細胞自噬檢測試劑盒   BB-48131-1

細胞自噬檢測試劑盒 ：

使用限制： 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

產(chǎn)品更新： 貝博會更新或升級產(chǎn)品，以優(yōu)化和增強其使用性能，產(chǎn)品說明書會進行相應的版本更新。使用產(chǎn)品時，請參照隨產(chǎn)品附帶的說明書，不要參照網(wǎng)上下載的說明書，可能是不同的版本。

           需要電子版說明書時可以在收到產(chǎn)品后發(fā)郵件索取。

使用安全： 使用時需要合適的實驗室外套，一次性手套。避免皮膚或粘膜與試劑接觸。如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

質(zhì)量控制： 貝博對每批產(chǎn)品進行嚴格測試以確保產(chǎn)品質(zhì)量*。

知識產(chǎn)權： 貝博^TM BBcellProbe^TM系列試劑盒及其使用方法包含專有技術。

注意事項：

• 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
• 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
• 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。
• 使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
• 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

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產(chǎn)品技術問題可發(fā)郵件至bestbio咨詢。

如果您有任何關于產(chǎn)品性能或者新應用和技術的建議，歡迎您隨時。

產(chǎn)品簡介：

自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質(zhì)或細胞器，zui終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細胞質(zhì)、長壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、病毒和細菌等。自噬是溶酶體介導的胞內(nèi)降解途徑，是真核細胞在惡劣環(huán)境（比如營養(yǎng)缺乏）威脅時引發(fā)的降解和細胞內(nèi)容物再循環(huán)的過程。這一途徑在對各種應激條件進行應答從而在促進細胞內(nèi)環(huán)境平衡、能量平衡和細胞存活上具有重要的作用，更多的證據(jù)表明自噬功能與多種疾病密切相關，包括癌癥、神經(jīng)退行性疾病、糖尿病、自身免疫性疾病和心血管疾病。

貝博^TM BBcellProbe^TM 細胞自噬檢測試劑盒是采用MDC染色法染色細胞內(nèi)自噬體的檢測試劑盒，該產(chǎn)品可代替?zhèn)鹘y(tǒng)LC3-GFP法，通過熒光示蹤物來選擇性檢測自噬通路中的各種囊泡包括自噬前體、自噬體和自溶酶體，用于流式細胞儀，無需轉(zhuǎn)染，就能在熒光顯微鏡下跟蹤活細胞的自噬過程進行定量分析，或用流式細胞儀進行高通量篩選，甚至能標記原代細胞。并且該產(chǎn)品可以進行自噬通路的動力學分析，為研究者展現(xiàn)自噬體形成和消除之間的動態(tài)平衡。

貝博^TM BBcellProbe^TM 細胞自噬檢測試劑盒中的BBcellProbe^TM MDC自噬體染色探針為綠色熒光標記的自噬體探針，具有335nm / 518nm的zui大激發(fā)/發(fā)射波長。

貝博還可以為您各種BBcellProbe^TM N系列、M系列、E系列、G系列和BBcellProbe^TM L系列細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒，以及鈣離子、鈉離子、神經(jīng)細胞等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點：

• 無需轉(zhuǎn)染，可在活細胞內(nèi)定量檢測細胞自噬情況，可在活細胞內(nèi)定量檢測自噬小泡和監(jiān)控活細胞自噬流（自噬體的合成、自噬底物到溶酶體的運輸、自噬底物在溶酶體的降解過程）；
• 適用于流式細胞檢測和顯微鏡分析；
• 可用于高通量篩選自噬的激活劑和抑制劑；
• 可選擇性地對前自噬體、自噬體和自噬性溶酶體進行染色，而對溶酶體染色較少。

試劑盒以外自備試劑和儀器

● PBS         ● 離心機

● 熒光顯微鏡/激光共聚焦顯微鏡/熒光酶標儀等

使用方法：

使用注意事項：

• MDC染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
• 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。
• 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
• 標記的條件因細胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實際染色結(jié)果做相應調(diào)整，在每次實驗前，請先根據(jù)不同的實驗要求、細胞類型、細胞的膜通透性等進行優(yōu)化，確定*條件。以下方法僅供參考。
• 染色后立即進行分析。

1. 染色工作液配制：

根據(jù)樣本數(shù)量，用檢測緩沖液將MDC熒光染料10倍稀釋，再用相應的培養(yǎng)基或者HBSS緩沖液40-200倍稀釋，配制成染色工作液。

【注】:

• 也可以直接用相應的培養(yǎng)基或HBSS等緩沖液稀釋MDC染料至所需濃度。
• 建議收到產(chǎn)品后，根據(jù)單次使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩(wěn)定。開始實驗前，使用培養(yǎng)基或HBSS緩沖液稀釋儲存液到需要的工作濃度。工作濃度為根據(jù)不同細胞的預實驗結(jié)果確定的*工作濃度，一般染色終濃度400-2000倍稀釋。
• 工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。
• 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

1. 細胞染色

2.1 對于貼壁細胞

1）將細胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上，加入合適培養(yǎng)基，使其爬片生長。

2）待細胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液，加入適量37℃預熱的含MDC探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育15分鐘-1小時（具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定）。

3）利用新鮮培養(yǎng)基或PBS替換上述染色液并在熒光顯微鏡（含合適濾片）下觀察。

【注】:

• 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

2.2 對于懸浮細胞

1）離心，吸除上清。

2）利用37℃預熱的探針工作液重懸細胞，于生長狀態(tài)下孵育15分鐘～1小時（具體時間需根據(jù)細胞類型而定）。

3）離心，吸除染色液，加入新鮮培養(yǎng)液或PBS重懸細胞。

4）置于熒光鏡下觀察或流式檢測。

【注】:

• 對于懸浮細胞，也可將細胞貼附于經(jīng)細胞粘合劑處理過的蓋玻片上，然后使用類似于貼壁細胞的方法進行染色。
• 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。

3、觀察結(jié)果：

在熒光顯微鏡（含合適濾片）/酶標儀/流式細胞儀下觀察細胞。

zui大激發(fā)/發(fā)射波長為335/518 nm。

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