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認(rèn)識(shí)黑膠蟲的真面目（上）2022/01/04: 江湖上流傳很久的黑膠蟲，到底真實(shí)身份是啥？今天讓我們一起來扒一扒~我們收集了全國29個(gè)黑膠蟲污染樣本進(jìn)行DNA提取、測(cè)序、數(shù)據(jù)庫比對(duì)，得到了鑒定結(jié)果，一起和大家分享一下吧。表：黑膠蟲檢定微生物種屬樣本數(shù)G+/G-形狀直徑大小Mycoplasmahyorhinis（豬鼻支原體）3//0.15~0.3μmMycoplasmabovis（牛支原體）1//0.15~0.3μmMycoplasmapulmonis（鼠肺支原體株）1//0.15~0.3μmMycoplasmayeatsii（山羊支原體）6/

細(xì)胞的必須檢查，你有做過嗎？2022/01/04: 文章描述了一個(gè)典型的工作流程，與細(xì)胞操作需要注意的必要步驟，為了成功地應(yīng)用哺乳動(dòng)物細(xì)胞系，它們必須在受控的條件下生長，并需要自己特定的生長介質(zhì)。此外，為了保證一致性，必須定期監(jiān)測(cè)它們的生長情況。當(dāng)細(xì)胞系達(dá)到約80%的合流時(shí)，必須傳代培養(yǎng)，以確保細(xì)胞的正常生長和健康。80%的重合性是指培養(yǎng)容器表面的80%被細(xì)胞覆蓋。01為什么我需要傳代我的細(xì)胞？細(xì)胞培養(yǎng)一旦開始，由于細(xì)胞數(shù)量的增加、營養(yǎng)物質(zhì)的消耗和有毒代謝物的增加，它不能無限期地生長，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。此外，研究人員通常對(duì)細(xì)胞要進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)，因此

IPS細(xì)胞怎么誘導(dǎo)分化？2022/01/04: IPSC生成通常是實(shí)現(xiàn)真正的實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)的中間步驟。它一般應(yīng)用于：人胚胎發(fā)育建模；作為難以分離的細(xì)胞來源，用于基礎(chǔ)研究和疾病建模；藥物篩選應(yīng)用；細(xì)胞替代治療。IPS神經(jīng)分化的protocol，以下是神經(jīng)細(xì)胞的分化操作步驟，可供參考：準(zhǔn)備好神經(jīng)誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基，建議使用Essential8TM培養(yǎng)基以Matrigel基質(zhì)膠作為基質(zhì)，或者使用StemProhESCSFM培養(yǎng)基以Geltrex作為基質(zhì)。1、高品質(zhì)的PSCs（無分化或者僅含少量分化的克隆）是進(jìn)行有效的神經(jīng)誘導(dǎo)的關(guān)鍵。在傳代PSCs時(shí)去除所有

細(xì)胞凍存相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作詳解2021/12/27: 一、怎樣凍存動(dòng)物細(xì)胞?一個(gè)實(shí)驗(yàn)室得到一個(gè)新的細(xì)胞株后，首先要把該細(xì)胞株培養(yǎng)擴(kuò)增后凍存起來。細(xì)胞凍存首先可以在由于污染等情況丟失細(xì)胞時(shí)有備份可用，另外幾乎所有細(xì)胞在培養(yǎng)傳代的過程中發(fā)生一定程度的變異，為了保持實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致，一般細(xì)胞在培養(yǎng)幾十代以后就不能再使用了，需要將凍存的，傳代較少的細(xì)胞化凍培養(yǎng)再使用。細(xì)胞冷凍過程有四個(gè)要點(diǎn)：細(xì)胞的收獲、保護(hù)劑的使用、冷凍速率和儲(chǔ)存環(huán)境。(1)細(xì)胞的收獲用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿90%的時(shí)候，這時(shí)細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前24小時(shí)換

CaCl2 法制備感受態(tài)細(xì)胞2021/12/24: 材料與儀器【器材】1．培養(yǎng)皿2．恒溫培養(yǎng)箱【試劑】1．LB培養(yǎng)基2．選擇性LB瓊脂培養(yǎng)平板（含氨芐青霉素，終濃度為50μg/ml）3．氨芐青霉素100mg/ml4．宿主細(xì)菌：經(jīng)100mmol/LCaCl2處理的感受態(tài)細(xì)菌DH5α步驟取50μL大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，加入適量質(zhì)粒（體積不得超過4μL）冰浴30min后，42℃熱激90s，馬上放回冰上，冰浴2min；加400μLLB培養(yǎng)基，于37℃搖床慢搖振蕩培養(yǎng)45-60min；取50-100μL涂在含有氨芐青霉素（100μg/mL）的LB固體培養(yǎng)基上

