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各種常見緩沖液的配制方法2012/08/10

磷酸鹽緩沖液，Tris緩沖液和檸檬酸緩沖液等是生物學實驗中常用的緩沖液，也是PeproTech重組細胞因子和蛋白溶解所需的常用緩沖液。然而，這些緩沖液的配制比較麻煩，尤其當要獲得特定pH值的緩沖液時，調(diào)節(jié)pH值是費力、費時的事情。對于Tris等緩沖液等，pH計是無法準確測量其pH值的。那么，有沒有簡便的方法來配制特定濃度和pH值的上述緩沖液呢？美國PeproTech公司為此精心設計開發(fā)出一個網(wǎng)上實用工具--http://www.peprotech-asia.com/convertor/ch/ph

免疫血清制備方案2012/06/19

免疫血清的制備是一項常用的免疫學實驗技術(shù)。價、高特異性的免疫血清可作為免疫學診斷的試劑（如用于制備免疫標記抗體等），也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價高低取決于實驗動物的免疫反應性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強的抗原刺激高應答性的機體，常可獲得價的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時，則需同時加用佐劑以增強抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的免疫血清，必須予先純化抗原。此外，抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時間間隔等，也是影響免疫血清效價的

凝膠遷移實驗2012/05/29

凝膠遷移實驗凝膠遷移實驗中,全面詳細地介紹具體的實驗操作方法,從探針的標記,探針的純化,EMSA膠的配制,EMSA結(jié)合反應,再到zui后的電泳分析.www.biomart.cn/runwell/index.htm1.探針的標記（1）如下設置探針標記的反應體系：待標記探針（1.75pmol/微升）2微升T4PolynucleotideKinaseBuffer（10X）1微升Nuclease-FreeWater5微升[γ-32P]ATP（3,000Ci/mmolat10mCi/ml）1微升T4Pol

蛋白樣品的定量2012/05/10

www.biomart.cn/runwell/index.htm目前常用比色法測定樣品蛋白的含量：Bradford法（考馬斯亮藍法）、Lowry法（Folin-酚試劑法）、BCA法等。但各有優(yōu)缺點，大家可以根據(jù)具體情況選取。按相應蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作，測定樣品濃度。收集完蛋白樣品后，為確保每個蛋白樣品的上樣量一致，需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據(jù)所使用的裂解液的不同，需要采用適當?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大，大家可以根據(jù)具體情

流式抗體選購常識2012/04/23

流式細胞實驗過程中，熒光抗體對單細胞懸液的標記效果直接影響實驗的數(shù)據(jù)質(zhì)量。因此，需要考慮各種影響流式抗體品質(zhì)及檢測效果的因素，例如抗體特異性、熒光素信號強弱、熒光素標記方式、同型對照等。流式抗體的選擇：1流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇zui基本的條件：目標蛋白特異性，反應種屬以及應用實驗。2流式抗體熒光標記的方式包括直接標記和間接標記兩種。在流式實驗過程中，盡量減少實驗工序和過程，以保證實驗的真實和準確性。因此在條件允許的范圍內(nèi)，建議盡量用直接標記的抗體進行實驗而不去做

蛋白質(zhì)色譜的化技術(shù)2012/04/10

蛋白質(zhì)色譜的化技術(shù)摘自蛋白質(zhì)色譜的化是應對當前細胞培養(yǎng)產(chǎn)能提升和政府監(jiān)管力度加大的重要手段之一。本文從蛋白質(zhì)色譜介質(zhì)的創(chuàng)新、色譜過程的集成和強化等方面介紹了蛋白質(zhì)色譜化的主要途徑和研究進展，從而為蛋白質(zhì)色譜化技術(shù)研究和分離純化工藝的設計、開發(fā)提供借鑒。1.蛋白質(zhì)色譜介質(zhì)的創(chuàng)新－新型色譜介質(zhì)的合成1.1雙孔與超大孔色譜介質(zhì)色譜介質(zhì)是蛋白質(zhì)色譜的核心構(gòu)件。目前商業(yè)化蛋白質(zhì)色譜介質(zhì)的孔道尺寸多在100nm以下，孔道對蛋白質(zhì)分子的（擴散）傳質(zhì)存在嚴重地阻滯作用，導致色譜柱效、處理能力（動態(tài)吸附容量）和分

流式實驗為何用同型對照及其選擇2012/03/23

流式實驗為何要用同型對照及如何選擇一、為什么要用同型對照？同型對照是使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性與細胞結(jié)合而產(chǎn)生的背景染色。同型對照是真正意思上的陰性對照，它不但可以用來設定流式細胞儀的電壓，而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細胞因子競爭封閉步驟。在流式細胞儀上樣前，染色方式如下：樣本管：一抗＋樣本，同型對照管：同型對照＋樣本二、如何選擇同型對照？（1）一般選擇與一抗的成分*相同種屬來源、相同亞型和亞鏈、相同熒光標記的抗

