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血清在細胞培養(yǎng)中的鑒別方法及作用2016/08/24

血清在細胞培養(yǎng)中的鑒別方法及作用：血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血

細胞培養(yǎng)基大全2016/08/24

細胞培養(yǎng)基是人工模擬細胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，是提供細胞營養(yǎng)和促進細胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補加血清、抗生素等成分。培養(yǎng)基主要包括天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基和無血清細胞培養(yǎng)基等。天然細胞培養(yǎng)基是人們早期采用的細胞培養(yǎng)基，直接取自于動物組織提取液或體液，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸出液等。營養(yǎng)價值高，但成分復(fù)雜，差異大、不穩(wěn)定，來源也受到限制。水解乳蛋白和膠原是

抗體純化的方法2016/08/22

制備高特異性、價的抗體是實驗免疫學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)，抗體質(zhì)量的高低將直接影響試驗的成敗。通過不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起，為了獲得成分相對單一的抗體或?qū)⒖贵w用于特定的用途，就需要進行抗體純化?？贵w純化分了幾種類型，根據(jù)用途決定選擇哪種方法進行純化：1.粗純：將制備抗體的血清或是腹水，細胞上清，直接用鹽析法進行處理，這樣可以將這些物質(zhì)里面的其他雜質(zhì)去掉，獲得蛋白的成分，但是由于是粗純，里面會混有大量的其他蛋白，這樣獲得的抗體，純度較低，用于實驗中背景比較高。2.通用型純化：用抗體結(jié)合蛋白

細胞純化2016/07/29

一、人工純化人工純化，即利用人為手段造成某一細胞生長有利的環(huán)境條件，抑制其他細胞的生長從而達到純化細胞的目的。1、酶消化法酶消化法是比較常用的純化方法，不僅對貼壁細胞可行，能利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同，使兩者分開，達到純化的目的，對貼壁細胞與半貼壁及粘附細胞間的分離純化也是十分有效的。(1)上皮細胞與成纖維細胞的分離純化兩者在胰蛋白酶的作用下，由于成纖維細胞先脫壁，而上皮細胞要消化相當長的時間才脫壁，特別是在原代細胞初次傳代和早期傳代中兩種差別尤為明顯，故可采用多次差別消化方

免疫組化的方法和優(yōu)點2016/07/08

一、免疫組化技術(shù)的基本原理應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理，對組織切片或細胞標本中的某些化學(xué)成分進行原位的定性、定位或定量研究，這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細胞化學(xué)技術(shù)。*，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體(抗體)作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫

培養(yǎng)細胞的起源2016/07/08

大多數(shù)人是在標準條件下用有限或連續(xù)細胞系開展工作的.所以,考慮培養(yǎng)物中的細胞成分非常重要.如細胞在誘導(dǎo)條件下表現(xiàn)分化特征,要么意味著培養(yǎng)的細胞是成熟的,保持其持續(xù)合成特殊蛋白質(zhì)的能力就夠了;要么意味著培養(yǎng)細胞由前體細胞或干細胞組成,這些細胞有增殖能力,美工維持未分化狀態(tài),當有了合適的誘導(dǎo)條件,其中的一些或全部細胞會成熟并分化.有指導(dǎo)意義的考慮是,把培養(yǎng)物看成是由多能干細胞,未分化的定向前體細胞和成熟細胞組成的平衡狀態(tài),并且,這種平衡可隨環(huán)境條件變化而改變.在細胞密度較低的情況下,連續(xù)傳代可促進細

移液器操作的13種技巧2016/06/16

移液器操作的13種技巧技巧1：一致性在按壓與釋放定位銷時，需要保持一致的節(jié)奏、速度和技法。吸液速度過快會導(dǎo)致套柄與活塞噴濺、產(chǎn)生氣霧以及受到污染，甚至導(dǎo)致樣品量損耗。一致性可使準確度提高達5%。技巧2：正確填充吸頭當某一吸頭的建議（標稱）范圍為吸頭容量（標稱容量）的10%至100%時，可在35%至100%這一較小以及優(yōu)化的范圍內(nèi)實現(xiàn)度。在如此小的范圍內(nèi)移液會減少對操作人員技法的要求，并可將結(jié)果準確度提高約1%。當達到標稱容量的50%時可提供*結(jié)果。技巧3：吸液時保持垂直入水角使入水角盡可能地接近

百得移液器的維修保養(yǎng)2016/06/07

百得移液器的維修保養(yǎng)為使您使用的移液器始終保證*結(jié)果，就要每天檢查移液器是否清潔，尤其要注意吸液嘴連件部分。一、清潔并消毒移液器，只需在移液器表面噴上移液器消毒劑或酒精，再用軟布擦干。建議定期清潔并消毒移液器吸液嘴連件。二、實驗室內(nèi)保養(yǎng)1．吸液嘴推出器向下推到底；2．將拆卸工具銷插在吸液嘴推出桿和推出軸中間部分，撥定裝置；3．仔細松開吸液嘴推出器，取下吸液嘴推出軸；4．將拆卸工具的扳手端卡在吸液嘴連件上，逆時針旋轉(zhuǎn)。切莫使用其他工具。5ml吸液嘴連件不需工具，直接逆時針旋下即可；5．取下吸液嘴連

培養(yǎng)基的制備方法及基本原則2016/06/07

培養(yǎng)基的制備方法及基本原則培養(yǎng)基一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料。不用的培養(yǎng)基的成分不同，但是步驟卻大徑相同。培養(yǎng)基的制備方法1.配料配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。2.溶解淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。3.

