。(2)培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊。(3)NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖力不足。(4)培養(yǎng)液中鹽濃度不正確。(5)細(xì)菌、酵母或真菌污染。建議解決方法：(1)按培養(yǎng)液中NaHCO3濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度，2.0g/L到3.7g/L濃度NaHCO3對(duì)應(yīng)CO2濃度為5%到10%。(2)松開瓶蓋1/4圈。(3)改用不依賴CO2培養(yǎng)液。加HEPES緩沖液至10到25mM終濃度。(

為什么要使用原代細(xì)胞？2022/01/15: 細(xì)胞體外培養(yǎng)很好地補(bǔ)充了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的不足，它讓細(xì)胞功能和進(jìn)程的研究更具可操作性。十幾年來(lái)，細(xì)胞系已在科學(xué)發(fā)展中起了重要作用，然而僅僅由細(xì)胞系得來(lái)的數(shù)據(jù)越來(lái)越難有說(shuō)服力。細(xì)胞系誤認(rèn)和細(xì)胞不純等因素鞭策研究者們?cè)絹?lái)越傾向于使用原代細(xì)胞。細(xì)胞系還有一個(gè)缺點(diǎn)是，它們往往與原始的組織有不一樣的遺傳和表型。相比之下，原代細(xì)胞保持了細(xì)胞在體內(nèi)的許多重要標(biāo)志和功能。例如內(nèi)皮細(xì)胞系缺少許多功能標(biāo)志，而原代內(nèi)皮細(xì)胞就保留了這些重要特征?；虮磉_(dá)直接影響細(xì)胞功能，基因表達(dá)分析對(duì)研究原代細(xì)胞起重要作用。傳統(tǒng)的報(bào)告基因檢測(cè)

SD大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)方法技巧2022/01/15: SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞簡(jiǎn)單介紹：骨髓原始間充質(zhì)干細(xì)胞(SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，是人們?cè)诓溉閯?dòng)物的骨髓基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的一種具有分化形成骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)及成肌細(xì)胞的多種分化潛能的細(xì)胞亞群。它們對(duì)骨髓中的造血干細(xì)胞（HSC）不僅有機(jī)械支持作用，還能分泌多種生長(zhǎng)因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來(lái)支持造血。常用的分離MSC的方法主要有全骨髓法和密度梯度離心法，(SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞)全骨髓法即根據(jù)干細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中有貼壁優(yōu)勢(shì)特性，定期換液除去不貼壁

實(shí)驗(yàn)室試劑如何科學(xué)管理？2022/01/10: 一、實(shí)驗(yàn)室試劑管理普遍存在的問(wèn)題1．無(wú)試劑專庫(kù)。試劑儲(chǔ)藏室與實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備在同一房間內(nèi)，致使室內(nèi)空氣的相對(duì)濕度過(guò)大，試劑易變質(zhì)失效。2.保管環(huán)境不良。缺乏良好的通風(fēng)設(shè)備，既影響試劑的質(zhì)量，也影響工作人員的身體健康。3.無(wú)清庫(kù)制度。某些試劑庫(kù)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、庫(kù)存過(guò)多，造成浪費(fèi)。4.缺乏規(guī)范分類知識(shí)與措施。試劑分類不科學(xué)，使用不方便。5.環(huán)保意識(shí)差。過(guò)期試劑不經(jīng)過(guò)無(wú)害處理就隨意丟棄。二、實(shí)驗(yàn)室試劑管理原則1.專人、專庫(kù)、專柜管理原則設(shè)定具有相應(yīng)專業(yè)水平、管理水平和高度責(zé)任心的專職管理人員，從事試劑的保管工作，

流式細(xì)胞術(shù)的空白對(duì)照、同型對(duì)照、FMO對(duì)照要怎么選？2022/01/10: 流式數(shù)據(jù)分析時(shí)，應(yīng)該把門設(shè)在哪里合適呢，特別是那些分群不明顯的結(jié)果。我們知道流式細(xì)胞術(shù)常見的有空白對(duì)照（未染色細(xì)胞）、同型對(duì)照和FMO對(duì)照，每種對(duì)照適用于什么情況呢？1、空白對(duì)照：空白對(duì)照的作用是作為電壓調(diào)節(jié)的參考，調(diào)整電壓參數(shù)使細(xì)胞信號(hào)在圖上各個(gè)通道的合適位置。同時(shí)，也是可以看到細(xì)胞的本底信號(hào)，圈門時(shí)直接排除。未處理的細(xì)胞，不能作為處理組細(xì)胞的圈門依據(jù)，需要使用相同處理組的空白對(duì)照，來(lái)觀察細(xì)胞的本底信號(hào)?？瞻讓?duì)照適用于細(xì)胞分群明顯、背景熒光弱、已有大量研究的分群明確的細(xì)胞群圈門，例如CD3、C

