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酶的提取和分離純化2011/03/28: 酶的提取和分離純化（一）細(xì)胞破碎處理www.runwelltac.com許多酶都存在于細(xì)胞內(nèi)。為了提取這些胞內(nèi)酶，首先需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行破碎處理。細(xì)胞破碎的方法很多，主要包括機(jī)械破碎法、物理破碎法、化學(xué)破碎法和酶學(xué)破碎法等。機(jī)械破碎法是指利用搗碎機(jī)、研磨器或勻漿器等將細(xì)胞破碎。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎。化學(xué)破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變。酶學(xué)破碎法是指選用合適的酶，使細(xì)胞壁遭到破壞，進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)

聚乙二醇修飾劑及其他衍生物簡(jiǎn)介2011/03/21: 聚乙二醇修飾劑及其他衍生物簡(jiǎn)介一、聚乙二醇修飾劑近年來(lái)，蛋白質(zhì)多肽等生物大分子藥物和天然產(chǎn)物藥物分子被越來(lái)越多的應(yīng)用于疾病治療領(lǐng)域，極大地推動(dòng)了醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展。然而，生物大分子在藥用過(guò)程中的作用卻由于其半衰期短、容易產(chǎn)生免疫原性抗原性、易被酶解、有一定藥理毒性等問(wèn)題被大大限制。為有效解決該問(wèn)題，國(guó)家生化工程技術(shù)研究中心（北京）研制開(kāi)發(fā)了一系列聚乙二醇修飾劑，通過(guò)對(duì)藥物分子進(jìn)行聚乙二醇化學(xué)修飾來(lái)達(dá)到延長(zhǎng)藥效的目的。因?yàn)榫垡叶兼湹目臻g阻礙作用使得被修飾蛋白對(duì)蛋白酶酶解的抵抗能力大為提高，同時(shí)被修飾

聚苯乙烯（PST）特點(diǎn)及應(yīng)用2011/03/17: 聚苯乙烯（PST）特點(diǎn)及應(yīng)用1.概述www.runwelltac.com聚苯乙烯－二乙烯基苯微球（polystyrenedivinylbenzenebeads,PST）具有剛性大，耐受有機(jī)溶劑性能好，pH值的適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，是一種非常有應(yīng)用前途的層析介質(zhì)。同多糖型凝膠微球相比較，交聯(lián)聚合物微球的骨架結(jié)構(gòu)具有更高的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)穩(wěn)定性，所以更適合能經(jīng)受高流速高壓力操作的液相色譜使用。中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所國(guó)家生化工程技術(shù)研究中心采用SPG（ShirasuPorousGlass）膜乳化技術(shù)與懸浮

標(biāo)記的鏈霉卵白素-生物素法2011/03/10: 標(biāo)記的鏈霉卵白素-生物素法www.runwelltac.com標(biāo)記的鏈霉卵白素-生物素法（LSAB）標(biāo)記的鏈霉卵白素-生物素法（LSAB法）是標(biāo)記的卵白素技術(shù)，20世紀(jì)80年代開(kāi)始采用?；驹噭孩?抗體；②生物素化第二抗體；③辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素。實(shí)驗(yàn)方法：1.將固定后的標(biāo)本用PBS漂洗；2.于室溫下用1%H2O2或1%H2O2甲醇浸泡涂片10~20min，用來(lái)密封內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；3.TBS漂洗3次，每次1min；4.在室溫下用二抗的正常血清孵育20min；5.滴加一抗后在室溫下放

WB實(shí)驗(yàn)的基本原理及操作流程2011/03/02: WB實(shí)驗(yàn)的基本原理及操作流程www.runwelltac.com【實(shí)驗(yàn)原理】一個(gè)基因表達(dá)*結(jié)果是產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)（或酶）。因此檢測(cè)蛋白質(zhì)是測(cè)定基因表達(dá)的主要標(biāo)志，檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法很多，除ELISA法外，也可用與檢測(cè)DNA和RNA相類(lèi)似的吸印方法。前兩法有“南”和“北”之意，故本法遂被延伸稱為Western（西）印跡法，該法能用SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分辨出與專(zhuān)一抗血清結(jié)合的專(zhuān)一性蛋白質(zhì)。將聚丙烯酰胺凝膠上分辨出的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上并與*抗體共孵。*抗體專(zhuān)一地與待分離蛋自質(zhì)的抗原決定簇結(jié)合

