Edman降解測序：一種可靠的N端蛋白分析方法檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

引言：jīngzhǔn識別N端序列，為蛋白研究打下基礎(chǔ)

在dànbáizhì研究中，氨基酸序列的jīngquè鑒定是理解其功能與結(jié)構(gòu)的dìyī步。雖然現(xiàn)代質(zhì)譜技術(shù)已在dànbáizhì組學領(lǐng)域大放異彩，但在某些特定場景下，一種經(jīng)典的序列分析方法依然bùkěhuòquē——Edman降解（Edman degradation）。這種以化學方式從N-端逐步解析dànbáizhì序列的技術(shù)，因其高特異性和準確度，至今仍廣泛應(yīng)用于蛋白表達驗證、N端修飾檢測、質(zhì)量控制等多個關(guān)鍵領(lǐng)域。作為dànbáizhì測序服務(wù)的重要組成部分，Edman降解為科研人員提供了一種低偏差、高保真度的Nduāncèxù手段。在百泰派克生物科技，我們結(jié)合自動化Edman測序平臺與高質(zhì)量純化流程，為客戶提供jīngzhǔn可靠的N端序列解析解決方案，助力基礎(chǔ)研究與生物制藥開發(fā)。

一、什么是Edman降解？

Edman降解是一種基于化學反應(yīng)的順序性Nduāncèxù方法，由Pehr Edman于1950年提出。其核心原理在于使用苯異硫氰酸（PITC）與dànbáizhìN端的游離氨基反應(yīng)，形成一種可切割的衍生物，隨后經(jīng)酸水解釋放出dìyī個氨基酸殘基并進行鑒定。此過程可在保留剩余肽鏈完整性的前提下循環(huán)進行，從而一步步解碼dànbáizhì的N端序列。

Edman反應(yīng)的三步核心流程：

1、PITC標記：在堿性條件下，PITC與肽鏈N端氨基結(jié)合，形成苯異硫氰酸酰胺。

2、酸解釋放：加入無水酸催化斷裂，使N端氨基酸以可識別的形式（PTH-AA）釋放。

3、序列循環(huán)：殘余肽鏈再次進入下一輪循環(huán)，重復上述步驟。

目前，市面上已發(fā)展出多種自動化Edman測序儀，使得該技術(shù)可對純化蛋白樣本進行高達30個氨基酸殘基的順序解析，具有良好的重復性與穩(wěn)定性。

二、Edman降解的優(yōu)勢與局限性

盡管質(zhì)譜技術(shù)的興起為dànbáizhì組學打開了新天地，但Edman降解依然以其化學反應(yīng)的確定性和序列位點的準確性在多個關(guān)鍵場景下保有一席之地。

1、優(yōu)勢：

（1）高度特異性：僅對N端游離氨基起反應(yīng)，避免其他位點干擾。

（2）序列位置確定：每次循環(huán)均從N端開始，序列定位準確。

（3）適用于蛋白表達驗證：可與理論序列比對，確認表達產(chǎn)物正確性。

（4）檢測翻譯后修飾：能直接判斷N端是否有乙?；?、甲?；确忾]修飾。

2、局限性：

（1）樣本要求高：必須為純化蛋白，N端不能被封閉或修飾。

（2）測序長度有限：一般zuì多測定20~30個氨基酸。

（3）通量較低：不適用于復雜混合物或高通量分析。

因此，在實驗設(shè)計階段，研究人員需權(quán)衡不同測序技術(shù)的適用性，以獲得zuì具信息價值的數(shù)據(jù)。

三、Edman測序在現(xiàn)代dànbáizhì研究中的應(yīng)用

1、生物藥開發(fā)與質(zhì)量控制

在重組蛋白藥物的生產(chǎn)中，N端序列是藥品一致性、穩(wěn)定性和正確表達的重要指標。Edman測序可用于：

* 驗證表達產(chǎn)物的N端氨基酸與設(shè)計序列是否一致

• 檢測信號肽是否成功切除

• 監(jiān)控不同批次之間的表達一致性

2、翻譯起始位點驗證

在構(gòu)建表達載體時，研究人員往往關(guān)心是否從預(yù)期的起始密碼子開始翻譯。Edman降解通過直接讀取N端序列，可jīngzhǔn驗證翻譯起始位點是否偏移。

3、蛋白N端修飾分析

某些蛋白可能經(jīng)歷N端乙?；⒓柞；芳柞；刃揎?。當Edman降解無法進行時，反而說明存在封閉修飾，提示需進一步使用質(zhì)譜進行結(jié)構(gòu)確認，從而構(gòu)建完整的N端修飾圖譜。

四、Edman測序與質(zhì)譜：互補而非替代

在現(xiàn)代dànbáizhì組學中，Edman測序與質(zhì)譜并非競爭關(guān)系，而是優(yōu)勢互補。質(zhì)譜具有高通量、廣覆蓋的優(yōu)勢，可快速掃描復雜樣本；而Edman降解則以其jīngzhǔn、低背景、序列位置明確的特點，為重點蛋白提供jīngzhǔn確認。

常見的組合策略包括：

1、先質(zhì)譜、后Edman：初篩蛋白后，對關(guān)鍵條帶進行Edman驗證

2、Edman篩選修飾蛋白，再上LC-MS/MS定位修飾位點

3、抗體驗證中同時使用質(zhì)譜和Edman，確保N端一致性

百泰派克生物科技的Nduāncèxù服務(wù)優(yōu)勢

在百泰派克生物科技，我們深知Nduāncèxù在科研和生物制藥開發(fā)中的重要性。為此，我們搭建了自動化Edman測序平臺，配套完善的純化、定量和質(zhì)量控制體系，為客戶提供一站式N端序列分析服務(wù)。

我們的優(yōu)勢包括：

• 高靈敏度設(shè)備：搭載優(yōu)良PPSQ-51A測序儀，zuì少可識別1~5 pmol蛋白樣本

• 純化支持服務(wù)：提供SDS-PAGE條帶回收、PVDF膜轉(zhuǎn)印等前處理方案

• 多輪循環(huán)控制：zuì長可達30個氨基酸殘基，準確還原N端結(jié)構(gòu)

• 詳盡報告交付：包括原始圖譜、電泳圖片、序列比對和技術(shù)說明

在如今強調(diào)“jīngzhǔn測序、全鏈驗證”的時代背景下，Edman降解并未被淘汰，反而在多種新型生物制品開發(fā)中再次“回歸主場”。Edman降解測序依然憑借其化學解析的確定性和N端分析的特異性，在dànbáizhì研究領(lǐng)域保持dútè價值。它不僅是質(zhì)譜技術(shù)的重要補充，更在某些關(guān)鍵應(yīng)用場景中發(fā)揮著bùkětìdài的作用。百泰派克生物科技提供zhuānyè的基于Edman降解的蛋白N端序列分析服務(wù)，可解決您的項目問題，加速您的研究項目，為您帶來優(yōu)質(zhì)的服務(wù)體驗。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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