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上海研生實(shí)業(yè)有限公司
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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/a>2015/10/26
一、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、深入了解ELISA法測定抗體效價的原理。2、掌握ELISA法測定單克隆抗體效價的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上,形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原,稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后,作用于底物使之呈色,根據(jù)顏色的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。ELISA法是免疫酶技術(shù)的一種,其特點(diǎn)是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板(或球)吸附抗原/抗體,
Percoll細(xì)胞分離液的作用原理與優(yōu)點(diǎn)2015/10/23
Percoll細(xì)胞分離液,適合分離細(xì)胞,亞細(xì)胞成分和大病毒(70S),滲透壓均勻,粘度低,可調(diào)至生理離子強(qiáng)度和pH,分離條件溫和,對細(xì)胞無毒性,可以滅菌消毒。1作用原理Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(2分離液的配置將1份10XPBS與9份Percoll貯存液混合,制成等滲Percoll懸液,此懸液被認(rèn)為是100%Percoll懸液,其密度為1.1294g/ml。用PBS或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋100%Percoll而獲得所需密度的Percoll分離液用于相應(yīng)細(xì)胞的分離。若分離
免疫熒光技術(shù)2015/10/21
免疫熒光是標(biāo)記免疫技術(shù)發(fā)展zui早的一種,它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù),通過將抗體與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。免疫熒光步驟包括,細(xì)胞固定和通透,封閉,孵育一抗,二抗等。除了這些基本步驟,以下建議可以幫助您獲得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1、細(xì)胞固定和通透為達(dá)到的檢測效果,細(xì)胞需要經(jīng)過固定和通透。這些步驟非常關(guān)鍵,細(xì)胞和抗原需要保證的結(jié)構(gòu),并利于抗體與抗原結(jié)合。通常情況下,需要通過以下步驟得以實(shí)現(xiàn):細(xì)胞用2%-4%多聚甲醛固定,之后用0.
探討免疫電鏡染色技術(shù)中的幾個問題2015/10/19
免疫電鏡集電子顯微技術(shù)與免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)于一體,能顯示抗原或抗體在細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)水平的位置,已成為當(dāng)今生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一項(xiàng)重要研究手段。由于免疫電鏡制作過程長,操作程序煩鎖,因此,要得到滿意的免疫金染色切片,必須在關(guān)鍵環(huán)節(jié)上給予注意,以下我們就免疫電鏡染色技術(shù)中的幾個問題進(jìn)行探討。1、染色標(biāo)本的固定理想的免疫電鏡標(biāo)本固定既要保存組織的抗原,又要具有良好的細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。對于多數(shù)抗原,按常規(guī)電鏡技術(shù)固定標(biāo)本會使其抗原性部分或*消失,因此,免疫電鏡常用一些特殊的固定液,如過碘酸鹽-賴氨酸-多聚甲醛固定液(
細(xì)胞株與細(xì)胞系的區(qū)別2015/10/16
一、細(xì)胞株細(xì)胞株(CellStrain):也就是說,細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后即為細(xì)胞系(cellline),由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限,可稱為有限細(xì)胞系(finitecellline),如可以連續(xù)培養(yǎng),則稱為連續(xù)細(xì)胞系(continuouscellline),培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。所以細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物
核酸探針標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)過程2015/10/14
實(shí)驗(yàn)原理分子生物研究中,zui常用的探針即為雙鏈DNA探針,它廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因植物拷貝數(shù)的鑒定、臨床診斷等方面。雙鏈DNA探針的合成方法主要有下列兩種:切口平移法和隨機(jī)引物合成法。切口平移法(nicktranslation)當(dāng)雙鏈DNA分子的一條鏈上產(chǎn)生切口時,E.coliDNA聚合酶Ⅰ就可將核苷酸連接到切口的3'羥基末端。同時該酶具有從5'→3'的核酸外切酶活性,能從切口的5'端除去核苷酸。由于在切去核苷酸的同時又在切口的3'端補(bǔ)上核苷酸,從而使切口沿著DNA鏈移動,用放射性核苷酸代替原先無放
活體生物發(fā)光成像技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域2015/10/12
