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神奇的生物素biotin2024/03/27

1.什么是生物素？物素分子量為244.31，分子中有兩個環(huán)狀結(jié)構(gòu)，其中I環(huán)為咪唑酮環(huán)，是與親合素結(jié)合的主要部位；II環(huán)為噻唑環(huán)，上有一戊酸側(cè)鏈，其末端羧基是結(jié)合抗體和其他生物大分子的結(jié)構(gòu)。利用生物素的羧基加以化學修飾可制成各種活性基團的衍生物，稱為活化生物素，同時可根據(jù)特殊的用途對這些試劑的化學性質(zhì)（溶解性、臂長、可剪切與否）進行優(yōu)化，以適合與各種生物大分子結(jié)合的需要。生物素2.什么是生物素化？生物素化是指將化學物質(zhì)或分子與生物素（biotin）結(jié)合在一起的過程。生物素是一種水溶性的維生素，也被

克隆形成實驗的原理及實驗步驟2024/03/27

一、背景介紹克隆形成實驗是研究細胞存活率并探討單個細胞增殖潛能的有效方法之一。即在體外培養(yǎng)環(huán)境下，通過使單個細胞經(jīng)過連續(xù)分裂增殖至少6代，形成的細胞集群被稱為克隆或集落。每個克隆的尺寸通常在0.3-1.0mm之間，含有50個以上的細胞。通過計算克隆形成率，能夠?qū)蝹€細胞的增殖潛力進行量化分析。用途：（1）評估細胞增殖能力：克隆形成實驗可以幫助研究人員評估細胞的增殖潛力。通過觀察和計數(shù)形成的獨立克隆，可以了解細胞在體外環(huán)境中的增殖速率和能力。(2)研究細胞群體依賴性：克隆形成實驗有助于了解細胞的群

TRIzol提取細胞RNA的經(jīng)驗分享2024/03/26

一、TRIzol法提取RNA的原理Trizol是一種廣泛適用于多種樣品總RNA提取的試劑，例如人、動物、植物和細菌、血液等。一般提取的總RNA沒有DNA和蛋白質(zhì)污染，常用于RT-qPCR、mRNA純化等實驗。廣譜型Trizol含有異硫氰酸胍/酚，具有裂解能力，可在短時間內(nèi)裂解細胞和組織樣本并有效抑制RNase酶活性從而保證RNA的完整性。其原理是Trizol中異硫氰酸胍、苯酚等不可逆地使蛋白質(zhì)和RNase變性。隨后進行離心。在酸性條件下，總RNA保留在上層水相中，而大部分DNA和蛋白質(zhì)保留在中間

5種趨化性實驗的不同方法2024/03/26

趨化性是細胞響應化學信號而進行的精心安排的運動，是生物學中的一種基本現(xiàn)象，具有深遠的影響。不同領(lǐng)域的研究人員利用這一過程來探索細胞行為、免疫反應和發(fā)育機制。在癌癥研究中，趨化性揭示了細胞如何駕馭其環(huán)境，從而促進腫瘤的進展和轉(zhuǎn)移。在免疫學中，趨化性引導免疫細胞到達感染部位。除了基礎(chǔ)研究之外，了解這種現(xiàn)象還可以應用于醫(yī)學和生物技術(shù)。在本文中我們將探討研究文章，重點介紹研究趨化性的不同方法。這些研究側(cè)重于實時可視化，提供對細胞反應的動態(tài)洞察。實時測量捕獲關(guān)鍵事件和動力學，與終點方法相比，可以全面了解趨

二甲雙胍可以減肥2024/03/26

二甲雙胍通過誘導代謝物N-乳酰苯丙氨酸(Lac-Phe)的產(chǎn)生來發(fā)揮降低食欲和減肥的作用，這為新型減肥藥物的開發(fā)提供了新的見解。二甲雙胍是一種廣泛使用的抗糖尿病藥物。除了降糖作用外，許多臨床研究也證明了二甲雙胍可以減輕體重。全球有超過1.5億人服用二甲雙胍，來降低2型糖尿病(T2D)患者的血糖和體重。二甲雙胍對體重的影響似乎與食物攝入的抑制有關(guān)，而不是與營養(yǎng)吸收或能量消耗的變化有關(guān)。然而關(guān)于二甲雙胍介導食欲和抗肥胖作用的確切分子機制仍存在爭議。N-乳酰苯丙氨酸(Lac-Phe)是由肌肽二肽酶2(

