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人B病毒ELISA試劑盒操作步驟2015/12/11

操作步驟：編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）ELISA試劑盒加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液

肺炎衣原體ELISA法檢測步驟2015/12/09

肺炎衣原體感染廣泛存在于*，以隱性感染為主。其臨床表現多樣，主要引起人非典型肺炎，還可引起咽炎、支氣管炎、虹膜炎、肝炎、心內膜炎及結節(jié)性紅斑等，亦是艾滋病、白血病等疾病繼發(fā)感染的重要病原，且與冠心病的發(fā)生相關，嚴重威脅人類健康。常見檢查方法為ELISA法檢測肺炎衣原體抗體。ELISA試劑盒1.配制洗滌液l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內可置室溫環(huán)境中，長期可存于2—8℃環(huán)境中。2.配制酶聯物按1：101倍稀釋，即取1u1濃縮酶聯物加酶聯物稀釋液1000ul(根據檢測標本數量確定

常見的抗凝劑有哪些2015/12/07

做ELISA實驗收集血漿樣本時為什么要加抗凝劑？顧名思義，抗凝劑就是為了防止血液凝固的。加了抗凝劑后，血液在一定的時間內會保持原來的物理化學狀態(tài)。如果沒加抗凝劑，血漿是凝聚在一起的，不好測定。常見的抗凝劑有哪些，各自又有什么優(yōu)點？1.乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid，EDTA）鹽常用有鈉鹽或鉀鹽，能與血液中鈣離子結合成螯合物，使Ca2+失去凝血作用，阻止血液凝固。Na2C10H14O8N2+Ca2+→CaC10H12O8N2+2Na++2H+特點：對血細

免疫系統(tǒng)與腫瘤的相互關系2015/12/04

2002年，美國腫瘤生物學家希雷伯(R.DSchreiber)提出了一個稱之為“腫瘤免疫編輯”(CancerImmunoediting)的假說。根據免疫編輯理論，免疫系統(tǒng)不但具有排除腫瘤細胞的能力，而且還具有促進腫瘤生長的作用。癌細胞在機體內發(fā)生、發(fā)展是一個免疫系統(tǒng)與癌細胞相互作用的動態(tài)過程。在這個過程中，免疫系統(tǒng)在清除一些腫瘤細胞的同時，也對另一些腫瘤細胞的生物學特性(如腫瘤的抗原性)進行重塑(Reshape)，也即所謂的“免疫編輯”。被免疫編輯過的腫瘤細胞惡性程度越來越高，對免疫攻擊的抵抗力

酶聯免疫吸附法（ELISA）核小體測定2015/12/02

酶聯免疫吸附法（ELISA）核小體測定凋亡細胞的DNA斷裂使細胞質內出現核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA片斷組成，可由ELISA法檢測。（一）檢測步驟1、將凋亡細胞裂解后高速離心，其上清液中含有核小體；2、在微定量板上吸附組蛋白體’3、加上清夜使抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結合‘4、加辣過氧化物酶標記的抗DNA抗體使之與核小體上的DNA結合’5、加酶的底物，測光吸收制。（二）用途該法敏感性高，可檢測5*100/ml個凋亡細胞?？捎糜谌?、大鼠、小鼠的凋亡檢測。該法不需要特殊儀器，適合基層工

雜合二倍體的研究2015/11/30

(1)雜合二倍體的形成和誘發(fā)雜合二倍體是由兩個不同遺傳型的單倍細胞核融合產生的。雜合二倍體就在異核體菌落表面上形成與異核體菌落顏色不同的角變(扇形)或斑點分生孢子。挑取角變或斑點上的孢子，進行分離純化，可以得到純雜合二倍體的菌株。異核體自發(fā)核融合而形成雜合二倍體的頻率極低，常以人工誘發(fā)方法來提高頻率。采用天然樟腦蒸氣熏蒸或紫外線處理異核體的菌絲或者分生孢子，然后再繼續(xù)培養(yǎng)是常用的方法。(2)雜合二倍體的檢出雜合二倍體常常在異核體菌落上以角變或斑點形態(tài)出現，這種角變或斑點往往是野生型親本的孢子顏色