如何使用離心機(jī)提取植物基因組DNA2011/02/24: 如何使用離心機(jī)提取植物基因組DNA植物基因組DNA提取使用什么樣的離心機(jī)做?具體步驟怎么樣？植物組織提取基因組DNA一、材料www.runwelltac.com幼嫩葉子。二、設(shè)備移液器，冷凍高速離心機(jī)，臺(tái)式高速離心機(jī)，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。（這時(shí)選擇設(shè)備的時(shí)候注意選擇那種通用性強(qiáng)的，可以一機(jī)配多種轉(zhuǎn)子的離心機(jī)，可以大大的降低設(shè)備采購(gòu)成本，比如說(shuō)我廠生產(chǎn)的TG16臺(tái)式高速離心機(jī)，就有16種轉(zhuǎn)子可供選擇，有6*50ml（角轉(zhuǎn)子），16*

雌激素可抑制病毒感染2011/02/15: 雌激素可抑制病毒感染www.runwelltac.com一般人會(huì)認(rèn)為，雌激素與病毒感染是風(fēng)馬牛不相及的問(wèn)題。然而，美國(guó)國(guó)立心肺血液學(xué)研究所進(jìn)行的一項(xiàng)研究表明，雌激素有助于拮抗一種常見(jiàn)病毒——巨細(xì)胞病毒，因此可防止心臟細(xì)胞遭受炎癥損害。*，病毒可觸發(fā)人體的炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生一些活性氧分子，稱為氧自由基，這些物質(zhì)在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成過(guò)程中具有重要作用，當(dāng)斑塊阻塞了血管，便會(huì)導(dǎo)致心臟病發(fā)作或心腦卒中發(fā)生。研究人員將體外培養(yǎng)的絕經(jīng)前婦女冠脈平滑肌細(xì)胞，預(yù)先用不同分子結(jié)構(gòu)和不同濃度的雌激素處理后，暴露于巨

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用到的材料2011/02/10: 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用到的材料1.種類(lèi)www.runwelltac.com1.1.細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用品均為無(wú)菌，除了玻璃容器與pasteurpipet外，其它均為塑料無(wú)菌制品。1.2.TC級(jí)培養(yǎng)盤(pán)表面均有coating高分子物質(zhì)以讓細(xì)胞吸附，培養(yǎng)容器種類(lèi)有Tflask,plates,dishes,rollerbottle等，依實(shí)驗(yàn)需要使用。1.3.plasticsterilepipet:1ml,2ml,5ml,10ml,25ml1.4.塑料離心管:15ml,50ml，均有2種不同材質(zhì)，其中polyprop

原代細(xì)胞核膜的分離2011/01/24: 原代細(xì)胞核膜的分離試劑和器材www.runwelltac.com：1.DNA酶Ⅰ；2.KCl（1mol/L溶于20mmol/LTris-HCl，pH7.4）；3.MgCl2（1mol/L儲(chǔ)存液）；4.苯甲基磺酰氟（PMSF）（無(wú)水乙醇配制的1mol/L儲(chǔ)存液）；5.純化的細(xì)胞核；6.緩沖液：2mmol/LTris-HCl，pH7.4；7.膜懸浮緩沖液（ESB）：0.25mol/L蔗糖、2mmol/LTris-HCl，pH7.4；8.梯度溶液：1.0mol/L、1.5mol/L、1.8mol/L、

碘克沙醇梯度溶液分離細(xì)胞核2011/01/18: 碘克沙醇梯度溶液分離細(xì)胞核用碘克沙醇梯度溶液從哺乳動(dòng)物肝臟中分離細(xì)胞核www.elisa17.com試劑和器材：1.OptiPrepTM（600g碘克沙醇，ρ=1.32g/ml）；2.OptiPrepTM稀釋劑（OptiPrepTMdiluent，OD）：150mmol/LKCl、30mmol/LMgCl2、120mmol/L*基甘氨酸-KOH，pH7.8；3.勻漿介質(zhì)（HM）：0.25mol/L蔗糖、25mmol/LKCl、5mmol/LMgCl2、20mmol/L*基甘氨酸-KOH，pH7.