如何避免血清中沉淀物的產(chǎn)生2016/05/18

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。我們科研人員在保存血清的時候，如何避免沉淀物的產(chǎn)生?1、解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法（-2O。C至4。C至室溫），若血清解凍時改變的溫度太大（如-20。C至37。C），實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。2、解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。3、請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放

血清使用和處理中有哪些常見問題2016/05/11

1.保存血清的方法建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2.如何解凍血清才不會使產(chǎn)品品質(zhì)受損將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會存在于血清中，亦

培養(yǎng)基如何消除組織培養(yǎng)的污染？2016/05/06

培養(yǎng)基一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)，各種目的無血清培養(yǎng)的是AIMV培養(yǎng)基（SFM）。在開始進行新的細胞培養(yǎng)時，如何消除組織培養(yǎng)的污染？可以參考下表所列的條件：如何消除組織培養(yǎng)的污染？當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗

流式細胞儀的工作原理2016/04/28

流式細胞儀主要由四部分組成：流動室和液流系統(tǒng)，激光源和光學(xué)系統(tǒng)，光電管和檢測系統(tǒng)，計算機和分析系統(tǒng)。四大系統(tǒng)共同完成信號的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳輸任務(wù)。檢測時將待測細胞或微粒制成細胞懸液，進行熒光染色后加入樣品管中。以一定壓力將待測樣品壓人流動室，在高壓下磷酸緩沖液（鞘液）從鞘液管噴出，鞘液管人口方向與待測樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形流束（鞘流），待測細胞在鞘液包繞下單行排列，依次通過檢測區(qū)。流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦后的光束，垂直照射在樣品流上，當細

瓊脂糖凝膠電泳2016/04/26

瓊脂糖凝膠電泳是分離鑒定和純化DN段的常用方法。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷，在電場中向正極移動。由于糖磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正極方向移動。不同濃度瓊脂糖凝膠可以分離從200bp至50kb的DN段。在瓊脂糖溶液中加入低濃度的溴化乙錠（ethidumbromide,EB），在紫外光下可以檢出10ng的DNA條帶，在電場中，pH8.0條件下，凝膠中帶負電荷的DN

單克隆抗體鑒定2016/04/26

抗體的鑒定對制備的McAb進行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的，應(yīng)做下述幾個方面的鑒定：1．抗體特異性的鑒定除用免疫原（抗原）進行抗體的檢測外，還應(yīng)該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進行交叉試驗，方法可用ELISA、IFA法。例如：①制備抗黑色素瘤細胞的McAb，除用黑色素瘤細胞反應(yīng)外，還應(yīng)該用其它臟器的腫瘤細胞和正常細胞進行交叉反應(yīng)，以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。②制備抗重組的細胞因子的單克隆抗體，應(yīng)首先考慮是否與表達菌株的蛋白有交叉反應(yīng)，其次是與其它細胞因子間有無交叉。2．McAb的Ig類

胎牛血清的功能2016/04/21

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。胎牛血清采用健康母牛懷孕的八月齡胎牛血液為原料，經(jīng)無菌采集、分離、微孔過濾后而成。所以胎牛血清是品質(zhì)也是的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分zui少。胎牛血清的功能：1.提供

抗體保存的Z佳方法2016/04/21

抗體保存的*方法不同的實驗使用的抗體也大為不同，根據(jù)試驗應(yīng)用的類型、樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)、樣本的種屬、抗體宿主的種類以及抗體的標記和檢測具體情況選擇zui符合實驗實際操作情況的單抗和二抗。于此同時抗體的保存方法也有區(qū)別，具體講解如下：一、腹水：腹水重組后可加入少量疊氮納等來阻止細菌生長。腹水應(yīng)當凍存。單抗能夠小包裝保存以避免反復(fù)凍融。若要保存較長時間，則不要在4℃。和血清不同，腹水中含有蛋白酶，會使抗體效價下降，因此加入蛋白酶抑制劑可以選擇。二、純IgG:不要稀釋抗體后來保存，除非加入羊血清BSA

細胞培養(yǎng)常見問題2016/04/21

細胞培養(yǎng)常見問題1.冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2.細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附

抗原的制備方法2016/04/20

實驗步驟一、抗原的提取抗原的制備是一件十分細致的工作，要制備一個高純度的抗原，需要付出艱巨的努力，制備工作涉及物理學(xué)、化學(xué)和生理學(xué)等許多領(lǐng)域的知識。根據(jù)物理或化學(xué)特性建立起來的分離、純化方法的主要原理不外乎二個方面：①利用混合物中幾個組分分配率的差別將他們分配到可用機械方法分離的兩個或幾個物相中，如鹽析、有機溶劑抽提、層析和結(jié)晶等；②把混合物置于單一物相中，通過物理力場的作用使各組分分配于不同的區(qū)域而達到分離的目的，如電泳、超速離心和超濾等。由于組織細胞內(nèi)存著許多分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)不同的抗原物質(zhì)

細胞轉(zhuǎn)染2016/03/30

細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中，其應(yīng)用越來越廣泛。簡介轉(zhuǎn)染，是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰毎姆独换瘜W(xué)介導(dǎo)方法很多，如經(jīng)