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2023
10-08

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)有哪些？
你知道原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染的注意事項(xiàng)有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！1.選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑原代細(xì)胞對(duì)不同的轉(zhuǎn)染試劑有不同的敏感性和穩(wěn)定性。因此，在選擇轉(zhuǎn)染試劑時(shí)，需要根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行篩選。2.優(yōu)化細(xì)胞密度不同的原代細(xì)胞對(duì)細(xì)胞密度的要求不同，過(guò)低或過(guò)高的細(xì)胞密度可能會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率。因此，在轉(zhuǎn)染前需要通過(guò)培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)條件等因素來(lái)優(yōu)化細(xì)胞密度。3.使用合適的載體選擇合適的載體可以提高轉(zhuǎn)染效率和穩(wěn)定性。常用的載體包括質(zhì)粒、病毒和RNA。4.優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件可以提高轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì)胞毒性。常用的
2023
10-08

影響免疫組化（IHC）實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些？
免疫組化技術(shù)是利用已知的特異性抗體或抗原能特異性結(jié)合的特點(diǎn)，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑通過(guò)借助顯微鏡的觀察，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的一門組化技術(shù)。那么影響免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、組織的固定組織固定的好壞直接影響免疫組化的結(jié)果，選擇良好的固定液并及時(shí)充分的固定可以防止組織自溶，最大限度保留組織的抗原性，保證免疫組化結(jié)果的準(zhǔn)確性。常用固定液：10%的中性緩沖福爾馬林（40%甲醛10ml+0.01mol/LPBS90ml(pH7.4
2023
10-08

影響免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些？
免疫熒光染色技術(shù)是一種以免疫學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合生物化學(xué)技術(shù)和顯微技術(shù)發(fā)展而來(lái)的蛋白等分子檢測(cè)技術(shù)。那么你知道影響免疫熒光（IF）實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、免疫熒光染色方法的選擇免疫熒光染色技術(shù)分為直接法和間接法。直接法：將熒光標(biāo)記物偶聯(lián)在抗原/抗體上，直接與相應(yīng)的抗體/抗原反應(yīng)。間接法：先用未標(biāo)記的一抗與抗原充分反應(yīng)后，再利用熒光標(biāo)記的二抗與已經(jīng)結(jié)合在抗原上的一抗結(jié)合，達(dá)到檢測(cè)抗原的目的。優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)直接法操作簡(jiǎn)單、特異性高，非特異性染色少便于相同宿主來(lái)源的不同蛋白的共定位靈敏性相
2023
10-08

影響ELISA結(jié)果的因素有哪些？
ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是目前臨床上zui常用的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法，由于其試劑穩(wěn)定，易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀，既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)，又可用于少量標(biāo)本的檢測(cè)，既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析，目前已廣泛用于微生物學(xué)、寄生蟲(chóng)學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子檢測(cè)等領(lǐng)域。那么你知道影響ELISA結(jié)果的因素有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、樣品樣品是檢測(cè)的前提，樣品質(zhì)量會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果?？梢杂肊LISA來(lái)檢測(cè)的樣品很多，根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目不同可以是血清、血漿、唾液、尿液等，但大部分還是以血清為樣品。作為血清樣品，
2023
10-07

RNA提取的注意事項(xiàng)有哪些？
RNA是目前發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)生物功能zui豐富多樣的生物大分子，同時(shí)是DNA與蛋白質(zhì)信息傳遞的橋梁，因此完整RNA的提取和純化是功能基因組時(shí)代的重要手段。那么你知道RNA提取的注意事項(xiàng)都有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、如何保存提取出的RNA？提取后溶解于RNase-freeWater中，RNA樣品建議立即進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)，如需儲(chǔ)存，建議分裝保存于-80℃。避免多次取用樣品，反復(fù)凍融。二、為什么提取的RNA有降解？1.使用的組織材料不新鮮。提取RNA應(yīng)采用新鮮的組織材料，或?qū)⑿迈r組織材料用液氮迅凍后置于-
2023
10-07