活體生物發(fā)光成像技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域活體生物發(fā)光成像技術(shù)是一項(xiàng)在某些領(lǐng)域有不可替代優(yōu)勢的技術(shù),比如腫瘤轉(zhuǎn)移研究、藥物開發(fā)、基因治療、干細(xì)胞示蹤等方面。1.腫瘤學(xué)活體生物發(fā)光成像技術(shù)能夠讓研究人員能夠直接快速的測量各種癌癥模型中腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移以及對藥物的反應(yīng)。其特點(diǎn)是*的靈敏度使微小的腫瘤病灶(少到幾百個細(xì)胞)也可以被檢測到,比傳統(tǒng)方法的靈敏度大大提高了;非常適合于腫瘤體內(nèi)生長的定量分析;避免由于宰殺老鼠而造成的組間差異;節(jié)省動物成本。由于以上特點(diǎn),使基于轉(zhuǎn)移模型、原位模型、自發(fā)腫瘤模型等方面的腫瘤學(xué)研
elisa試劑盒的種類與區(qū)別2015/10/09
1、細(xì)胞因子檢測試劑盒:如白介素、選擇素、集落刺激因子,腫瘤壞死因子,干擾素,轉(zhuǎn)化生長因子,趨化因子,細(xì)胞因子受體,粘附分子,生長因子,凋亡因子等等2、肝纖維化檢測elisa試劑盒:如纖維連接蛋白,透明質(zhì)酸,膠原,基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子,elisa試劑盒基質(zhì)金屬蛋白酶,層粘蛋白等等3、心肌梗塞檢測elisa試劑盒:如肌鈣蛋白,肌紅蛋白,C-反應(yīng)蛋白等等4、內(nèi)分泌檢測elisa試劑盒如甲狀腺,胰腺,性激素,孕酮,睪酮,生長激素,生長抑素,內(nèi)皮素,皮質(zhì)醇,骨鈣素,催乳素,促腎上腺皮質(zhì)激素,促卵泡素,
ELISA檢測試劑盒檢測方法2015/10/07
ELISA檢測試劑盒檢測方法簡述:1)間接法測抗體:將特異性抗原包被在固相載體上,形成固相抗原,加入待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗體),其中抗體與固相抗原形成抗原-抗體復(fù)合物,再加入酶標(biāo)記的抗體(抗人免疫球蛋白抗體,亦稱二抗),與上述抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。此時加入底物,復(fù)合物上的酶則催化底物而顯色。雙抗體夾心法測抗原:將已知的特異性抗體包被在固相載體上,形成固相抗體,加入待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗原),抗原與固相抗體結(jié)合成復(fù)合物,再加入特異性酶標(biāo)抗體,使之與已形成的抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合,當(dāng)加入與酶相應(yīng)的底物時,酶催
純上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法2015/09/30
因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長,另外人或小鼠表皮在以3T3細(xì)胞為飼養(yǎng)層(用射線照射后)時,細(xì)胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象。降低PH、Ca2含量和溫度,向培養(yǎng)基中加入表皮生長因子,均有利于表皮細(xì)胞生長。以表皮細(xì)胞為例,用皮膚表皮和分離培養(yǎng)法可獲得純上皮細(xì)胞,方法如下:1、取材:外科植皮或手術(shù)殘余皮膚小塊,早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮膚更好,去角化層薄者,切成0.5-1平方厘米小塊。2、置0.02%EDTA中,室溫,5分鐘。3、換入0.25%胰蛋白酶中,4攝氏度。4、分離:取出皮塊,用血管鉗或鑷子將表皮
辨別ELISA試劑盒是否造假的方法2015/09/28
Ⅰ.利用干擾實(shí)驗(yàn)即可辨別ELISA試劑盒是否檢測目的抗原,方法如下:(1)將針對試劑盒特異性的重組蛋白抗原和試劑盒中的檢測抗體配置成antibody:antigen≈1:2的混合孵育液(2)37℃孵育15分鐘后,代替原試劑盒中的檢測抗體(3)后續(xù)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行,加檢測抗體、酶復(fù)合物和底物(4)實(shí)驗(yàn)完畢后,檢測其標(biāo)準(zhǔn)曲線,如果標(biāo)準(zhǔn)曲線良好則說明加入的目的抗原和試劑盒抗體不匹配,試劑盒檢測抗體針對的是非目的抗原,該試劑盒為偽劣假造ELISA試劑盒。(5)如果標(biāo)準(zhǔn)曲線無線性,則說明試劑盒檢測
ELISA定性測定與定量測定2015/09/25
結(jié)果判斷1.定性測定定性測定的結(jié)果判斷是對受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,其實(shí)質(zhì)仍是一個定性試驗(yàn)。在這種半定量測定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),呈陽性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性更具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中,陽性
DNA的甲基化可引起基因的失活2015/09/23
要讓體細(xì)胞重新恢復(fù)到未分化的狀態(tài)需要解決的一個問題就是DNA甲基化的問題,所以說DNA去甲基化問題成為誘導(dǎo)iPS的一個重要難題。為了研究iPS誘導(dǎo)過程中的相關(guān)機(jī)制,HelenM.Blau院士的研究小組構(gòu)建了一個異核體細(xì)胞(融合了小鼠胚胎干細(xì)胞和人類成纖維細(xì)胞),這種異核體誘導(dǎo)的速度比正常的體細(xì)胞誘導(dǎo)速度快很多,僅需1天時間,誘導(dǎo)效率高達(dá)70%。用RNAi進(jìn)行掃描發(fā)現(xiàn),異核體誘導(dǎo)啟動依賴一種蛋白,這種蛋白是AID(胞嘧啶核苷脫氨酶,也稱為AICDA)。AID不僅促進(jìn)細(xì)胞重排過程中的脫甲基作用,更是