抗菌血清的制備2015/11/27

抗體是機體接受抗原刺激后產生的一種具有免疫特異性的球蛋白。在免疫學實踐，為制備抗體常以抗原性物質（細菌、病毒、類毒素、血清及其他蛋白質）給動物注射。經過一定時間后，動物血清中可以產生大量的特異性抗體。這種含有特異性抗體的血清稱為免疫血清。免疫血清不但對傳染病的診斷、預防和治療有重要意義，而且對器官移植，腫瘤以及某些科研工作也有重要意義?？贵w的產生通常與抗原的質和量、動物種類以及接種途徑有密切關系。因此在制備免疫血清時要根據抗原的不同選擇適宜的動物種類和免疫方法?？咕宓闹苽?.抗原的制備：標準

全血樣本收集的處理方法2015/11/25

全血根據收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。細胞1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。2、抗凝收集血漿:收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。選擇抗凝的注意點：①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一

組織培養(yǎng)細胞形態(tài)結構2015/11/23

一、培養(yǎng)細胞的形態(tài)結構組織培養(yǎng)細胞形態(tài)結構與體內細胞基本相同，但在大體形態(tài)以及某些細微結構方面仍存在著一定的差異。(一)形態(tài)分類根據細胞是否貼附于支持物上生長，形態(tài)有所不同。呈懸浮生長時，不論細胞原來源于體內何種類型細胞．由于生長在液體環(huán)境中，胞體基本呈圓形。大多數細胞是貼附型生長的。當細胞貼附在支持物上后，細胞分化現象常變得不顯著，易失去它們在體內時的原有特征．在形態(tài)上表現單一化的現象。貼附于支持物表面后，開始仍為圓形，但為時很短，很快便經過形態(tài)演變過渡成扁平形態(tài)。1．成纖維細胞型：此細胞形態(tài)

雙抗體夾心法檢測抗原實驗步驟2015/11/20

雙抗體夾心法檢測抗原雙抗體夾心法用于檢測抗原。它是利用待測抗原上的兩個抗原決定簇A和B分別與固相載體上的抗體A和酶標記抗體B結合，形成抗體A-待測抗原-酶標抗體B復合物，復合物的形成量與待測抗原含量成正比。實驗步驟1．用包被液稀釋包被抗體至合適濃度，包被酶聯板，每孔100μL。也可37℃，2小時包被，但此方法不建議使用。包被抗體即可以是單抗，也可以是多抗。但抗體的包被濃度應當通過預實驗確定。包被的板條可以在4℃保存數月。2．每孔加入100ul洗滌緩沖液，清洗酶聯板3-5次。3．10%小牛血清封閉

免疫熒光組織化學染色法2015/11/18

(一)免疫熒光組織化學原理將已知抗原或抗體標記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有標記的熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標本，熒光素受到激發(fā)光的照射會發(fā)出明亮的熒光(黃綠色或橘紅色)，熒光素受激發(fā)光照射，由低能態(tài)進入高能態(tài)，而高能態(tài)的電子不穩(wěn)定，以輻射光量子的形式釋放能量后，再回到原來的低能態(tài)，這時發(fā)出明亮的熒光。利用熒光顯微鏡可觀察熒光所在細胞或組織，從而確定抗原或抗體性質和定位，以及利用定量技術測定

豬免疫球蛋白G（IgG）分析定性樣本處理及要求2015/11/16

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬免疫球蛋白G（IgG）水平。用純化的豬免疫球蛋白G（IgG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入豬免疫球蛋白G（IgG），再與HRP標記的免疫球蛋白G（IgG）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白G（IgG）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中豬免疫球蛋白G（I