培養(yǎng)基的顏色改變代表著什么？2022/01/10: 我們剛剛購(gòu)買回來(lái)的培養(yǎng)基是鮮紅色的，為什么不是綠色、藍(lán)色的呢？培養(yǎng)基的顏色主要來(lái)自酚紅，酚紅指示顏色非常靈敏，pH值范圍為6-8，顏色由黃變?yōu)樽霞t。為了培養(yǎng)方便，能讓我們直觀地感覺培養(yǎng)液的狀況，加入酚紅后，如果培養(yǎng)液偏酸，就顯示偏黃色，偏堿性則會(huì)顯示偏紫色。一般來(lái)說(shuō)，污染細(xì)菌或者長(zhǎng)時(shí)間不換液時(shí)，培養(yǎng)基變成黃色，主要是因?yàn)榧?xì)菌和細(xì)胞過(guò)度增長(zhǎng)，產(chǎn)生了酸性物質(zhì)。開封后的培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳會(huì)逐漸溢出，pH偏堿性，所以培養(yǎng)基就偏紫色了。偏紫色的培養(yǎng)基，可以通入無(wú)菌過(guò)濾的二氧化碳，調(diào)

siRNA和shRNA有什么區(qū)別？2022/01/10: shRNA即短發(fā)卡RNA（shorthairpinRNA），包含一段緊密發(fā)卡環(huán)結(jié)構(gòu)，常被用于RNA干擾沉默靶基因的表達(dá)。siRNA是小干擾RNA，是一種雙鏈RNA，3’端含有兩個(gè)突出的非配對(duì)堿基。siRNA可以激活RNA干擾，信使鏈被移除，向?qū)ф溡龑?dǎo)對(duì)靶標(biāo)RNA的切割和降解。雖然siRNA和shRNA都可用于蛋白沉默，但它們的作用機(jī)制有所不同。shRNA是siRNA或者miRNA的前體，shRNA在轉(zhuǎn)錄后可以從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)，在細(xì)胞質(zhì)中其環(huán)結(jié)構(gòu)被Dicer酶切割，釋放siRNA。siRNA的

細(xì)胞誘導(dǎo)與檢測(cè)方法2022/01/10: 使用細(xì)胞細(xì)胞包被液包被細(xì)胞培養(yǎng)板，將傳代或復(fù)蘇凍存的人間充質(zhì)干細(xì)胞接種到6孔板上，密度為2×105-3×105cells/cm2或2×105-3×105cells/孔，置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%-90%時(shí)，小心的將孔內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基吸掉，向6孔板中加入2mL人間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪分化培養(yǎng)基,以此記為第0天。一、細(xì)胞誘導(dǎo)前可使用多聚賴氨酸溶液進(jìn)行細(xì)胞包被，以便細(xì)胞更好的進(jìn)行貼壁。二、每隔1-2天更換新鮮的人間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪分化培養(yǎng)基；注意：為防止脂肪細(xì)胞脫落，建議誘

ELISA實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)及常見問(wèn)題解答2022/01/06: 一、ELISA操作前準(zhǔn)備工作試劑盒的選擇ELISA操作前，應(yīng)做好實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)、選擇適合自己檢測(cè)范圍和靈敏度的試劑盒、提前訂購(gòu)和準(zhǔn)備試劑及耗材、處理樣本等準(zhǔn)備工作。樣本處理在收集標(biāo)本前需有一個(gè)完整的計(jì)劃，需要清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。ELISA檢測(cè)提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請(qǐng)取材后，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。二、ELISA

