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微量移液器的實(shí)驗(yàn)室簡單檢測與校準(zhǔn)2010/12/18: （一）氣密性檢測移液器吸滿液體后，手持垂直放置15s，檢查吸嘴的尖頭有無液滴，如有，則說明漏氣。（二）準(zhǔn)確性檢測1）量程小于1ul，建議使用分光光度法檢測。將移液器調(diào)至目標(biāo)體積，然后移取染料溶液，加入一定體積的蒸餾水中，測定溶液的稀釋度（334nm或340nm），重復(fù)幾次移液操作，計(jì)算移液器的度。2）量程大于l／ul，可以用稱重法檢測。通過對(duì)水的稱重，轉(zhuǎn)換成體積（體積＝質(zhì)量／密度），鑒別移液器的準(zhǔn)確性。由于水的密度是隨著溫度變化而變化，且稱量天平本身度不符合檢測要求，檢測又大多在一個(gè)開放式空間內(nèi)

微量移液器的拆卸和安裝的具體步驟2010/12/18: （1）拆卸的具體步驟1）往下按緊脫卸按鈕，用力拉出脫卸套筒。可使用隨移液器提供的小工具對(duì)下半支進(jìn)行拆卸。2）向左旋轉(zhuǎn)下半支移液器，使其脫離把手。3）按活塞固定器并移走（活塞有可能受彈簧彈力作用彈出）。4）卸下活塞和彈簧。（2）安裝的具體步驟1）把活塞和彈簧裝入移液器下半部。2）把活塞固定器放在活塞上面，并把它按進(jìn)下半部分的溝槽。3）把下半部旋緊到上半部手柄（不要使用小工具）。4）按下脫卸按鈕，裝上脫卸筒套。

抗精子抗體（antispermatozoa antibody，ASA）檢測2010/12/18: 男性體內(nèi)的血睪屏障可使精子與免疫系統(tǒng)隔離。但當(dāng)此種屏障因疾病或創(chuàng)傷而受損時(shí)，精子或其可溶性抗原逸出，可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生自身抗精子抗體（antispermatozoaantibody，ASA），從而抑制精子產(chǎn)生，造成男性不育。女性生殖道具有酶系統(tǒng)，能降解進(jìn)入的精子抗原，使其不能達(dá)免疫系統(tǒng)。此種酶系統(tǒng)的缺陷可使精子抗原保持完整而刺激同種抗精于抗體產(chǎn)生。大約10％～30％原因不明的女性不孕癥可能由于ASA所致。測定ASA的方法很多，目前常用的有熒光抗體法，淺盤微量凝集法，伊紅Y染色法，試管或玻片凝集法，固

微量加樣器（移液器）使用的一般原則2010/12/18: 在免疫測定及其他生物醫(yī)學(xué)研究中，加樣器的使用離不開一次性的塑料吸頭，盡管一次性塑料吸頭的使用增加了實(shí)驗(yàn)費(fèi)用，但降低了實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員接觸傳染性病原體及有害實(shí)驗(yàn)材料如放射性核素的可能性，并且避免了吸頭多次重復(fù)使用所必需的清潔過程和腐蝕性去垢劑的使用。此外，在有些應(yīng)用上，如PCR測定中，吸頭必須是一次性的，以避免潛在污染發(fā)生的可能性。加樣器根據(jù)使用的要求，也在不斷發(fā)展。如可整體高壓滅菌加樣器的出現(xiàn)。使用UV線穩(wěn)定的塑料制作加樣器對(duì)于加樣器在許多方面的應(yīng)用非常重要，使得在實(shí)際工作中，在超凈臺(tái)或抽風(fēng)柜的紫外

抗核抗體（anti-nucleic antibody，ANA）2010/12/18: 抗核抗體（anti-nucleicantibody，ANA）是以真核細(xì)胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱。細(xì)胞核內(nèi)含有許多不同成分如核蛋白、核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）、脫氧核糖核酸（DNA）等。在某些因素，如細(xì)菌、病毒、藥物等作用下，可改變細(xì)胞核某些成分的性質(zhì)，激發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生許多抗不同核成分的抗體。這些抗核抗體目前尚無統(tǒng)一命名，有些是以*個(gè)檢出該抗體的患者名字縮寫命名，如Sm、Ro等抗體；有些是以相關(guān)疾病命名，如SS-A、SS-B、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)核抗原（R