牙簽法小量制備質(zhì)粒DNA實(shí)驗(yàn)2021/12/24: 原理用牙簽從瓊脂培養(yǎng)基上挑取的菌落可直接用于制備質(zhì)粒DNA。所得的閉合環(huán)狀DNA往往雜質(zhì)太多，不能作為大多數(shù)限制酶的底物。材料與儀器抗生素溴酚藍(lán)溶液EDTA溴化乙錠NSS溶液KCl瓊脂糖凝膠LB、YT或SOB熱循環(huán)儀木質(zhì)牙簽步驟一、材料1.緩沖液和溶液(1)用于篩選質(zhì)粒的抗生素(2)溴酚藍(lán)溶液（0.4%，m/V）或甲酚紅溶液（10mmol/L）(3)EDTA(0.5mol/L，pH8.0)(4)溴化乙錠（10mg/ml)或SYBRGold(5)KCl(4mol/L)(6)NSS溶液：0.2mol

制備YAC DNA進(jìn)行Southern印跡分析2021/12/24: 材料與儀器酵母菌AHCSCESCEMTris·ClEDTATE乙酸甲R(shí)NaseA異丙醇NaCl培養(yǎng)箱離心管轉(zhuǎn)子步驟1.接種一個(gè)紅色的含YAC克隆的酵母菌落于盛有20mlAHC培養(yǎng)基的250ml三角燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)搖床上30℃250r/min振蕩培養(yǎng)24h。2.擴(kuò)大培養(yǎng)：取1ml由步驟1獲得的粉紅色菌懸液接種于盛有100mlAHC培養(yǎng)基的1000ml三角燒瓶中，于30℃250r/min搖床培養(yǎng)24h。3.將菌懸液移入2個(gè)50ml的錐形離心管中，于2000g離心5min，棄上清，共用5mlSCE緩沖液

YAC 克隆的分析實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)庫參考來源：2021/12/24: 材料與儀器酵母菌AHCYPD甘油培養(yǎng)箱冷凍管步驟1.用接種棒將含重組載體pYAC的AB1380菌株劃線接種在AHC平板上，倒扣平板于30℃培養(yǎng)，直至長出1~3mm大小的紅色菌落為止。2.短期保存：用Parafilm膜將平板周圍封起來，于4℃可保存4~6周。3.長期保存：接種一個(gè)單獨(dú)的YAC克隆的菌落于3.2mlYPD培養(yǎng)基中，在30℃搖床過夜，然后加入1ml80%甘油，混勻，再分成0.2~1.0ml小份將甘油/菌懸液移至冷凍管中，-80℃保存。同實(shí)驗(yàn)其他方法制備YACDNA進(jìn)行Southern印

熒光原位雜交技術(shù)2021/12/24: 原理用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補(bǔ)的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行異性結(jié)合，形成可被檢測(cè)的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以探針直接與染色體進(jìn)行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。材料與儀器人的MyoD1（MYF3)基因探針人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本指甲油甲酰胺氯化鈉檸檬酸鈉氫氧化鈉吐溫20恒溫水浴鍋培養(yǎng)箱染色缸載玻片NikonE-400熒光顯微鏡蓋玻片封口膜200μL移液器暗盒步驟1.探針變性將探針在75℃恒溫水浴中溫育5min，立即置0

細(xì)胞傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)常見問題詳解2021/12/23: 01一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張)，排除細(xì)胞本身污染的情況。02何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。03細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?一般情況下細(xì)胞生長至*匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長都有一個(gè)要求不宜生長過密(也就是常說

如何提升細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率?2021/12/23: 細(xì)胞轉(zhuǎn)染是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的一種常用的技術(shù)手段。而轉(zhuǎn)染效率低卻是實(shí)驗(yàn)童鞋們經(jīng)常遇到的問題，尤其是原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染，更是因?yàn)殡y度大，號(hào)稱誰碰誰死，而令人談虎色變。不，應(yīng)該是談原代細(xì)胞色變。那么，當(dāng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到轉(zhuǎn)染這一步時(shí)有哪些坑要避免?需要注意的因素有哪些呢?一、細(xì)胞系的選擇細(xì)胞系選擇有時(shí)是實(shí)驗(yàn)的需要，有時(shí)是實(shí)驗(yàn)室條件的限制。如果有選擇的余地當(dāng)然挑個(gè)容易做的。越是接近體內(nèi)的真實(shí)情況的原代細(xì)胞，通常越是難于伺候。反之亦然。此外細(xì)胞本身的特性也是需要考慮的因素。有時(shí)需要根據(jù)細(xì)胞系來選擇合適的轉(zhuǎn)染方法;