原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)詳解2022/01/06: （1）原代培養(yǎng)材料的選擇，盡量選取繁殖能力較強(qiáng)的組織，如胚胎、幼小的生物體或者腫瘤組織等。（2）要注意無(wú)菌操作。其操作要求應(yīng)高于外科手術(shù)（3）整個(gè)取材操作要迅速，尤其孕鼠浸泡乙醇時(shí)間1min左右，不能過(guò)長(zhǎng)，以確保胚胎細(xì)胞活性。（4）運(yùn)用消化法時(shí)胰酶溫度應(yīng)低于37℃，濃度只需平時(shí)消化細(xì)胞濃度的一半。因?yàn)榇诉^(guò)程不像消化培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)的1~10min，而是至少20min，先消化下來(lái)的細(xì)胞在此胰酶消化液中繼續(xù)消化了10min以上。所以胰酶不能作用過(guò)強(qiáng)，否則這些細(xì)胞易被損傷而不易生存。（5）如使用組織塊法，則

BV2細(xì)胞異常生長(zhǎng)形態(tài)解析及解決方案2022/01/06: BV2常用的小膠質(zhì)細(xì)胞模型，它用攜帶v-raf/v-myc基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒（J2）感染原代小膠質(zhì)細(xì)胞而獲得永生化。BV2細(xì)胞表達(dá)非特異性酯酶活性，它具有吞噬性能力，并缺乏過(guò)氧化物酶活性。這種細(xì)胞不僅會(huì)分泌溶菌酶，在適當(dāng)?shù)拇碳は拢€會(huì)分泌白細(xì)胞介素1和腫瘤壞死因子。此外，BV2細(xì)胞還表現(xiàn)出自發(fā)的抗念珠菌活性，用干擾素-Y處理后獲得殺腫瘤活性。從表型上看，BV2細(xì)胞對(duì)MAC1和MAC2抗原呈陽(yáng)性，而對(duì)MAC3、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）和半乳糖核苷（GC）抗原呈陰性[1]。圖A.BV2細(xì)胞顯微照片

細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢是什么情況？2022/01/06: 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問(wèn)題，這些問(wèn)題從細(xì)胞生長(zhǎng)角度來(lái)說(shuō)，針對(duì)細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對(duì)應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過(guò)度；●支原體污染；●培養(yǎng)基pH值過(guò)堿（NaHCO3分解）；●細(xì)胞老化；●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度；●分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；●使用無(wú)菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無(wú)菌CO2；●啟用新的保種細(xì)胞；●調(diào)節(jié)

如何提高蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)（Western Blot）的成功率？2022/01/05: 近些年來(lái)，蛋白質(zhì)組學(xué)研究是生物領(lǐng)域比較熱門和研究廣泛的方向。而WesternBlot實(shí)驗(yàn)是研究蛋白組學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)操作。但是一個(gè)成功的WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果需要注意很多細(xì)節(jié)。WesternBlot即蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)，利用抗原抗體特異性結(jié)合來(lái)檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)量。蛋白質(zhì)印跡法是由瑞士*弗雷德里希生物研究所（FriedrichMiescherInstitute）的HarryTowbin在1979年提出的。在尼爾·伯奈特（NealBurnette）于1981年所著的《分析生物化學(xué)》（Analy

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)如何對(duì)器皿進(jìn)行表面處理？2022/01/05: 在實(shí)驗(yàn)室中，我們一般會(huì)用聚丙乙烯制成的無(wú)菌培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿或多孔板來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。它們透光性好、生長(zhǎng)面平滑、能夠提供質(zhì)地均勻、重復(fù)性好的單層培養(yǎng)物。然而由于是人工合成的，因此聚丙乙烯是疏水性的，表面不適宜細(xì)胞生長(zhǎng)，故用于組織培養(yǎng)的塑料，都要經(jīng)過(guò)γ射線照射、化學(xué)處理或電離輻射，以產(chǎn)生親水的帶電表面，使細(xì)胞能夠附著。附著遇到的最大困難是如何讓細(xì)胞附著上去，而包被附著物有可能會(huì)促進(jìn)細(xì)胞的粘附。在很多時(shí)候，為了適應(yīng)不同實(shí)驗(yàn)的需求、解決細(xì)胞貼壁不牢的問(wèn)題，我們需要對(duì)培養(yǎng)器皿用不同的物質(zhì)進(jìn)行包被后使用。這些物質(zhì)可