病毒轉化細胞實驗2015/11/13

病毒轉化細胞實驗(1)原理：很多病毒都有轉化細胞的作用，尤以致癌病毒zui為明顯。EB病毒(EBV)是近年來常用于轉化細胞的病毒。該病毒對人二倍體細胞的轉化效果，常用于建立淋巴細胞永生細胞系。人外周血B淋巴細胞膜上有。EB病毒受體，當EB病毒與受體結合后，B淋巴細胞可發(fā)生轉化，成為體外長期傳代生長的細胞系。(2)材料1)病毒：EB病毒液(取自培養(yǎng)的B95—8細胞)。2)轉化細胞：檸檬酸或肝素抗凝人外周血。3)細胞培養(yǎng)液：含20％胎牛血清的RPMI1640。4)抗生素：青霉素、鏈霉素和慶大霉素。5

DAB染色后切片著色一片黃的解決方案2015/11/11

解決方案：以上的分析可能對于初學者還是不容易的，下面我就把我的排除實驗的具體過程與大家進行分享、交流和討論。1、首先排除抗體孵育條件。一般來說，著色效果的好壞與抗體的孵育條件是密不可分的，由于用SP法已經做出來過一次且效果不錯，因此對于同樣組織的同一抗原進行分析，這種因素可以先排除。2、其次，DAB孵育時間是否太長？做出來那一次我是孵育8min，后來也是8-10min，我單獨做了一次實驗來排除該因素。結果孵育2.5min時先出現背景，而特異性染色較淺，故這不符合常理，一般先出現特異性染色，然后隨

ELISA實驗中標本的采取和保存2015/11/09

ELISA實驗中標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛，比如體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如血清、尿液），有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應

人腦紅蛋白操作步驟與注意事項2015/11/06

人腦紅蛋白操作步驟：1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支。2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液

細胞培養(yǎng)的污染途徑2015/11/04

污染途徑各種污染主要通過以下途徑和媒介發(fā)生：[1]空氣空氣是擴散微生物的主要途徑。由于空氣流動性大，在操作場地與外界隔離不嚴和消毒不充分的情況下，外界不潔空氣很容易侵入造成污染。因此，培養(yǎng)設施不宜置于通風場所?，F各實驗室普遍應用凈化工作臺，能產生無菌的屏障氣流，可防止不潔空氣污染。凈化工作臺使用過久，過濾層受塵埃堵塞情況下，工作時不帶口罩或外界氣流過強、污染空氣均可進入操作野，導致污染。又不同季節(jié)和不同地區(qū)空氣內含菌數不同；炎熱夏季尤其南方多雨地區(qū)空氣濕度大、含菌數量多，工作應特別注意?？諝馐遣?

血清保存注意事項2015/11/02

五月，由于天氣的轉熱，很多客戶購買血清不知道該放置多少度的溫度保存，實驗實解血清的保存溫度做了具體的注意要點分析。血清保存注意點：(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.(2)一般提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內一起過濾,切勿直接過濾血清.(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-

ELISA試劑盒制備方法2015/10/30

制備方法包括以下步驟：1)抗原表位的計算機篩選；2)抗原的制備；3)血清的采集；4)間接ELISA方法的建立；5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證；6)試劑盒的穩(wěn)定性驗證；7)對屠宰場進行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性合格、重復性好。應用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出感染豬的戊型肝炎病毒，適用于大批量發(fā)病樣本的檢測，可用于豬戊肝的快速診斷，并預防、控制豬戊肝病毒的流行和阻斷戊肝病毒由豬向人傳播。抗原常溫，避光含量測定*：二甲磺酸阿米三嗪規(guī)格:100mg常溫，避光含量測

ELISA法篩檢梅毒抗體2015/10/28

梅毒螺旋體抗體檢測作為輸血安全的必測指標，其試驗方法與試劑的選擇尤為重要，ELISA法篩檢梅毒抗體是目前普遍采用的方法，有關梅毒抗體ELISA試劑盒的評價報道較多，但多為靈敏度或特異度等少數評價指標［1，2］為了全面客觀地評價ELISA方法對無償獻血者梅毒抗體的篩檢價值，ELISA試劑盒篩檢的真實性和可靠性，筆者對我們常用的兩種篩檢試劑盒的檢測真實性、可靠性及Cut-off值的合理性進行評價，現報告如下。1材料與方法1.1材料梅毒抗體血清盤血清40份（購自衛(wèi)生部臨床檢驗中心，批號:200103，