檢測(cè)抗體設(shè)備購(gòu)置的注意事項(xiàng)2011/01/14: 檢測(cè)抗體設(shè)備購(gòu)置的注意事項(xiàng)抗體是完成免疫組織化學(xué)染色的主要試劑，可將其分為特異性一抗（或稱一級(jí)抗體）和第二抗體（或稱二級(jí)抗體，也可稱為二抗或標(biāo)記二抗），尤其特異性一抗更為重要。目前國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)各種特異性抗體日益增多，銷(xiāo)售公司也很多，大多數(shù)使用者直接選用市售現(xiàn)成商品。www.runwelltac.com抗體質(zhì)量的好壞是完成免疫組化工作的關(guān)鍵，目前可從二條途徑獲得。首先可從市場(chǎng)上獲得商品化抗體，這是主要來(lái)源。但有時(shí)為了研究或證實(shí)一種新的抗原成分，而又無(wú)相應(yīng)抗體可購(gòu)買(mǎi)時(shí)，往往需要自己制備抗血清。當(dāng)然，也

如何解決技術(shù)難題2011/01/11: 如何解決技術(shù)難題如何解決技術(shù)難題且看五個(gè)科學(xué)實(shí)例隨著對(duì)細(xì)胞生理研究的逐漸深入，科學(xué)家們開(kāi)始解析單個(gè)細(xì)胞的行為，這是因?yàn)榧词故峭瑯拥倪z傳物質(zhì)，同樣的周邊環(huán)境，這些細(xì)胞還是會(huì)朝著不同的方向發(fā)展，有時(shí)還會(huì)生成不同的功能，而且單個(gè)細(xì)胞的變化還關(guān)系到癌癥，神經(jīng)疾病等疾病。www.runwelltac.com然而要分析單個(gè)細(xì)胞，卻不是那么容易的事情，在基因表達(dá)分析中占據(jù)主要位置的DNA芯片這種分析方法，由于靈敏度不夠，所以不足以發(fā)現(xiàn)單個(gè)細(xì)胞水平上的差異，但是從單個(gè)細(xì)胞中挑選少量RNAs，或者蛋白也不容易做到

細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇和常見(jiàn)問(wèn)題2011/01/06: 細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇和常見(jiàn)問(wèn)題細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等；根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類(lèi)型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?。www.runwelltac.com（1）平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇：貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板。懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型。U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞。V型培養(yǎng)板有時(shí)用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗(yàn)。不同型狀的板子自然有不同

非限制性體干細(xì)胞的分離2011/01/04: 非限制性體干細(xì)胞的分離非限制性體干細(xì)胞（USSCs）的分離試劑和材料：1.起始培養(yǎng)基；2.擴(kuò)增培養(yǎng)基；3.0.05%胰蛋白酶，含EDTA；4.PBSA；5.T25培養(yǎng)瓶；實(shí)驗(yàn)方法：1.制備和分離臍帶血來(lái)源的MNCs（CB-MNCs）；2.如果使用凍存的CB-MNCs，復(fù)蘇的細(xì)胞可以用于培養(yǎng)，不需要其他分離步驟；3.用起始培養(yǎng)基按5×106—7×106個(gè)細(xì)胞/ml濃度接種到T25的培養(yǎng)瓶中；4.將細(xì)胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)，2-4周內(nèi)每周一次更換培養(yǎng)基和細(xì)胞因子；5.形成USSC集落后

限制性內(nèi)切酶綜述及分類(lèi)指南2010/12/31: 限制性內(nèi)切酶綜述及分類(lèi)指南發(fā)現(xiàn)限制性內(nèi)切酶40年前，當(dāng)人們研究細(xì)菌對(duì)抗噬菌體宿主特異性的限制-修飾現(xiàn)象時(shí)發(fā)現(xiàn)了限制性內(nèi)切酶。人們普通認(rèn)為，限制性內(nèi)切酶能保護(hù)細(xì)菌不受噬菌體的感染，行使微生物免疫功能。缺乏限制性內(nèi)切酶的E.coli菌株極易被噬菌體感染，但如果這類(lèi)細(xì)菌體內(nèi)存在限制性內(nèi)切酶，被成功感染的機(jī)率就會(huì)明顯降低。擁有的限制性內(nèi)切酶種類(lèi)越多，保護(hù)作用也就越強(qiáng)；一種擁有四、五種不同限制性內(nèi)切酶的細(xì)胞就幾乎不受感染。*被發(fā)現(xiàn)的限制性內(nèi)切酶包括來(lái)源于大腸桿菌的EcoRI和EcoRII，以及來(lái)源于流感嗜

胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程2010/12/29: 胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程維持ES細(xì)胞處于未分化狀態(tài)：ES細(xì)胞培養(yǎng)用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培養(yǎng)基來(lái)阻止細(xì)胞的分化。為細(xì)胞提供包被有0.1％明膠的平板作為粘附細(xì)胞的基質(zhì)。建議每2－3天從達(dá)到80％－90％融合的平板按1：8的比率傳代細(xì)胞一次，細(xì)胞傳代以后，在將細(xì)胞接種在0.1％明膠包被的培養(yǎng)皿之前，通過(guò)預(yù)先將細(xì)胞接種在沒(méi)有經(jīng)過(guò)包被的組織培養(yǎng)板2個(gè)小時(shí)，使分化細(xì)胞粘附，從而將分化和未分化細(xì)胞分開(kāi)。將細(xì)胞全程置于37℃，5％CO2，100％濕度條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)基：ES：配制一20×不含DM

免疫組化技術(shù)要點(diǎn)和常見(jiàn)問(wèn)題2010/12/27: 免疫組化技術(shù)要點(diǎn)和常見(jiàn)問(wèn)題在免疫組化過(guò)程中，為了更好的說(shuō)明問(wèn)題和查找原因，設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照片（已知的高表達(dá)相應(yīng)抗原的組織）和陰性對(duì)照組織片（不加一抗但是加二抗系統(tǒng)/不加任何抗體兩組），所有操作過(guò)程應(yīng)*一致。染色弱或者沒(méi)有染色（按照先后順序，先排除一些簡(jiǎn)單的原因）：試劑使用順序錯(cuò)誤或者漏加試劑重復(fù)實(shí)驗(yàn)，保證每一步均正確二抗和一抗不匹配選擇匹配的二抗底物和酶不匹配選用匹配的底物酶失活換用新的酶（將酶和底物混合，看是否顯色？）組織中沒(méi)有待測(cè)抗原表達(dá)或者表達(dá)水平低使用陽(yáng)性對(duì)照片抗體濃度太低增加抗體濃度.使用

脂肪酸的氧化過(guò)程及其概念2010/12/20: 脂肪酸的氧化過(guò)程及其概念一,脂肪酸的β-氧化過(guò)程肝和肌肉是進(jìn)行脂肪酸氧化zui活躍的組織，其zui主要的氧化形式是β-氧化。此過(guò)程可分為活化，轉(zhuǎn)移，β-氧化共三個(gè)階段。1.脂肪酸的活化脂肪酸參加代謝前和葡萄糖一樣也先要活化。其活化形式是硫酯——脂肪酰CoA，催化脂肪酸活化的酶是脂酰CoA合成酶（acylCoAsynthetase）。活化后生成的脂酰CoA極性增強(qiáng)，易溶于水；分子中有高能鍵、性質(zhì)活潑；是酶的特異底物，與酶的親和力大，因此更容易參加反應(yīng)。脂酰CoA合成酶又稱硫激酶，分布在胞漿中、

alamarBlue的用法2010/12/03: alamarBlue的用法貼壁細(xì)胞和非貼壁細(xì)胞都適用。所有操作在無(wú)菌條件下進(jìn)行。避免污染細(xì)胞，因?yàn)槲⑸镂廴疽矔?huì)還原alamarBlueTM，培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G（1U/ml）、兩性霉素B（amphotericinB，0.0025ug/ml）。氧化還原指示劑是pH敏感的，推薦使用磷酸緩沖液。10％胎牛血清對(duì)比色法檢測(cè)無(wú)影響，但是會(huì)淬滅部分熒光；因此，用熒光法檢測(cè)時(shí)對(duì)照溶液中需添加10％BSA。酚紅對(duì)檢測(cè)也有一定影響，結(jié)果會(huì)上調(diào)0.03%。一般來(lái)說(shuō)，應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基，如RPMI16

如何選擇熒光二抗2010/11/30: 如何選擇熒光二抗如何選擇二抗——根據(jù)一抗種屬及類(lèi)型選擇合適的二抗二抗廣義上是指專(zhuān)門(mén)和一抗進(jìn)行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體，在免疫學(xué)反應(yīng)中，經(jīng)常需要針對(duì)試驗(yàn)選擇不同的二抗，檢測(cè)任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時(shí)在后繼試驗(yàn)中也會(huì)有不同的檢測(cè)方案，因此在選擇二抗的時(shí)候要綜合考慮一抗的類(lèi)型及后繼檢測(cè)方案的要求，一般來(lái)說(shuō)，選擇合適的二抗需要從下面幾個(gè)方面考慮：【一抗的種屬來(lái)源】二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來(lái)源，例如：如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均

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