phenol/chloroform 進(jìn)行DNA 萃取2010/12/18: 儀器用具：微量離心機(jī)藥品試劑：PlasmidDNA酵解產(chǎn)物：#1（pBlueGus/HindIII）,#2（pBlueGus/BamHI）；Phenol/chloroform/isoamylalcohol（25:24:1）以下簡稱為PCI；Chloroform/isoamylalcohol（24:1）以下簡稱為CI；3MNaOAc（醋酸鈉pH5.2）；純酒精及70%酒精方法步驟：◆注意！進(jìn)行這一部份實(shí)驗(yàn)的前，請(qǐng)先確定pBlueGus/HindIII與pBlueGus/BamHI兩者的酵解反應(yīng)都已

以DIG 標(biāo)定核酸2010/12/18: DNA探針一般可以用32P,35S或非放射性物質(zhì)如biotin及digoxigenin（DIG）加以標(biāo)定；標(biāo)定時(shí)利用DNA聚合酶的活性，在DNA聚合反應(yīng)中，另加入[α-32P]dATP,[α-32P]dCTP或DIG-11-dUTP等標(biāo)定物質(zhì)，所合成出來的即是被標(biāo)定的核酸片段。目前常見的方法包括nicktranslation,randompriming與polymerasechainreaction（PCR）等。若須對(duì)DNA進(jìn)行endlabeling時(shí)，可以進(jìn)行kinase或filling-in

Random priming2010/12/18: DNA聚合酶要進(jìn)行DNA聚合反應(yīng)時(shí)一定要有引子（primer），因?yàn)樗荒芤砸铀峁┑?’-OH為起始點(diǎn)進(jìn)行延伸（extension）的工作，而不能就地重新合成新的DNA（denovosynthesis）。一般實(shí)驗(yàn)常以人工合成的寡核苷酸為引子進(jìn)行DNA聚合反應(yīng)，這時(shí)固然可以根據(jù)已知序列設(shè)計(jì)核酸引子，但也可以采用逢機(jī)引子（randomprimers）。所謂逢機(jī)引子即其序列為逢機(jī)序列，不經(jīng)特別設(shè)計(jì)，目前應(yīng)用zui廣者是以自動(dòng)化機(jī)器所合成的、六到八個(gè)核苷酸長的寡核苷酸混合物；反應(yīng)進(jìn)行中若有任何一條逢

甲醛洋菜膠體電泳2010/12/18: 甲醛洋菜膠體電泳（formaldehyde-agarosegelelectrophoresis）甲醛是一種常用的RNA變性劑。在進(jìn)行甲醛洋菜膠體電泳分析時(shí)，必須先配制含有甲醛的洋菜膠體，RNA也必須先以甲醛及formamide進(jìn)行變性處理，以確保其二度結(jié)構(gòu)充分被打開。由于甲醛可能是一種致癌物質(zhì)，配制膠體及進(jìn)行電泳分析時(shí)都應(yīng)在抽氣櫥里小心操作；進(jìn)行電泳時(shí)所使用的緩沖液為MOPS（3-[N-morpholino]propanesulfonicacid）。此外，含有甲醛的洋菜膠體比較滑溜，容易破裂，在

RT-PCR2010/12/09: cDNA產(chǎn)量的很低A:RNA模板質(zhì)量低B:對(duì)mRNA濃度估計(jì)過高C:反應(yīng)體系中存在反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或反轉(zhuǎn)錄酶量不足D:反應(yīng)體積過大2.擴(kuò)增產(chǎn)物在電泳分析時(shí)沒有條帶或條帶很淺A:zui常見的原因在于反應(yīng)體系是PCR的反應(yīng)體系而不是RT-PCR的反應(yīng)體系B:與反應(yīng)起始時(shí)RNA的總量及純度有關(guān)C:建議在試驗(yàn)中加入對(duì)照RNAD:*鏈的反應(yīng)產(chǎn)物在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，在總的反應(yīng)體系中的含量不要超過1/10E:建議用Oligo（dT）或隨機(jī)引物代替基因特異性引物（GSP）用于*鏈合成。由于RNA模板存在二級(jí)結(jié)構(gòu)，