細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十七）2021/12/23: 細(xì)胞培養(yǎng)問題集錦第十七期，小編會(huì)繼續(xù)收集相關(guān)問題，每期都為大家更新5個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)中遇到的問題并解答~81、▲問：hepg2細(xì)胞有很多小球聚集到一起，這是污染還是沒有吹開的細(xì)胞？是不是念珠菌感染？出不來形態(tài)，吹不勻。答：肝癌就是這樣，很容易坨，肝癌會(huì)有一個(gè)聚集成團(tuán)，一片一片的clone，也會(huì)成聚集，推薦是帶丙酮酸鈉的MEM。82、問：細(xì)胞培養(yǎng)中加入biotin有什么作用呢？答：是為了促進(jìn)細(xì)胞增殖。83、▲問：細(xì)胞轉(zhuǎn)了敲低基因的病毒之后，為什么總會(huì)出現(xiàn)一些比細(xì)胞還要亮的，碎片樣的東西，或者圓形的東西呢

細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十六）2021/12/23: 細(xì)胞培養(yǎng)第十六期來了，今后也會(huì)陸續(xù)為大家更新，一起來看看吧~76、▲問：這是酵母菌感染嗎？一般會(huì)通過什么途徑污染？答：是酵母菌污染，像圈起來的連體結(jié)構(gòu)就是。一般是環(huán)境和操作等途徑污染。問：用新潔爾滅擦拭，加上紫外消毒應(yīng)該有用吧？答：有用的。77、▲問：這是什么類型的染菌？細(xì)胞之外還有那種黑色的小線條似的，不跳動(dòng)，顯微鏡觀察會(huì)隨著培養(yǎng)基流動(dòng)。答：是細(xì)菌污染，細(xì)菌有鞭毛，可以游動(dòng)，鞭毛多的游動(dòng)活躍，咱們鏡下能觀察到；鞭毛少的，動(dòng)的不活躍，咱們鏡下看不出來在動(dòng)。像細(xì)沙一樣，漫天沙塵暴，也是細(xì)菌污染。雙

細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十五）2021/12/23: 本次更新第十五期細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦，大家一起來看看有沒自己培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)遇到的問題吧~71、問：凍存細(xì)胞放在4°最多可以放多久呀？如不小心忘記了大概放4°放了3個(gè)小時(shí)還可以用嗎？答：?jiǎn)栴}不大，有復(fù)蘇過這樣的，活了。盡量別這樣不過4°還好，-20不要太久。否則形成冰晶，對(duì)細(xì)胞比較不好。4度建議控制在半小時(shí)左右。72、問：請(qǐng)問馴化細(xì)胞經(jīng)過馴化是指什么意思？就是更好養(yǎng)嗎？答：就像馴養(yǎng)貓狗一樣，幾千年來，讓它們成為咱們的寵物。比如把懸浮細(xì)胞馴化成貼壁細(xì)胞，把貼壁細(xì)胞馴化成懸浮細(xì)胞，按照咱們的想法進(jìn)行，就是

細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十四）2021/12/23: 本期我們繼續(xù)更新細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題，看下有沒大家遇到的，讓我們細(xì)胞培養(yǎng)做得更好，個(gè)個(gè)細(xì)胞都養(yǎng)得“肥肥白白”~話不多說，以下為大家奉上本期精華~66、問：thp-1誘導(dǎo)貼壁之后，背景比較臟，還隱約看到有東西在動(dòng)，這個(gè)可能是什么情況呢？答：如果是隱約看到有東西在動(dòng)，不敢斷定是不是黑膠蟲。剛換完液清澈，第二天是否變臟？問：也沒有，就是幾天不管，然后就覺得細(xì)胞的狀態(tài)很差，pma誘導(dǎo)，一多半不貼壁了，背景還隱約覺得，有細(xì)菌大小的透明點(diǎn)點(diǎn)在動(dòng)，貼壁得很不好。那些沒有貼壁的細(xì)胞也是透亮的，有折光的。答：如果剛換

