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2023
10-27

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題有哪些？
你知道細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞污染和感染的處理方法細(xì)菌污染：如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)物出現(xiàn)混濁或異味，可能存在細(xì)菌污染。立即停止細(xì)胞培養(yǎng)，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)器具進(jìn)行嚴(yán)格的消毒和清潔，更換新的細(xì)胞培養(yǎng)物和培養(yǎng)基。真菌污染：真菌污染常常表現(xiàn)為細(xì)胞培養(yǎng)物表面的白色或黑色斑點(diǎn)。細(xì)胞培養(yǎng)器具應(yīng)che底清潔，細(xì)胞培養(yǎng)物可以添加抗真菌劑來(lái)預(yù)防和處理。細(xì)胞病毒感染：如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)物出現(xiàn)明顯的細(xì)胞溶解和變形，可能存在細(xì)胞病毒感染?？墒褂每共u藥物來(lái)處理感染，并且進(jìn)行核酸檢測(cè)以確認(rèn)病毒類型。二、細(xì)
2023
10-26

什么是液體培養(yǎng)基？它的組分有哪些？
細(xì)胞培養(yǎng)，是人工創(chuàng)造與體內(nèi)生長(zhǎng)相似的環(huán)境，使細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。培養(yǎng)基是一切體外培養(yǎng)的基礎(chǔ)，為細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝活動(dòng)提供了各種必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)培養(yǎng)基的來(lái)源和組成成分，它的發(fā)展經(jīng)歷了三個(gè)階段，分別是天然培養(yǎng)基階段、合成培養(yǎng)基階段以及無(wú)血清培養(yǎng)基階段。那么你知道什么是液體培養(yǎng)基嗎？它的組分是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！在20世紀(jì)50年代，當(dāng)時(shí)體外培養(yǎng)普遍直接采用組織凝塊、生物性液體和組織提取液，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸液等，這就是天然培養(yǎng)基階段。由于天然培養(yǎng)基的使用會(huì)
2023
10-26

液體培養(yǎng)基的常見問(wèn)題有哪些？
液體培養(yǎng)基是最為常見的培養(yǎng)基類型，它具有可進(jìn)行通氣培養(yǎng)或振蕩培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樗牧鲃?dòng)性便于精確控制培養(yǎng)基的溶液溫度、營(yíng)養(yǎng)濃度和氣體含量等；它對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)的附著能力要求小，細(xì)胞可快速擴(kuò)增；當(dāng)需要大量細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)也更經(jīng)濟(jì)高效。那么你知道液體培養(yǎng)基的常見問(wèn)題有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、液體培養(yǎng)基為什么顏色不一樣酚紅加量不同，導(dǎo)致顏色差異：DMEM＞MEM＞DMEM/F12＞RPMI1640＞F12&F10。二、培養(yǎng)基放冰箱里顏色變深空氣中CO2濃度低，培養(yǎng)基內(nèi)CO2會(huì)逐漸溢出，HCO3-減少，造成
2023
10-25

你知道什么是瓊脂糖凝膠電泳嗎？
你知道什么是你知道什么是瓊脂糖凝膠電泳嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)核酸分子是兩性解離分子，在高于其等電點(diǎn)的電泳緩沖液中，其堿基不解離，而磷酸基團(tuán)全部解離，核酸分子因而帶負(fù)電荷，電泳時(shí)向正極遷移。瓊脂糖主要從海洋植物瓊脂中提取而來(lái)并經(jīng)糖基化修飾，為一種聚合鏈線性分子，使用瓊脂糖凝膠作為電泳支持介質(zhì)，發(fā)揮分子篩功能，使得大小和構(gòu)象不同的核酸分子的遷移率出現(xiàn)較大差異，從而達(dá)到分離的目的。因此，目前多用瓊脂糖為電泳支持物進(jìn)行平板電泳，其優(yōu)點(diǎn)如下。（1）瓊脂糖凝膠電泳操作簡(jiǎn)單，電泳速度快，
2023
10-25

瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的試驗(yàn)方法是什么？注意事項(xiàng)有什么？
你知道瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法是什么嗎？有什么注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)方法1.擇適合樣品預(yù)期片段大小的瓊脂糖凝膠濃度百分比。將瓊脂糖粉末與用于運(yùn)行凝膠的相同類型的緩沖液（TAE）結(jié)合起來(lái)，加熱使混合物融化，避免沸騰。2.選擇所需尺寸的凝膠澆注模具和梳子，為樣品和marker提供足夠數(shù)量的孔，以及容納每個(gè)待裝樣品數(shù)量的孔容量。3.膠凝固后，將凝膠放入電泳儀中，電泳液沒過(guò)凝膠，根據(jù)加入量的多少，決定混合多少ul的lodingbuffer，將樣液混合lodingbuf
2023
10-25

如何選擇DNA提取方法
DNA的提取可以簡(jiǎn)單的分為裂解和純化兩大步驟，裂解是破壞樣品細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而使樣品中的DNA游離在裂解體系中的過(guò)程，純化則是使DNA與裂解體系中的其它成分，如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)分離的過(guò)程。那么該如何選擇DNA提取方法呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、酚氯仿抽提法酚氯仿抽提是去除蛋白質(zhì)的有效手段，但如果蛋白質(zhì)含量超過(guò)了其飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)就不會(huì)被一次性去除，需要進(jìn)行多次反復(fù)抽提，而每次的抽提均會(huì)導(dǎo)致核酸的損失。酚氯仿抽提的優(yōu)勢(shì)是成本低廉，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求較低。二、高鹽沉淀法高鹽沉淀法是酚氯仿抽提方
2023
10-24

熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么？
熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性原位雜交技術(shù)。那么你知道熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.實(shí)驗(yàn)用具及材料（1）人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本；（2）指甲油、甲酰胺、氯化鈉、檸檬酸鈉、氫氧化鈉、吐溫20等；（3）恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱、染色缸、載玻片、Nikon
2023
10-24

蛋白表達(dá)的常見問(wèn)題有哪些？
蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)的時(shí)，有時(shí)候?qū)嶒?yàn)會(huì)覺得參考實(shí)驗(yàn)方法和克隆的蛋白基因序列wan全沒有問(wèn)題，但蛋白電泳就是沒有結(jié)果。下面讓我們一起來(lái)看看蛋白表達(dá)的常見問(wèn)題有哪些吧！1、載體構(gòu)建錯(cuò)誤，很多克隆新人經(jīng)常弄錯(cuò)讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其克隆位點(diǎn)常有一兩個(gè)堿基的區(qū)別；另外有些酶產(chǎn)生粘端有些酶產(chǎn)生平端，這些都容易導(dǎo)致讀碼框錯(cuò)誤，從而表達(dá)不出來(lái)。2、宿主菌選擇不當(dāng)，不同的宿主菌其基因型是不一樣的。有些經(jīng)過(guò)特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動(dòng)子的載體，必須選擇合適的宿主菌進(jìn)行表達(dá)。因此，
2023
10-23

PCR反應(yīng)體系主要是什么？
你知道PCR反應(yīng)體系主要包含那些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、模板（template)模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來(lái)源DNA(如基因組DNA、質(zhì)粒DNA等)或RNA（如總RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必須符合兩個(gè)條件：一是純度必須較高，二是濃度不能太高以免抑制。模板是待擴(kuò)增的目的基因或特異片段，如診斷病人是否攜帶有突變基因時(shí)，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR對(duì)模板DNA的純度不要求很高，但應(yīng)盡量不含有對(duì)PCR反應(yīng)有抑制作用的雜質(zhì)存在，如蛋白酶、核
2023
10-23

PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么？
你知道PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、PCR技術(shù)基本原理PCR是一種選擇性體外快速擴(kuò)增DNA片段的方法。在體外以類似于細(xì)胞內(nèi)DNA的半保留復(fù)制過(guò)程，以擬擴(kuò)增的模板DNA分子，與模板DNA互補(bǔ)的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應(yīng)體系，經(jīng)過(guò)重復(fù)地變性一退火一延伸三步，擴(kuò)增新的目的DNA鏈，這個(gè)過(guò)程通過(guò)控制反應(yīng)體系的溫度來(lái)實(shí)現(xiàn)。PCR包含下列三步反應(yīng)：1、變性(denaturation)將反應(yīng)體系混合物經(jīng)加熱至94℃左右，維持較短的時(shí)
2023
10-20