PCR疑難解決辦法總結(jié)2012/03/15

PCR疑難解決辦法總結(jié)www.runwelltac.com問題1:不出現(xiàn)擴增條帶引物：引物質(zhì)量是PCR失敗或擴增條帶不理想、容易彌散的常見原因。對策為：①選定合適的引物合成單位；②引物的濃度不僅要看OD值，用引物原液做瓊脂糖凝膠電泳，如一條引物有條帶，一條引物無條帶，此時做PCR有可能失敗，應與引物合成單位協(xié)商解決，如一條引物亮度高，一條引物亮度低，在稀釋引物時要平衡其濃度；③引物應高濃度小量分裝保存，防止多次凍融或長期放冰箱冷藏而導致變質(zhì)降解失效；④引物設計不合理，如引物長度不夠，引物之間形成

跨膜酪氨酸磷酸酶CD452012/02/23

跨膜酪氨酸磷酸酶CD45www.runwelltac.com造血干細胞（HSC）微環(huán)境是一個復雜的環(huán)境，它在支持靜態(tài)造血干細胞生存的同時，也支持了造血細胞補給過程中前體細胞的擴增、分化和遷移。1,2支持骨內(nèi)膜微環(huán)境中zui原始造血干細胞的基質(zhì)細胞實際上是成纖維細胞、表達CXCL12/SDF-1的網(wǎng)狀細胞、內(nèi)皮細胞和骨形成造骨細胞的混合物。1,2zui近，有研究顯示骨吸收破骨細胞也在微環(huán)境中起作用。3目前的證據(jù)表明此項作用涉及到造血的跨膜酪氨酸磷酸酶CD45。CD45存在于所有造血細胞的表面，包括

等電聚焦電泳法實驗過程2012/02/15

等電聚焦電泳法實驗過程一、實驗目的了解等電聚焦的原理.通過蛋白質(zhì)等電點的測定,掌握聚丙烯酰胺凝膠垂直管式等電聚焦電泳技術(shù).二、實驗原理等電聚焦(Isoelectricfocusing,簡稱IEF)是六十年代中期出現(xiàn)的新技術(shù).近年來等電聚焦技術(shù)有了新的進展,已迅速發(fā)展成為一門成熟的近代生化實驗技術(shù).目前等電聚焦技術(shù)已可以分辨等電點(pI)只差0.001pH單位的生物分子.由于其分辨力高,重復性好,樣品容量大,操作簡便迅速,在生物化學、分子生物學及臨床醫(yī)學研究中得到廣泛的應用.蛋白質(zhì)分子是典型的兩性

Caspase活性檢測相關(guān)問題解答2012/02/01

Caspase活性檢測相關(guān)問題解答1：Caspase活性測試是如何使用的？www.runwelltac.com答：Caspase活性測試為在細胞裂解液中檢測蛋白酶活性提供了簡捷方便的手段。當對專一Caspase的多肽底物被裂解時，釋放出的指示分子可用普通讀光儀或熒光讀板儀來做定量測定。將從細胞凋亡樣本得到的信號同未經(jīng)誘導的對照樣本進行比較，可以確定Caspase活性增加的倍數(shù)，而Caspase酶活性是同檢測到的信號直接成正比。2：Caspase活性測試是否可用于定量檢測？答：R&DSystems

間接免疫熒光法-檢測細胞內(nèi)抗原2012/01/12

間接免疫熒光法-檢測細胞內(nèi)抗原細胞內(nèi)抗原的檢測過程與細胞表面抗原檢測過程基本一致，只是在與一抗孵育前，需要預先對細胞用非離子去污劑進行透化處理。www.biomart.cn/runwell/index.htm操作方法www.runwelltac.com1.取已固定好的細胞爬片或甩片或經(jīng)過預處理的組織切片（石蠟或冰凍切片）；2.用含0.2%TritonX-100或NP-40的PBS溶液透化固定后的細胞2min（室溫），有些標本可能需要長達15min，時間視抗原而定；3.余下步驟接上述“細胞表面抗原

ENZO多通道凋亡檢測試劑盒2012/01/11

ENZO多通道凋亡檢測試劑盒-------與GFP或其它綠色熒光同時分析GFP-CertifiedTMApoptosis/NecrosisDectectionKit，貨號Cat.No.：ENZ-51002-25/ENZ-51002-10，其優(yōu)勢在于：ENZO*熒光染料標記，AnnexinV-EnzoGold，解決PE在細胞表面的聚集問題真正實現(xiàn)與GFP或其它綠色熒光探針多通道檢測穩(wěn)定區(qū)分正常、早期凋亡、晚期凋亡和壞死細胞優(yōu)化熒光顯微鏡法和流式檢測可與GFP同時檢測發(fā)射光譜重疊zui?。ㄑa償易調(diào)節(jié)