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬及其特點(diǎn)詳解剖析2021/12/22: 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬的概念最早于2007年提出，是指內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)酵母發(fā)生針對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的選擇性的自噬現(xiàn)象，其主要作用是降解多余的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜，控制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的體積從而維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)。近年來隨著對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬的研究方法、形成機(jī)制及其作用的探索不斷深入，發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmicreticulumstress，ERstress)不僅可以觸發(fā)非選擇性細(xì)胞巨自噬，還可以直接誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬，形成只包含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)成分而不包含其他細(xì)胞器或細(xì)胞質(zhì)的自噬體。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬的作用：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、磷脂、膽固醇以及寡糖合成和修飾的

腫瘤免疫治療靶點(diǎn)及相關(guān)小分子抑制劑/激動(dòng)劑詳解2021/12/22: 腫瘤相關(guān)的免疫治療主要包括細(xì)胞療法、免疫檢查點(diǎn)抑制劑及腫瘤疫苗三大類。免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICIs）主要是單克隆抗體（mAbs），而抗體類藥物大多存在不能口服、組織滯留時(shí)間延長、不能透膜等多種缺陷。因此，開發(fā)用于免疫輔助治療的小分子藥物變得重要。近日，藥物化學(xué)1區(qū)雜志EuropeanJournalofMedicinalChemistry在線發(fā)表浙江大學(xué)董曉武教授課題組的一篇有關(guān)小分子免疫療法的綜述，文章對(duì)九類重要的腫瘤相關(guān)的免疫治療靶點(diǎn)及小分子抑制劑/激動(dòng)劑進(jìn)行總結(jié)。圖1文章介紹的九類腫瘤免疫靶點(diǎn)

如何快速測(cè)量細(xì)胞劃痕寬度？2021/12/22: 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)可謂是性價(jià)比高的一個(gè)小實(shí)驗(yàn)了?？梢栽诓活~外購買實(shí)驗(yàn)設(shè)備的情況下，一定程度地評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞的遷移能力。在課題組經(jīng)費(fèi)的限制下，這個(gè)實(shí)驗(yàn)成為很多老板的*。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)本身的操作很簡(jiǎn)單，網(wǎng)上有很多教程，此處不贅述。當(dāng)你辛辛苦苦拿到了下面這張照片時(shí)，說明你已經(jīng)成功了一大半。接下來的工作就是測(cè)量，本文將以此為例，寫出測(cè)量的圖文教程。1.下載并安裝ImageProPlus。2.點(diǎn)擊File→Open，打開你需要測(cè)量的圖片。3.增強(qiáng)細(xì)胞劃痕邊界的信號(hào)，以提高IPP識(shí)別準(zhǔn)確度。點(diǎn)擊Proc

細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十三）2021/12/22: 細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦系列，由于之前小編都在收集一些大家實(shí)驗(yàn)室中常遇到的問題并解答，現(xiàn)在和大家分享下最新的一期，希望這些真實(shí)案例可以真切的幫助到童鞋們?cè)诩?xì)胞實(shí)驗(yàn)中少走彎路和解決問題，話不多說，以下上“正片”~61、問：如果酵母感染，用75%乙醇洗一遍超靜臺(tái)，再紫外照射，請(qǐng)問有用嗎？答：有用，但別用紫外照細(xì)胞噢。62、▲問：以上三個(gè)圖片是細(xì)胞用病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)完就成這樣了，而且長得特別慢，這是染菌了嗎？細(xì)胞狀態(tài)不太好了，長得也慢，用提高血清的濃度嗎？答：這個(gè)不是污染，這應(yīng)該是細(xì)胞轉(zhuǎn)染前狀態(tài)不好導(dǎo)致的。63、

從M13噬菌體模板合成固定長度的單鏈DNA探針2021/12/21: 材料與儀器大腸桿菌DNA聚合酶IKlenow片段限制性內(nèi)切核酸酶模板DNA寡核苷酸引物乙酸銨DTTEDTA乙醇NaCl酚氯仿TBE電泳緩沖液Tris-ClKlenow基礎(chǔ)緩沖液dNTP溶液變性聚丙烯酰胺凝膠或堿性瓊脂糖凝膠黏性貼片或磷光黏性貼片SephadexG-50離心柱水浴或加熱塊步驟一、材料1.緩沖液和溶液乙酸銨（10mol/L）DTT(1mol/L)EDTA(0.5mol/L，pH8.0)乙醇NaCl(5mol/L)酚：氯仿（1:1,V/V)5XTBE電泳緩沖液Tris-Cl(1mol/

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