如何選擇免疫組化中的一抗？
免疫組化實(shí)驗(yàn)看似容易，但真想把結(jié)果做漂亮，還是需要花上很長(zhǎng)一段時(shí)間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。一味按照網(wǎng)上操作流程來(lái)做，結(jié)果往往并不理想，最終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。那么如何選擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中的一抗呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、單克隆和多克隆抗體的選擇存在于抗原表面的，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)稱為抗原決定簇，又稱抗原表位。一個(gè)抗原可以有一種或多種不同的抗原表位，每種表位只有一種抗原特異性。用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的抗體，就是多克隆抗體（poly
2023
10-20

細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么？
你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞計(jì)數(shù)將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計(jì)數(shù)；500g離心4min，去上清。二、制備單細(xì)胞懸液將收集的細(xì)胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復(fù)2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個(gè)細(xì)胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，400g離心5min去上清。三、固定每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。四、洗滌400g離心5min，去上清后加入2
2023
10-19

免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些？
免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)是一種使用熒光抗體或染料來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)靶抗原的技術(shù)。那么你知道免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞培養(yǎng)/固定很多抗原在離體組織中只存在很短時(shí)間，自溶（autolysis）和壞死（necrosis）使得抗原進(jìn)一步降解，組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)被破壞。樣品浸泡在合適的固定液中，固定液完quan滲透組織，使蛋白失去活性，并且使組織被保存、穩(wěn)定在接近invivo狀態(tài)。二、通透處理通透即為對(duì)細(xì)胞膜進(jìn)行打孔處理，使抗體能進(jìn)入到細(xì)胞中和抗原發(fā)生結(jié)合。通常，當(dāng)抗體檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)
2023
10-19

免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題有哪些？
免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IHC)是一種綜合定性、定位和定量；形態(tài)、機(jī)能和代謝密切結(jié)合為一體的研究和檢測(cè)技術(shù)。在原位檢測(cè)出病原的同時(shí)，還能觀察到組織病變與該病原的關(guān)系，確認(rèn)受染細(xì)胞類型，從而有助于了解疾病的發(fā)病機(jī)理和病理過(guò)程。那么你知道免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問(wèn)題有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、石蠟切片再染色過(guò)程出現(xiàn)脫片現(xiàn)象1.烤片時(shí)間不夠，或溫度不夠，可以延長(zhǎng)烤片時(shí)間和提高烤片溫度；2.用含有多聚賴氨酸的玻片，可以購(gòu)買到或這自己做；3.有些組織本身就容易掉片，如骨組織等
2023
10-18

二代測(cè)序（NGS）的原理
DNA測(cè)序技術(shù)一直是分子生物學(xué)相關(guān)研究中常用的技術(shù)手段之一，從一定程度上推動(dòng)了該領(lǐng)域的快速發(fā)展。每一代測(cè)序技術(shù)的更替都標(biāo)志著生物學(xué)中基因芯片、數(shù)據(jù)分析、表面化學(xué)、生物工程等技術(shù)領(lǐng)域有了新的突破，使測(cè)序向著高通量、低成本、高安全性和商業(yè)化的方向發(fā)展。那么二代測(cè)序(NGS)的原理是什么？讓我們一起來(lái)看看吧！第二代測(cè)序(NGS)又稱為高通量測(cè)序(High-throughputsequencing)，是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來(lái)的DNA測(cè)序技術(shù)。二代測(cè)序引入了可逆終止末端，從而實(shí)現(xiàn)邊合成邊測(cè)序。二代測(cè)
2023
10-18