SH2B對生長、代謝和壽命調(diào)控的功能進(jìn)化2015/09/21
SH2B是一類含有SH2(Srchomology2)和PH(pleckstrinhomology)結(jié)構(gòu)域的信號接頭蛋白(Adaptor),在生長發(fā)育、代謝平衡和免疫調(diào)節(jié)等多方面發(fā)揮重要的調(diào)控作用。在哺乳動物中,SH2B家族成員SH2B1能夠促進(jìn)脂肪因子瘦素在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能,是體重調(diào)節(jié)的重要調(diào)控因子。zui近人類全基因組掃描研究表明,SH2B1與肥胖和2型糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)。ELISA試劑盒研究團(tuán)隊成員-美國密歇根大學(xué)芮良優(yōu)教授的合作研究成果,揭示了信號接頭蛋白SH2B1對生長發(fā)育
細(xì)胞凍存與復(fù)蘇方法2015/09/18
細(xì)胞凍存方法1.細(xì)胞:選對數(shù)生長期細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時前換液一次。2.計數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以
原核細(xì)胞和真核細(xì)胞進(jìn)化階段2015/09/16
原核細(xì)胞和真核細(xì)胞是細(xì)胞的兩大基本類型,它們反映細(xì)胞進(jìn)化的兩個階段。把具有細(xì)胞形態(tài)的生物劃分為原核生物和真核生物,是現(xiàn)代生物學(xué)的一大進(jìn)展。原核細(xì)胞的主要特征是沒有線粒體、質(zhì)體等膜細(xì)胞器,染色體只是一個環(huán)狀的DNA分子,不含組蛋白及其他蛋白質(zhì),沒有核膜。原核生物包括細(xì)菌和藍(lán)菌,它們都是單生的或群體的單細(xì)胞生物。細(xì)菌是只有通過顯微鏡才能看到的原核生物。大多數(shù)細(xì)菌都有細(xì)胞壁,其主要成分是肽聚糖而不是纖維素。細(xì)菌的主要營養(yǎng)方式是吸收異養(yǎng),它分泌水解酶到體外,將大分子的有機(jī)物分解為小分子,然后將小分子營養(yǎng)
癌細(xì)胞生理性質(zhì)的方法2015/09/14
大多數(shù)癌癥致死原因是由于癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移性。一旦轉(zhuǎn)移,癌細(xì)胞的遺傳和生理性質(zhì)都會改變。之前研究都關(guān)注轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞的遺傳學(xué)變化,但是很難研究其生理變化。zui近MIT科學(xué)家開發(fā)出一種能夠研究癌細(xì)胞生理性質(zhì)的方法。該方法檢測癌細(xì)胞的三種關(guān)鍵性質(zhì),細(xì)胞的質(zhì)量,硬度和摩擦性??茖W(xué)家應(yīng)該該方法分析了這些性質(zhì)如何變化才能導(dǎo)致癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新位置:科學(xué)家之前發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移性的細(xì)胞形態(tài)通常不規(guī)則,但是MIT研究人員發(fā)現(xiàn)降低細(xì)胞摩擦性也會幫助癌細(xì)胞通過狹窄通道,推測摩擦性也在癌細(xì)胞通過血管到達(dá)新位置的過程中扮演重要角色。相
暈針的幾個因素2015/09/11
暈針是在采血過程中出現(xiàn)的一種血管性暈厥,主要表現(xiàn)為:頭暈、面色蒼白、惡心嘔吐、大汗淋漓、重者可能出現(xiàn)意識喪失、血壓下降、休克等癥狀,如不及時處理可能會導(dǎo)致嚴(yán)重后果。ELISA試劑盒暈針主要有以下幾個方面的因素1.精神因素體檢者由于精神過度緊張,恐懼,反射性引起迷走神經(jīng)興奮,血壓下降,腦部供血不足而發(fā)生暈針。此類人一般很少去醫(yī)院打針吃藥,適應(yīng)環(huán)境,心里承受力差自我調(diào)節(jié)能力相對較差?;?qū)Τ檠R了解甚少,認(rèn)為抽血后會損害身體。或是少數(shù)人是招工體檢擔(dān)心體檢不合格進(jìn)不了廠。2.機(jī)體狀態(tài)體質(zhì)較弱者,營養(yǎng)不
血清的鑒別方法及作用2015/09/09
鑒別方法:血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應(yīng)被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。凝血塊收縮,其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清,也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊,所以血清中無纖維蛋白原,這一點(diǎn)是與血漿zui大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中,血小板釋放出許多物質(zhì),各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)
如何正確的凍存細(xì)胞2015/09/07
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一?,F(xiàn)在我們就來講講如何正確的凍存細(xì)胞:一、材料(一)儀器1.凈化工作臺2.離心機(jī)3.恒溫水浴箱4.冰箱(4℃、-20℃、-70℃)5.倒置相差顯微鏡6.培養(yǎng)箱7.液氮冰箱(二)玻璃器皿1.吸管(彎頭、直頭)2.培養(yǎng)瓶3.玻璃瓶(250ml、100ml)4.廢液缸(三)塑料器皿1.吸頭2.槍頭3.膠塞4.移液管(10ml)5.15ml離心管6.凍存管(1~2ml)(四)其他物品1.微量加樣槍2.紅血球計數(shù)板3.記號筆4.醫(yī)用橡皮膏5.移液槍(五)試劑1.D-Hank
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