你知道PCR檢測(cè)技術(shù)的分類嗎？
分子診斷技術(shù)是指以DNA和RNA為診斷材料，用分子生物學(xué)技術(shù)通過(guò)檢測(cè)基因的存在、缺陷或表達(dá)異常，從而對(duì)人體狀態(tài)和疾病作出診斷的技術(shù)。其基本原理是檢測(cè)DNA或RNA的結(jié)構(gòu)是否變化、量的多少及表達(dá)功能是否異常，以確定受檢者有無(wú)基因水平的異常變化，對(duì)疾病的預(yù)防、預(yù)測(cè)、診斷、治療具有重要意義。那么你知道PCR檢測(cè)技術(shù)的分類嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！PCR技術(shù)是一種用于擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，基本原理是在反應(yīng)室中模擬細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制，即人為創(chuàng)造核酸半保留復(fù)制條件，使目的DNA在細(xì)胞外完成擴(kuò)增的
2023
10-07

內(nèi)切酶實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)有哪些？
你知道內(nèi)切酶實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)有哪些嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、限制性內(nèi)切酶一般反應(yīng)條件當(dāng)進(jìn)行限制性酶切反應(yīng)時(shí)，為確保最佳的反應(yīng)條件，務(wù)必要遵守限制性內(nèi)切酶供應(yīng)商提供的建議。在此過(guò)程中需要考慮的重要參數(shù)包括：底物(DNA)和酶的量、反應(yīng)體積以及孵育時(shí)間。根據(jù)傳統(tǒng)的定義，在最佳反應(yīng)條件下，一個(gè)單位的限制性內(nèi)切酶可以在1小時(shí)內(nèi)，在50μL體系中wan全酶切1μL定義底物（例如，質(zhì)粒pUC19）。盡管單位定義提供了一種測(cè)定方式，但還需注意，根據(jù)DNA底物之中的識(shí)別序列出現(xiàn)的頻率及所用底物類型，針對(duì)不同DN
2023
10-07

熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)的原理是什么？
熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性原位雜交技術(shù)。目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究待許多領(lǐng)域。那么你知道熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)的原理是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一
2023
10-07

你知道熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)的方法與步驟是什么嗎？
熒光原位雜交是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，目前這項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體精細(xì)結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究待許多領(lǐng)域。那么你知道熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)的方法與步驟是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、探針變性將探針在75℃恒溫水浴中溫育5min，立即置0℃，5～10min，使雙鏈DNA探針變性。二、標(biāo)本變性（1）將制備好的染色體玻片標(biāo)本于50℃培養(yǎng)箱中烤片2～3h。（經(jīng)Giemsa染色的標(biāo)本需預(yù)先在固定液中退色后再烤片）。（2）取出玻片標(biāo)本，
2023
09-28

細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中需要注意什么？
隨著基因和蛋白功能的深入研究，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為科研實(shí)驗(yàn)中最chang用的技術(shù)手段之一。那么在細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程中需要注意什么呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、轉(zhuǎn)染試劑不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過(guò)這些資料可選擇最shi合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法，但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不
2023
09-28

細(xì)胞轉(zhuǎn)染是如何分類的？
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源性基因?qū)氲郊?xì)胞內(nèi)的技術(shù)。那你知道細(xì)胞轉(zhuǎn)染是如何分類的嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、根據(jù)導(dǎo)入時(shí)間長(zhǎng)短進(jìn)行分類根據(jù)導(dǎo)入的核酸存在于宿主細(xì)胞的時(shí)間長(zhǎng)短，可以分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（transienttransfection）：指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過(guò)某種方式導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細(xì)胞自身的基因組上。細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的外源基因表達(dá)時(shí)間有限，通常僅持續(xù)幾天，直到外源基因在細(xì)胞分裂過(guò)程中因各種因素丟失為止。多用于啟動(dòng)子和其他調(diào)控元件的分析。目前，由于各種轉(zhuǎn)染試
2023
09-25