般注意事項(xiàng)：2010/12/09: 當(dāng)PCR結(jié)果不甚滿意時(shí)，首先檢查以下幾方面并遵照?qǐng)?zhí)行：將PCR反應(yīng)的試管與反應(yīng)板緊貼。當(dāng)酶反應(yīng)混合物以70℃“熱啟動(dòng)”開始循環(huán)時(shí)，切記在加入酶后稍微振蕩一下，因?yàn)樵?.2-ml的PCR管中不能均勻傳熱。不要隨意減少dNTP的用量，它是一個(gè)系統(tǒng)的因素，必須與其它成份保持平衡。對(duì)于有問題的PCR反應(yīng)，例如模板的量少，模板不純和環(huán)狀模板等，先嘗試加Taq酶前的體系進(jìn)行預(yù)變性，后加模板進(jìn)行正常PCR擴(kuò)增。沒有擴(kuò)增產(chǎn)物：在提供MgCl2緩沖液中，以0.25mmol/L為梯度增加MgCl2濃度；無MgCl2

Trizol疑難解答2010/12/09: 般注意事項(xiàng)：Trizol試劑含有苯酚，具有毒性和刺激性，注意操作。如皮膚接觸Trizol，請(qǐng)立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請(qǐng)聽取醫(yī)生意見。RNase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉，注意隨時(shí)勤換手套，樣品盡可能蓋嚴(yán)；盡量不要對(duì)著RNA樣品呼氣或說話。用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%（體積比）diethyl-pyrocarbonate（DEPC）至重或MiliQ級(jí)水中，處理過夜，滅菌即成DEPC水。細(xì)胞裂解必需充分且操作迅速。

RNA操作指南2010/12/09: RNA抽提純化是分子生物學(xué)研究的基本工作內(nèi)容。但是由于RNA酶（RNase）的廣泛存在和難以滅活的特性，使RNA的抽提純化和后續(xù)工作十分困難。即使Trizol試劑和各類RNA抽提純化試劑盒的廣泛應(yīng)用使RNA抽提和純化變得方便快捷，但是涉及RNA的工作仍然是分子生物學(xué)研究中zui讓人棘手的。為了保證您的工作成功，請(qǐng)仔細(xì)閱讀本操作指南，相信它能幫助您解決常見的問題?？偠灾?，RNA工作順利與否的關(guān)鍵是防止RNA酶的污染。RNase無處不在，在實(shí)驗(yàn)操作的任何一步，任何偶然的疏忽或不妥當(dāng)?shù)牟僮鞫加锌赡茉?

基因組DNA抽提2010/12/09: .基因組DNA降解（1）樣品不新鮮：雖然DNA在分子結(jié)構(gòu)上較RNA穩(wěn)定，但樣品在分離后細(xì)胞內(nèi)的DNA酶同樣會(huì)作用于DNA分子。（2）樣品本身富含DNA酶；2.得率低或無基因組DNA（1）DNA未充分釋放：在分離到的相間沉淀中加BufferG-A后未充分振蕩釋放DNA。（2）BufferW2中未加入無水乙醇：未加乙醇的BufferW2是一種低鹽溶液，可溶解DNA。若直接用于洗滌DNA-prepTube將會(huì)溶解并去除結(jié)合在silica膜上的DNA。（3）DNA未充分洗脫：用于洗脫DNA的Eluent

質(zhì)粒抽提常見問題解答2010/12/09: 產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱CAS#DNA測序*2010.11重組胰蛋白酶2010.11重組胰蛋白酶消化液2010.11引物合成訂購表測序訂單表格下載基因合成訂購表基因突變服務(wù)委托信息表DNA克隆服務(wù)委托信息表細(xì)菌16SrDNA菌種鑒定服務(wù)表基因特異性位點(diǎn)甲基化（methylation）檢測訂單引物設(shè)計(jì)工具常見密碼子表測序引物設(shè)計(jì)引物計(jì)算工具3'RACEPCR實(shí)時(shí)定量PCR的原理、探測化學(xué)物質(zhì)及探針優(yōu)化蛋白分子建模工具新聞快遞:在2010年11月1日-2011年1月31日開票并收到款的預(yù)付款全部給予10%的