GC-1 spg細胞的培養(yǎng)流程及注意事項2024/03/25

一、介紹小鼠精原細胞（GC-1spg）為貼壁細胞，細胞形態(tài)呈上皮細胞樣。二、主要耗材、儀器及試劑15ml離心管、50ml離心管、凍存管、巴氏滴管、培養(yǎng)瓶、封口膜、CO2培養(yǎng)箱、離心機、顯微鏡、生物安全柜、DMEM、胎牛血清（FBS）、PBS緩沖液、青-鏈霉素（雙抗）、胰蛋白酶、二甲基亞砜（DMSO）等等。三、培養(yǎng)流程1.細胞復蘇1)擦拭生物安全柜臺面，準備好所需耗材，紫外30min，打開37℃恒溫水浴箱預熱所用試劑；2)按照DMEM＋10%FBS＋1%P/S的比例配制血清培養(yǎng)基，吹打混勻后按10

什么是基因編輯技術(shù)？2024/03/22

一、前言每一個生命個體都是由無數(shù)精妙的生物分子共同組成的。而其中的DNA就像是生命的藍圖，DNA中的每一段特定序列，即我們所稱的基因，各自承擔著特定的生物學功能。它們共同調(diào)控著生物體的生長、發(fā)育、繁殖等一系列復雜的生命過程。然而，并非所有基因都是十全十美的，有時候，基因中的一點小小改變，就可能導致疾病的發(fā)生。但如果我們能夠像編輯文字一樣編輯這些基因，那我們就有可能修復這些錯誤，治療疾病，甚至創(chuàng)造出新的生命形式。這個想法并非遙不可及。在21世紀的今天，一種名為"基因編輯"的技術(shù)正在逐漸實現(xiàn)這個夢想

24條細胞培養(yǎng)經(jīng)驗2024/03/21

什么是細胞培養(yǎng)？細胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細胞培養(yǎng)都是一個非常重要的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)?？寺?。細胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術(shù)中十分重要的環(huán)節(jié)，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。細胞培養(yǎng)技

移液器的結(jié)構(gòu)和使用方法2024/03/21

移液槍是實驗室最經(jīng)常使用的儀器之一，是實驗室的基礎(chǔ)實驗儀器。移液槍多少會影響一些精密實驗的數(shù)據(jù)質(zhì)量，細節(jié)決定成敗，今天在這里跟大家普及一下移液槍的使用規(guī)程及注意事項，希望對大家以后的實驗有幫助。移液槍的結(jié)構(gòu)及使用前檢查移液槍在使用前，應進行使用前檢查：檢查刻度是否在最大值旋轉(zhuǎn)旋鈕，檢查讀數(shù)是否準確外觀是否干凈按動按鈕檢查是否順暢或者有噪音校對調(diào)整移液槍使分配的體積在一定的規(guī)格范圍內(nèi)移液槍的使用1.首先確定移液體積，選擇合適量程的移液槍移液槍吸頭一般分為白，黃，藍三種，其中0.1-2.5ul，0.

提高實驗和質(zhì)量的實用技巧2024/03/21

1.提高實驗的效率1）實驗前有計劃安排、預備方案或者“車輪戰(zhàn)”（細胞實驗）一般從基礎(chǔ)的培養(yǎng)細胞開始，開始實驗時，實驗方法一般來自于實驗室或者文獻中條件優(yōu)化以及自我推測及驗證，因此做實驗之前預想實驗方案有助于我們不至于“手忙腳亂”。以實驗前的細胞鋪板實驗為例：表1常用細胞培養(yǎng)體系：細胞鋪板的孔數(shù)一般取決于我們后期實驗的目的，實驗前了解各類細胞的鋪板數(shù)量以及培養(yǎng)基添加量都十分重要。以病毒或者細菌感染細胞模型來說，我們需要一個比較準確數(shù)量級的細胞數(shù)目和病毒或菌液濃度得后期實驗的MOI值，細胞計數(shù)和病毒