PCR管是進(jìn)行PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)的重要器材
PCR管是PCR反應(yīng)的重要實(shí)驗(yàn)器材，關(guān)乎反應(yīng)體系的整體功效。它主要有以下幾個(gè)特點(diǎn)：1.需要具備高熱穩(wěn)定性。PCR反應(yīng)過(guò)程中，3步中的第一步變性需要高溫，傳統(tǒng)PCR管都是由堅(jiān)硬的塑料材料制成，能夠承受高溫的影響，不會(huì)變形或燒融?，F(xiàn)在還有一種新型PCR管，叫做光學(xué)透明PCR管，也具備了一定的熱穩(wěn)定性。2.內(nèi)表面需要具備良好的附著性。這是因?yàn)镻CR反應(yīng)的三個(gè)步驟需要發(fā)生在管內(nèi)，每個(gè)步驟對(duì)于成功的PCR反應(yīng)都是至關(guān)重要的。PCR管內(nèi)表面需要特殊處理，表面要光滑而均勻，以保持雜質(zhì)相對(duì)較低。3.其尺寸需要與
2023
09-20

細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)與策略有什么?
細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)與策略是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞大規(guī)模增殖的關(guān)鍵步驟，可以根據(jù)細(xì)胞類型、擴(kuò)增需求和實(shí)際情況選擇不同的技術(shù)和策略。那么你知道細(xì)胞擴(kuò)增技術(shù)與策略有什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧！一、傳代培養(yǎng)：1.間歇性傳代：將細(xì)胞從培養(yǎng)器具（如細(xì)胞瓶或培養(yǎng)皿）中解離并移植到新的培養(yǎng)器具中，以分離細(xì)胞，控制細(xì)胞密度和細(xì)胞增殖速率。2.連續(xù)傳代：利用旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)器具（如旋轉(zhuǎn)壺、旋轉(zhuǎn)筒）或生物反應(yīng)器等，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的持續(xù)增殖。連續(xù)傳代可以減少人工處理和移植對(duì)細(xì)胞的傷害，提高細(xì)胞擴(kuò)增效率。二、懸浮培養(yǎng)：1.攪拌培養(yǎng)：通過(guò)攪拌裝置將培養(yǎng)器
2023
09-19

PCR管的維護(hù)保養(yǎng)方法
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是基因工程中常用的一種分子生物學(xué)技術(shù)，PCR管通過(guò)模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過(guò)程快速合成特定DNA片段。其原理基于DNA的復(fù)制過(guò)程，包括三個(gè)步驟：變性、退火和延伸。變性(Denaturation)階段，反應(yīng)體系中的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)在高溫(通常為94°C-98°C)下被分離成兩條單鏈DNA。這一步是通過(guò)加熱使兩條DNA鏈斷裂，目的是將DNA的雙鏈結(jié)構(gòu)變?yōu)閱捂溄Y(jié)構(gòu)以提供模板。退火(Annealing)階段，溫度被降低至50°C-65°C，此時(shí)引物(Primers)能夠與目標(biāo)DNA序列的
2023
09-18

如何正確保存抗體？
抗體保存的是否得當(dāng)，直接決定了抗體的活性和使用效果，那么我們?cè)撊绾握_保存抗體呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、保存溫度和條件很多抗體的最佳保存條件是分裝成小包裝凍存于-20°C或-80°C。分裝能使凍融引起的損失減到最小，同時(shí)可避免多次在一個(gè)管內(nèi)取樣而由槍頭引入的污染。分裝凍存的抗體，融解一次后剩余抗體應(yīng)保存于4°C。收到抗體后，應(yīng)10,000xg離心20秒，使管口螺紋內(nèi)的抗體溶液全部離心至管底，用低蛋白吸附性的微量離心管分裝。分裝量的多少取決于每次試驗(yàn)的使用量。分裝量不能少于10μl；分裝量越少，
2023
09-18

qPCR實(shí)驗(yàn)的Ct值有什么作用？
qPCR擴(kuò)增過(guò)程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)的所對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（CycleThreshold）。C代表Cycle，T代表Threshold。簡(jiǎn)單講，Ct值就是qPCR中起始模板擴(kuò)增達(dá)到一定產(chǎn)物量時(shí)，所對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)。那么你知道qPCR實(shí)驗(yàn)中的Ct值有什么作用嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、指數(shù)擴(kuò)增、模板量與Ct值的關(guān)系理想情況下，qPCR中的基因經(jīng)過(guò)一定的循環(huán)數(shù)被指數(shù)擴(kuò)增而積累，擴(kuò)增循環(huán)數(shù)和產(chǎn)物量之間的關(guān)系是：擴(kuò)增產(chǎn)物量=起始模板量×（1+En）循環(huán)個(gè)數(shù)。然而qPCR反應(yīng)并不是一直處于
2023
09-14