PCR實驗技術(shù)指南之引物設計2012/01/04

PCR實驗技術(shù)指南之引物設計所謂“工欲善其事，必先利其器”，這年頭手工設計引物的人似乎不多，還是用軟件方便些，防止你一不小心看走眼，丟一個堿基，同時計算起來也方便。設計軟件有很多，既可以在線設計,也可以用Primer、Oligo等等。細心地進行引物設計是PCR中zui重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同時擴增其他的非目的序列。下面的指導描述了一個可以增加特異性的引物所具有的令人滿意的特點：1）典型的引物18到24個核苷長。引物需要足夠長，保證

流式細胞實驗常見問題解答2011/12/21

流式細胞術(shù)常見問題解答B(yǎng)ioLegend公司提供了哪些熒光標記抗體？答：BioLegend公司提供APC、APC/Cy7、AlexaFluorTM488、AlexaFluorTM647、AlexaFluorTM700、Biotin、BrilliantVioletTM421、FITC、DyLightTM594、DyLightTM649、PacificBlueTM、PE、PE/Cy5、PE/Cy7、PerCP、PerCP/Cy5.5共計16種熒光素標記的7000多種流式抗體供客戶選擇。流式細胞實驗的

分析蛋白純化方法及其優(yōu)缺點2011/12/02

分析蛋白純化方法及其優(yōu)缺點www.biomart.cn/runwell/index.htm1.蛋白沉淀蛋白能溶于水是因為其表面有親水性氨基酸，在蛋白質(zhì)的等電點處若溶液的離子強度特別高或者特別低，蛋白則傾向于從溶液中析出。硫酸銨是沉淀蛋白zui常用的鹽，因為它在冷的緩沖液中溶解性好，冷的緩沖液有利于保持目的蛋白的活性。硫酸銨分餾常用作試驗室蛋白純化的*步，它可以初步粗提蛋白質(zhì)，去除非蛋白成分。蛋白質(zhì)在硫酸銨沉淀中較穩(wěn)定，可以短期在這種狀態(tài)下保存中間產(chǎn)物，當前蛋白質(zhì)純化多采用這種辦法進行粗分離翻。在

白介素-10簡介及作用2011/11/22

白介素-10簡介及作用1、IL-10簡介www.biomart.cn/runwell/index.htm在1989年，Mosmannand及他們的同事描述了一種新的免疫介質(zhì)，由Th2細胞克隆分泌，能夠抑制Th1細胞克隆IL-2和IFNr的合成。早期被命名為細胞因子合成抑制因子（CSIF），這種因子后來被命名為IL-10，在這被發(fā)現(xiàn)的21年期間，很多研究深入剖析了這個細胞因子的生物學特性2、IL-10基因和蛋白www.runwelltac.com人類IL-10基因位于1號染色體上，包括總共5.1k

細胞因子和重組蛋白溶解方法2011/11/16

細胞因子和重組蛋白溶解方法www.runwelltac.comPeproTech細胞因子所有細胞因子和蛋白均為凍干粉，這使得運輸非常便捷，只要常溫即可。而且，細胞因子和蛋白凍干粉非常穩(wěn)定，在-20或-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解，然后以液體形式加到培養(yǎng)體系或注射入動物體內(nèi)。溶解步驟非常關(guān)鍵，因溶解不好會導致細胞因子或蛋白的失活，這也是很多用戶在實際使用中經(jīng)常遇到的問題。那么，應該如何進行正確的溶解呢？下面我們以RecombinantHumanIL-4（重組人IL-4，產(chǎn)品編號

半乳糖凝集素3在血管生成中的作用2011/11/07

Galectin-3在血管生成中的作用半乳糖凝集素Galectin-3在血管生成中的作用www.biomart.cn/runwell/index.htm某些生理過程，如胚胎發(fā)育、生殖功能和傷口愈合，都需要新血管的形成。從現(xiàn)有的血管形成新血管的細胞機制被稱為血管生成。血管生成是一個多步驟的過程，包括一些細胞因子（peprotech）和生長因子的協(xié)調(diào)行動，對血管內(nèi)皮細胞發(fā)揮趨化、促有絲分裂和調(diào)節(jié)作用1。研究表明，碳水化合物結(jié)合蛋白以及它們各自的糖綴合物配體在血管生成中也扮演了重要角色。2,3具體來說

正確選擇流式抗體及搭配熒光素2011/10/27

選擇合適的流式抗體及流式抗體搭配熒光素的原則如何選擇流式抗體:www.biomart.cn/runwell/index.htm*、選擇流式抗體要看清楚抗的是你的目標蛋白質(zhì)，目標蛋白的物種不要搞錯了，有些抗體對好幾個物種的目標蛋白有反應，重要的是對你的實驗有沒有影響。第二、抗體的物種是小鼠,大鼠,兔子還是什么。以備不時之需，還是選擇你有匹配二抗。如果抗體還能夠做熒光染色啊，westernblot啊用途多了更好。第三、選擇流式抗體還要看熒光的顏色的選擇：一是你的流式儀一定要能讀，二是跟你需要coun