防污指南——推薦這幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室常用滅菌方式！2022/01/05: 那細(xì)胞往哪放呢？培養(yǎng)材料消毒了嗎？真是不讓人省心.....哎呀，哪那么容易污染？世上可沒有后悔藥哦做實(shí)驗(yàn)第一步要做什么？檢查實(shí)驗(yàn)環(huán)境實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)常用的器材一般包括玻璃器材、金屬器械、橡膠制品及塑料制品等，每類器材的處理及消毒措施都有不同。嚴(yán)格的消毒滅菌工作極為重要，直接影響著整個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)芊耥樌M(jìn)行。很多小伙伴在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)各種形形色色的問(wèn)題，甚至是大型翻車現(xiàn)場(chǎng)，這其中最根本的原因就在于實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范、消毒、滅菌方式不規(guī)范，今天就跟小編一起了解一下實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌消毒方式。實(shí)驗(yàn)室常用滅菌

血清常見問(wèn)題解決方法2022/01/05: 正常情況下，融化后血清的外觀顏色應(yīng)該是？血清為動(dòng)物來(lái)源，成分復(fù)雜，不同批次間會(huì)存在一些外觀上的差別。一般情況下，它們的顏色可能是金黃色、紅色、琥珀棕色或者是介于三者之間。?血清應(yīng)如何保存？未拆封的血清應(yīng)存放于-15至-20℃，避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無(wú)菌分裝成一次的用量并存放于-15至-20℃，在產(chǎn)品質(zhì)量證書標(biāo)識(shí)的效期內(nèi)均可使用。2-8℃溶解后建議盡快使用。?血清的有效期是多久？大部分血清效期是5年，針對(duì)每個(gè)批次，請(qǐng)通過(guò)質(zhì)檢文件確定具體效期日期。?血清應(yīng)如何融解？從冰箱中取出血清，放于2-8

細(xì)胞不好養(yǎng)？是因?yàn)樗粔蚝谩?/a>2022/01/05: 培養(yǎng)基“細(xì)胞的家”培養(yǎng)細(xì)胞的重要環(huán)節(jié)很多，其中重要的一步就是為細(xì)胞選擇適合的生長(zhǎng)環(huán)境，建立一個(gè)細(xì)胞滿意的“家”—成分適合又營(yíng)養(yǎng)豐富細(xì)胞培養(yǎng)基。細(xì)胞培養(yǎng)基是供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)、維持細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物，種類一般包括經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基、無(wú)血清培養(yǎng)基以及化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基等。這其中又以經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基最為常用。經(jīng)典/基礎(chǔ)培養(yǎng)基屬于合成培養(yǎng)基，是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基，但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分仍然無(wú)法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細(xì)胞培養(yǎng)

常見細(xì)胞污染類型及預(yù)防辦法2022/01/04: 凡混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對(duì)細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染，細(xì)胞污染不能*被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。本文將簡(jiǎn)要介紹幾種常見的細(xì)胞污染類型及處理方法。常見污染類型細(xì)菌污染特征：大小在0.5~5μm，比動(dòng)物細(xì)胞小很多。多呈球狀或桿狀，形態(tài)規(guī)則，分布均勻；增殖速度快，一般污染后48~72小時(shí)爆發(fā)式增殖；營(yíng)養(yǎng)消耗快，培養(yǎng)基很快變黃，變渾濁；鏡下觀察有明顯的定向運(yùn)動(dòng)。處理方法：輕度污染可用10X雙抗清洗處理，重度污染建議消殺后丟棄。真菌污染特征：呈鏈球狀或絲狀。常形成肉眼可

HK-2細(xì)胞出現(xiàn)空泡是正常的嗎？2022/01/04: 建系背景人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞系HK-2，取自正常成人腎臟的永生化近端小管上皮，通過(guò)轉(zhuǎn)入HPV-16E6/E7基因構(gòu)建而成，并在無(wú)血清培養(yǎng)基中持續(xù)生長(zhǎng)了一年多。HK-2的生長(zhǎng)依賴于表皮生長(zhǎng)因子EGF，保留了良好的PTCs的表型。陽(yáng)性表達(dá)：堿性磷酸酶；γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶；亮氨酸氨肽酶；酸性磷酸酶；細(xì)胞角蛋白;α3β1整合素；纖連蛋白。陰性表達(dá)：因子VIII相關(guān)抗原、6.19抗原和CALLA內(nèi)肽酶呈陰性。常見問(wèn)題在培養(yǎng)HK-2細(xì)胞的時(shí)候，常會(huì)出現(xiàn)一些細(xì)節(jié)問(wèn)題，不可掉以輕心。本文為大家總結(jié)培養(yǎng)HK-2

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