Western Blot全流程實驗步驟及常見問題詳解2024/03/21

一、原理蛋白質(zhì)免疫印跡法即WesternBlot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法，基本原理是經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體例如硝酸纖維素薄膜（NC膜）或PVDF膜上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。二、流程圖：(一)蛋白上清

吐溫20在WB中的作用是什么？2024/03/21

Westernblot實驗中常用的洗液TBST是一種實驗室配制液體，其配方大體相似，其中一種組成成分是Tween-20，它是一種黃色或琥珀色的透明油狀液體，有特殊的氣味和輕微的苦味。使用移液器吸取時會感覺到一種滯后感。Tween-20，也稱Polyethyleneglycolsorbitanmonolaurate，中文名為吐溫-20或吐溫20。為非離子型表面活性劑，大白話就是：它的作用就是洗掉非特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。其在Westernblot實驗里的作用原理如下：它可以通過降低溶液表面張力，使抗體

酵母雙雜交(Y2H)實驗操作指南2024/03/21

酵母雙雜交系統(tǒng)(Yeasttwohybrid，Y2H)常用于分析兩種蛋白質(zhì)的相互作用。將兩種蛋白質(zhì)分別克隆到酵母表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA-BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD）上，構(gòu)建成融合表達載體，從而分析兩種蛋白質(zhì)的相互作用。pGBKT7是酵母雙雜交bait表達載體，旨在表達GAL4DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA-BD,1-147aa）與bait蛋白質(zhì)的融合蛋白質(zhì)。pGADT7是酵母雙雜交表達載體，旨在表達GAL4激活結(jié)構(gòu)域（AD,768-881aa）與目的蛋白質(zhì)的融合蛋白質(zhì)。一、酵母

細胞培養(yǎng)過程中如何避免微生物污染？2024/03/20

細胞培養(yǎng)過程中常見的可造成污染的微生物包括細菌、真菌、支原體、酵母等，不論是哪種污染，均會造成細胞生長變慢、培養(yǎng)基渾濁、細胞變形等不利于細胞生長的現(xiàn)象，更有甚者可能會出現(xiàn)污染同細胞箱內(nèi)別的細胞的現(xiàn)象，因此，細胞培養(yǎng)過程中應樹立嚴格的無菌意識，盡量避免造成細胞污染。準備處理細胞前，有如下幾點注意事項：細胞培養(yǎng)應在細胞房內(nèi)進行，同時細胞房應保證環(huán)境狀況良好，空氣干燥。進入細胞房前應在緩沖間穿戴細胞房專用隔離衣、專用拖鞋，戴好一次性口罩及手套。3.細胞房應配置75%酒精噴壺，打開細胞培養(yǎng)箱前應使用75

雙硫死亡介紹2024/03/07

在介紹了凋亡、自噬、壞死、壞死性凋亡、焦亡、鐵死亡以及銅死亡這些細胞花式死法之后，我們的細胞死亡大盤點系列迎來了最終章-雙硫死亡。雙硫死亡的定義：雙硫死亡，是一種由過量胱氨酸積累引起的二硫化物應激（Disulfidestress）導致的新型細胞死亡類型。研究發(fā)現(xiàn)，葡萄糖匱乏誘導的SLC7A11高表達癌細胞的細胞死亡不屬于任何一種已知的細胞死亡類型。這種新的細胞死亡類型不能被一般用于抑制細胞死亡的藥物抑制，也不能通過敲除鐵死亡/細胞凋亡關(guān)鍵基因來阻止。而硫醇氧化劑（如二酰胺和馬來酸二乙酯）則可以顯