病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)有何注意事項(xiàng)？
病毒轉(zhuǎn)染是指將外源病毒導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)，用病毒將帶有目的基因的載體整合到細(xì)胞的基因組中，以達(dá)到長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)目的基因的目的。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。那么病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)有何注意事項(xiàng)呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、病毒安全性問(wèn)題病毒本身具有一定的危險(xiǎn)性，需要在符合生物安全實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并遵守相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)范。病毒操作時(shí)最好使用生物安全柜。如果使用普通超凈工作臺(tái)操作病毒，請(qǐng)不要打開(kāi)排風(fēng)扇。病毒操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，帶口罩和
2023
09-14

如何提高電轉(zhuǎn)效率？
電轉(zhuǎn)，也稱電穿孔法，是通過(guò)脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA、mRNA等）導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi)，來(lái)改變細(xì)胞的特性，從而達(dá)到改造細(xì)胞的目的，是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究的重要工具。那么該如何提高電轉(zhuǎn)效率呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、細(xì)胞收集時(shí)：1)在消化貼壁細(xì)胞時(shí)，一定要注意終止胰酶反應(yīng)，防止過(guò)度消化；最好使用專業(yè)的胰酶中和劑；2)在進(jìn)行細(xì)胞離心時(shí)，使用低轉(zhuǎn)速長(zhǎng)時(shí)間離心，提升細(xì)胞的存活率；3)選擇合適狀態(tài)的細(xì)胞，一般原代細(xì)胞可以傳1-2次后使用；盡量挑選迭代次數(shù)少的細(xì)胞，如果是凍存細(xì)
2023
09-13

貼壁細(xì)胞培養(yǎng)和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)別是什么？
細(xì)胞培養(yǎng)有兩種基本方式，一種是人工基質(zhì)上的單層細(xì)胞（貼壁培養(yǎng)），另一種是在培養(yǎng)基中自由漂浮（懸浮培養(yǎng)）。那么你知道貼壁細(xì)胞培養(yǎng)和懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)別是什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！來(lái)自脊椎動(dòng)物的大多數(shù)細(xì)胞，除了造血細(xì)胞系和少數(shù)其他細(xì)胞系，都是貼壁依賴性的，必須在經(jīng)過(guò)專門處理以允許細(xì)胞粘附和擴(kuò)散的合適基質(zhì)上培養(yǎng)。然而，許多細(xì)胞系也適用于懸浮培養(yǎng)。同樣，大多數(shù)市售昆蟲(chóng)細(xì)胞系在貼壁培養(yǎng)或懸浮培養(yǎng)中生長(zhǎng)良好。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞可以保存在未經(jīng)組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)瓶中，但隨著培養(yǎng)體積與表面積的增加，充分的氣體交換會(huì)受
2023
09-13

什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞生長(zhǎng)曲線？
你知道什么是原代細(xì)胞培養(yǎng)，和細(xì)胞生長(zhǎng)曲線嗎？，讓我們一起來(lái)看看吧！一、原代細(xì)胞培養(yǎng)原代培養(yǎng)是指由體內(nèi)取出組織或細(xì)胞進(jìn)行的首ci培養(yǎng)，也叫初代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)離體時(shí)間短，遺傳性狀和體內(nèi)細(xì)胞相似，適于做細(xì)胞形態(tài)、功能和分化等研究。較為嚴(yán)格地說(shuō)是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時(shí)的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上，通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。最chang用的原代培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細(xì)胞培養(yǎng)。二、細(xì)胞生長(zhǎng)曲線細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是測(cè)定細(xì)胞絕對(duì)生長(zhǎng)數(shù)的常用方

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