支原體污染的檢測(cè)方法有哪些？
支原體污染一般在顯微鏡下不可見，很難察覺，但細(xì)胞會(huì)受到極大的損傷，主要通過(guò)以下途徑影響細(xì)胞生長(zhǎng)及功能。那么支原體污染的檢測(cè)方法有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、分離培養(yǎng)法檢測(cè)方法：將待檢樣品接種到適合支原體生長(zhǎng)的液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中，如有支原體污染，液體培養(yǎng)基顏色會(huì)改變，固體培養(yǎng)基將會(huì)有菌落生長(zhǎng)。優(yōu)點(diǎn)：該方法被稱為支原體培養(yǎng)法的金標(biāo)準(zhǔn)，可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體。缺點(diǎn)：支原體生長(zhǎng)到一定數(shù)量才能判斷是否有污染，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)支原體的快速檢測(cè)二、原位染色法檢測(cè)方法：通過(guò)染色試劑（如DAPI、
2023
10-18

細(xì)胞被支原體污染，該怎么辦？
支原體是目前為止發(fā)現(xiàn)的最小的原核生物，支原體污染一般在顯微鏡下不可見，很難察覺，但細(xì)胞會(huì)受到極大的損傷，主要通過(guò)以下途徑影響細(xì)胞生長(zhǎng)及功能。那么細(xì)胞被支原體污染，該怎么辦呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、支原體污染的來(lái)源1.環(huán)境污染：如細(xì)胞培養(yǎng)房、細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)內(nèi)已被支原體污染；2.實(shí)驗(yàn)器材的污染：移液槍、移液管、細(xì)胞培養(yǎng)皿、水浴鍋等；3.細(xì)胞培養(yǎng)試劑的污染：培養(yǎng)基、胰酶、血清、細(xì)胞凍存液等；二、處理方法1.及時(shí)更換培養(yǎng)液：可以減緩支原體的污染，但不能wan全清除；2.使用抗生素類去除試劑：抗
2023
10-18

夾心法與競(jìng)爭(zhēng)法的ELISA檢測(cè)原理是什么？
ELISA的原理是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。那么你知道夾心法與競(jìng)爭(zhēng)法的ELISA檢測(cè)原理是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、夾心法原理夾心法使用的是兩個(gè)抗體夾抗原或者兩個(gè)抗原夾抗體的方法，這種復(fù)合物被稱之為三明治夾心結(jié)構(gòu)，利用一對(duì)配對(duì)wan全的抗體，可以特異性檢測(cè)抗原，當(dāng)然主要針對(duì)的是具有至少2個(gè)以上抗原表位的抗原，抗體的配對(duì)可是門技術(shù)活，很多公司可以生產(chǎn)抗體，但是
2023
10-18

直接法與間接法的ELISA檢測(cè)原理是什么？
在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。那么你知道直接法與間接法的ELISA檢測(cè)原理是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、直接法原理直接法是利用包被抗原，檢測(cè)抗體或者進(jìn)行重組蛋白的活性驗(yàn)證，利用蛋白與板材（即微孔板底）通過(guò)疏水鍵、流水/離子鍵的被動(dòng)吸附,通過(guò)引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價(jià)結(jié)合，以及通過(guò)表面改性后的親水鍵結(jié)合等等，當(dāng)然也有利用親和素預(yù)包被的板材，通過(guò)親和素與生物素的共價(jià)
2023
10-17

細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死的不同點(diǎn)有哪些？
你知道細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死的不同點(diǎn)有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、定義細(xì)胞凋亡：細(xì)胞凋亡是一種正常的基因程序性細(xì)胞死亡，其中衰老細(xì)胞在其生命周期結(jié)束時(shí)收縮，其剩余片段被吞噬而沒有任何炎癥反應(yīng)。細(xì)胞壞死：壞死是由于存在外部因素（如真菌或細(xì)菌毒素）而產(chǎn)生的信號(hào)導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)早死亡。二、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡：當(dāng)細(xì)胞發(fā)出DNA損傷或促凋亡和抗凋亡蛋白失衡的信號(hào)時(shí)，它就會(huì)被誘導(dǎo)。細(xì)胞壞死：它是由感染、外傷和毒素等外部存在因素引起的。三、形態(tài)變化細(xì)胞凋亡：可能會(huì)發(fā)生膜出血，但會(huì)保持膜的完整性。細(xì)胞壞死：細(xì)胞最終會(huì)失去其

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