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小動物活體光學(xué)成像技術(shù)在感染性疾病研究中的應(yīng)（二）
（接上期）二.監(jiān)測抗感染免疫反應(yīng)在利用小動物活體光學(xué)成像技術(shù)觀測病原體在動物體內(nèi)感染情況的同時，還可應(yīng)用該技術(shù)觀測機(jī)體對病原體入侵的免疫反應(yīng)。此類應(yīng)用可以通過三種方式實(shí)現(xiàn)：1、利用報告基因標(biāo)記在免疫細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因啟動子而構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物，以該轉(zhuǎn)基因動物為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，用?jīng)光學(xué)標(biāo)記的病原體對其進(jìn)行感染，觀測病原體感染而引發(fā)的免疫細(xì)胞應(yīng)答；2、利用報告基因標(biāo)記目的基因的啟動子構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動物，觀測病原體感染后該基因的表達(dá)情況，了解免疫應(yīng)答的分子機(jī)理；3、利用某種免疫相關(guān)基因被敲除的基因敲除鼠作為實(shí)驗(yàn) -
Q：熒光素酶報告基因檢測主要有哪些用途？a.啟動子結(jié)構(gòu)分析，將啟動子區(qū)域序列（通常2k左右）進(jìn)行分段截短，或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變，再分別構(gòu)建入luciferase報告載體，檢測其啟動子活性。b.啟動子SNP分析，一些基因的啟動子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性，可運(yùn)用熒光素酶報告系統(tǒng)分析其相對活性。c.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用，將該序列（通常為啟動子區(qū)域）插入報告基因載體，同時在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞中共轉(zhuǎn)過表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子，可分析轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)是否提高熒光素酶活性。d.可以分析信號通路是否激活，將該信號通路的下
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IL-2具有免疫激活和免疫抑制雙重作用，具體發(fā)揮哪種取決于其受體不同鏈的相應(yīng)信號。IL-2受體包括α、β、γ三條鏈，其中α鏈（IL-2Rα，CD25）在Treg細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞組成性表達(dá)，使用低劑量IL-2藥物會優(yōu)先激活Treg細(xì)胞而非CD8+T細(xì)胞，而高劑量IL-2藥物會帶來嚴(yán)重的全身毒性，這是開發(fā)IL-2的腫瘤治療藥物中一直困擾著人們的難題。NatRevImmunol.2022Oct;22(10):614-628.多家企業(yè)已經(jīng)將IL-2的研發(fā)轉(zhuǎn)向抗炎藥物方向（參考：不死磕“腫瘤”，IL-2轉(zhuǎn)向
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小動物活體光學(xué)成像技術(shù)在感染性疾病研究中的應(yīng)用
Revvity小動物活體光學(xué)成像技術(shù)已在生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、臨床前醫(yī)學(xué)研究及藥物研發(fā)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。在眾多應(yīng)用領(lǐng)域中，感染性疾病研究是活體光學(xué)成像技術(shù)的應(yīng)用熱點(diǎn)之一。在應(yīng)用活體光學(xué)成像技術(shù)進(jìn)行感染性疾病研究中，常用的標(biāo)記方法及應(yīng)用領(lǐng)域包括：1、利用螢火蟲熒光素酶基因、海腎熒光素酶基因或細(xì)菌熒光素酶基因標(biāo)記細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲等病原體，在活體水平觀測這些病原體在動物體內(nèi)的感染情況及抗生素、疫苗等藥物的治療效果；2、通過熒光素酶基因或熒光蛋白基因標(biāo)記免疫細(xì)胞，以及利用特定基因-熒光素酶基因轉(zhuǎn)基 -
應(yīng)用小動物活體成像技術(shù)研究 生物藥劑學(xué)和藥代動力學(xué)
小動物活體光學(xué)成像技術(shù)是將分子及細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)從體外研究水平發(fā)展到活體動物研究水平的前沿性臨床前分子影像技術(shù)，該技術(shù)通過采用生物發(fā)光與熒光探針標(biāo)記研究對象，借助靈敏的光學(xué)檢測儀器，直接在活體動物水平監(jiān)測疾病的發(fā)展變化并開展相關(guān)藥物的臨床前研發(fā)。小動物活體光學(xué)成像目前已廣泛應(yīng)用于生物藥劑學(xué)及藥物動力學(xué)相關(guān)研究：以藥物為直接觀測對象，借助熒光探針直接標(biāo)記藥物本身，通過追蹤熒光信號而反映藥物在體內(nèi)的分布、靶向及代謝情況。如在研究抗體或多肽類藥物是否能夠有效靶向腫瘤的實(shí)驗(yàn)中，可以利用熒光染料通過化學(xué)鍵的 -
納米載體.傳統(tǒng)化藥.精準(zhǔn)治療（從分子機(jī)制－細(xì)胞分析－活體動物－組織切片等多角度，研究納米金載體通過增加順鉑化療藥物靶向性，改善順鉑化療耐藥性，加快精準(zhǔn)治療研究進(jìn)程。）在上期推送中，我們介紹了順鉑作為一線化療藥物，在治療過程中會出現(xiàn)耐藥性，且耐藥機(jī)制不明。而納米載體可通過“特洛伊木馬”效應(yīng)，通過抗體偶聯(lián)、控制釋放時間/環(huán)境和多靶標(biāo)聯(lián)合治療等方式，增加藥物靶向性及治療效果。案例一納米金聯(lián)合順鉑改善三陰性乳腺癌放療效果[1]2017年LeiCui等人在RadiationResearch雜志上發(fā)表文章，
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IL-6作為細(xì)胞因子風(fēng)暴的主要成分，被認(rèn)為是促進(jìn)炎癥的核心分子。但是，IL-6也有拮抗炎癥，維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)的作用，只是需要通過不同的受體，不同的信號傳導(dǎo)通路。F1000Research2020IL-6簡述1986年，IL-6被鑒定B細(xì)胞刺激因子，促進(jìn)效應(yīng)B細(xì)胞分化為產(chǎn)生抗體的細(xì)胞。IL-6也稱為IFN-β2，肝細(xì)胞刺激因子和雜交瘤/漿細(xì)胞瘤生長因子，是一種由184個氨基酸組成的25-kDa分泌糖肽單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是IL-6的主要生產(chǎn)者。T細(xì)胞、B細(xì)胞、肝細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)
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一，酶功能及適用范圍介紹細(xì)胞作為生物的基本結(jié)構(gòu)單元（病毒除外），在生命活動過程中扮演著重要角色，在生物醫(yī)藥領(lǐng)域經(jīng)常被用于基因和藥物研究的工具。實(shí)驗(yàn)使用到的細(xì)胞主要是細(xì)胞系（Cellline）和原代細(xì)胞（Primarycells），這兩種細(xì)胞各有優(yōu)缺點(diǎn)，例如原代細(xì)胞能夠很好地模擬生物體內(nèi)的環(huán)境但是重復(fù)性差；細(xì)胞系雖然重復(fù)性好，但是不能很好地模擬生物體內(nèi)的環(huán)境。因此，很多時候在實(shí)驗(yàn)會需要進(jìn)行原代細(xì)胞的分離，對于原代細(xì)胞的分離主要是酶消化法，參與消化的酶因組織差異而存在不同，下邊就介紹一下實(shí)驗(yàn)室常用的