PCR產(chǎn)物回收試劑盒可能出現(xiàn)問題及解決方法2010/12/09: 1.無DNADNAWashBuffer沒有用無水乙醇稀釋；2.低DNA產(chǎn)量樣品中加入的BindingBuffer的量太少；請(qǐng)按照使用說明加入足夠量的BindingBuffer；若DNA片段長度小于200bp，可加入6倍體積的BindingBuffer；若DNA片段長度大于4kb，則加入3倍體積BindingBuffer后加入1倍體積的雙蒸水。3.OD值與瓊脂糖凝膠中的DNA產(chǎn)量不相符從柱子上洗脫下來的痕量雜質(zhì)增加了A260的值；請(qǐng)按照標(biāo)準(zhǔn)步驟操作；另一方面,還取決于瓊脂糖/EB電泳的質(zhì)量.4.點(diǎn)

膠回收常見問題及對(duì)策2010/12/09: 1.沒有回收到DNA片段如在洗脫后，發(fā)現(xiàn)洗脫液中沒有DNA片段，請(qǐng)檢查是否按瓶身標(biāo)簽，在洗滌液中加入了無水乙醇。2.提取率低1）融膠液為酸性緩沖液，如融膠后，其pH值升高將影響提取得率。請(qǐng)加入0.1倍體積的3M乙酸鉀（pH5.0）。2）長時(shí)間使用后沒有更換的電泳緩沖液，其pH值較高，將影響DNA的吸附。請(qǐng)更換新的電泳緩沖液后，再進(jìn)行電泳，然后切膠。3）回收片斷大小影響回收效率（見下圖）；4）在洗脫前，將洗脫液于30～60℃溫浴，可提高提取效率適當(dāng)延長洗脫時(shí)間可增加回收效率。5）正確估計(jì)膠大小，確

化學(xué)發(fā)光免疫測定（CLIA）技術(shù)2010/12/07: 化學(xué)發(fā)光免疫測定（ChemiluminesentImmunoassay,CLIA）是免疫測定技術(shù)繼酶免技術(shù)（EIA）、放免技術(shù)（RIA）、熒光免疫技術(shù)（FIA）和時(shí)間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）之后發(fā)展的一項(xiàng)新興測定技術(shù)。要談化學(xué)發(fā)光免疫測定技術(shù)就必須先談化學(xué)發(fā)光?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)是近二、三十年來發(fā)展起來的一種測定方式，其利用化學(xué)反應(yīng)釋放的自由能激發(fā)中間體（常用堿性磷酸酶－金剛烷胺），使其從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)，當(dāng)中間體從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)會(huì)釋放等能級(jí)的光子，對(duì)光子進(jìn)行測定而進(jìn)行定量分析?；瘜W(xué)發(fā)光具有熒光

降鈣素原（PCT）檢測及臨床意義2010/12/07: 一、概述PCT是無激素活性的降鈣素前肽物質(zhì)，由116個(gè)氨基酸組成，分子量為13KD的糖蛋白。PCT的半衰期為25~30小時(shí)，在體外穩(wěn)定性很好。健康人血漿PCT含量極低（＜0.1ng·ml-1＝，0.5ng·ml-1被認(rèn)為是檢測感染性疾病診斷的分界值。PCT選擇性地對(duì)系統(tǒng)性細(xì)菌感染、真菌感染及寄生蟲感染有反應(yīng)，而對(duì)無菌性炎癥和病毒感染無反應(yīng)或僅有輕度反應(yīng)。許多學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，全身性細(xì)菌、真菌和寄生蟲感染時(shí)，PCT水平異常增高，增高的程度與感染的嚴(yán)重程度及預(yù)后相關(guān)，在全身性細(xì)菌感染和膿毒癥輔助鑒別診斷

測定血清中免疫球蛋白的臨床意義2010/12/07: 免疫球蛋白（Ig）是抗體的表現(xiàn)形式和物質(zhì)基礎(chǔ),是具有抗體活性和結(jié)構(gòu)相似的血清球蛋白。免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)是4條肽鏈,2輕2重,肽鏈之間由二硫鍵相聯(lián)結(jié)。任何一種免疫球蛋白,只有一類別的重鏈、輕鏈相同。根據(jù)重鏈的不同,免疫球蛋白分為IgG、IgA、IgM、IgD和IgE5種。免疫球蛋白由漿細(xì)胞、前漿細(xì)胞或淋巴細(xì)胞產(chǎn)生,在血漿和血管外體液中的分布大致相等。循環(huán)中的免疫球蛋白,每日約更換1/4。健康成人每日合成免疫球蛋白2～5g,但在發(fā)生感染時(shí),合成可增加7倍。正常成人血清中各種免疫球蛋的含量和某些特性

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