3D打印功能性人腦組織震撼問世2024/03/07

3D打印在過去聽起來像天方夜潭，但現(xiàn)在3D打印心臟支架，替代骨骼等已經(jīng)有了臨床上的應用，為我們帶來很多以前難以想象的驚喜。通常認為只有相對硬一些的材料可被3D打印出來，而大腦、肺等軟組織，很難通過3D打印技術(shù)獲得。是因為3D打印過程通常涉及逐層建造物體，下層需要能支撐不斷增長的結(jié)構(gòu)重量，打印非常柔軟的材料，容易出現(xiàn)底層材料崩塌問題。但是近年來，3D打印技術(shù)已經(jīng)開始逐漸應用到神經(jīng)外科的臨床工作中，并有了較為成功的嘗試，有望為神經(jīng)疾病研究帶來巨大挈機！2024年2月1日，來自美國威斯康星大學的研究人

通過腸道菌群、腦功能，撫平母愛剝奪創(chuàng)傷2024/03/06

幼兒早期的應激事件易導致成年后的精神心理問題，其病理機制在于這些應激會對處于發(fā)育關(guān)鍵期的下丘腦、垂體-腎上腺軸產(chǎn)生負反饋性損害。已有研究證實，「母愛剝奪」如幼年期遺棄、家庭分離會造成哺乳動物成年后焦慮、抑郁等相關(guān)情緒疾病。近年來，隨著腸道菌群與腦健康之間的腦-腸軸效應的研究逐步深入，發(fā)現(xiàn)益生菌可以通過調(diào)節(jié)腸道菌群改善腦健康，因此，能否應用益生菌改善「母愛剝奪」帶來的抑郁、焦慮受到科研界關(guān)注。1.益生菌可改善母體分離誘發(fā)的抑郁焦慮行為該研究建立母體分離（MS）動物模型：將新出生的雄性小鼠，從出生后

人血漿IgG分離、純化實驗2024/03/06

一、實驗原理IgG是免疫球蛋白的主要成分之一，也是動物和人體血漿的重要成分。血漿蛋白質(zhì)成分多而復雜，要從血漿中分離出IgG，首先要盡可能除去其他蛋白質(zhì)成分，使IgG在樣品中比例大為增高，然后再純化而獲得IgG。硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質(zhì)。用此方法可以將主要的免疫球從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質(zhì)溶液中可與蛋白質(zhì)競爭水分子，從而破壞蛋白質(zhì)表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出來。各種蛋白質(zhì)的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液來沉

高質(zhì)量睡眠有助大腦排毒；眼睛是保護大腦的關(guān)鍵2024/03/06

這個跳躍基因抹去了人類的尾巴，尾巴甚至作為動物的【第五只手】，幫助抓握樹枝和攫取食物，且有助于維持身體平衡。然而，人類和猿類的身體構(gòu)造卻缺乏尾巴這一部分。目前，促使人類和猿類尾巴丟失進化的遺傳機制不明。研究團隊分析比對了大量的靈長類基因組測序數(shù)據(jù)，用以尋找導致類人猿尾巴消失的關(guān)鍵基因，推斷類人猿的尾巴丟失大約發(fā)生在2,500萬年前。尾巴消失源于跳躍基因Alu元件引起的基因變化，同時證明了TBXTΔexon6轉(zhuǎn)錄本的存在可以導致小鼠的尾巴退化，更重要的是這一基因變化可能導致人類和猿類中更高風險的脊

實戰(zhàn)經(jīng)驗！盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)構(gòu)建小鼠膿毒癥2024/03/05

什么是膿毒癥？膿毒癥（Sepsis）是宿主對感染的反應失調(diào)而引起的危及生命的器官功能障礙。膿毒癥可以由任何部位的感染引起，是嚴重創(chuàng)傷、燒傷、休克、感染和外科大手術(shù)等常見的并發(fā)癥，病死率較高。目前針對膿毒癥的治療仍然沒有相應的特別效果的藥物。疾病模型的建立有助于人們更好地探討膿毒癥的發(fā)病機制和尋找有效的治療措施，獲得更早的診斷并采取干預措施，從而改善膿毒癥患者的預后。盲腸結(jié)扎穿孔模型是最臨近于人類膿毒癥機制的模型，被稱為膿毒癥模型的“金標準”。該模型通過結(jié)扎并穿孔盲腸，使混有多種細菌的腸內(nèi)容物持續(xù)