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埃希菌屬生物學性狀2016/02/01

埃希菌屬（Escherichia）的細菌一般不致病，為腸道中的正常菌群，其中以大腸埃希菌（E.Coli，簡稱大腸桿菌）zui為重要。大腸桿菌在嬰兒出生后數(shù)小時就進入腸道并伴隨終身，在腸道中能合成維生素B和維生素K等供人體利用。當人體免疫力下降或本菌侵入腸外組織或器官時，可引起腸道外感染。某些血清型菌株有致病性，在腸道內(nèi)可引起感染，導致腹瀉，稱為致病性大腸桿菌。一、生物學性狀（一）形態(tài)與結(jié)構(gòu)大小為（0.5～0.7μm）×（1～3μm），革蘭陰性桿菌（，多數(shù)細菌有周身鞭毛和菌毛。有些菌株有多糖類包膜

干細胞分離純化2016/01/29

CD34是目前較為*的干細胞的表面標志，故一般將CD34抗原作為干細胞分離純化的主要標志。1.骨髓及外周血CD34十細胞的陽性富集利用各種方法分選出CD34十細胞，具體方法。2.骨髓及外周血CD34十細胞的陰性富集利用各種方法去除成熟的血細胞及免疫活性細胞，從而達到造血干/祖細胞的富集，即為陰性富集。由于骨髓、外周血中各種細胞成分的密度及比重不同，使用密度梯度分離可將其分成不同組分，在低密度層中含有富集的造血干/祖細胞。3.臍血干細胞的純化目前常用的臍血造血干/祖細胞的分離純化方法概括起來有以下

雷帕霉素的功效2016/01/27

雷帕霉素（Rapamyein）是一種免疫抑制藥，當人體移植了新的腎臟或其他器官后，會自然產(chǎn)生排異，而它能抑制這種反應。ELISA試劑盒自1999年，美國食品和藥物管理局（FDA）批準雷帕霉素作為器官移植患者的藥物，迄今已拯救了數(shù)以萬計的移植患者的生命。此外，它還被應用于多種用途，如藥廠用于心臟支架的涂層材料上，用于防止產(chǎn)生癲痕組織，出現(xiàn)再狹窄。和青霉素一樣，雷帕霉素是一種生物制劑，因此無法獲得，但它的衍生品可以，目前它的衍生品已經(jīng)獲得批準用于治療某些癌癥：腎癌、肺癌和乳腺癌。近10多年來，研究證

培養(yǎng)基的制備方法2016/01/25

(一)培養(yǎng)基的制備方法1．選定培養(yǎng)基配方，制備培養(yǎng)基記錄首先查閱資料，確定培養(yǎng)基的配方，同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標準方法，應嚴格按其規(guī)定進行配制外，一般均應盡量搜集有關(guān)資料，加以比較核對，再依據(jù)自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。檢查配制培養(yǎng)基所用的材料、試劑是否齊全，數(shù)量及質(zhì)量(純度、期限)是否合格；同時還要準備好配制培養(yǎng)基所用的各種設(shè)備和裝置。微生物檢驗實驗室需要經(jīng)常配制不同種類的培養(yǎng)基．有必要建立培養(yǎng)基的制備記錄。記錄主要包括培養(yǎng)基名稱、配方、試劑來

微生物的產(chǎn)能代謝2016/01/22

代謝(metalsolism)是推動生物一切生命活動的動力源，通常指細胞內(nèi)發(fā)生的各種化學反應的總稱，包括合成代謝(同化作用)和分解代謝(異化作用)。微生物不停地從外界環(huán)境吸收適當?shù)臓I養(yǎng)物質(zhì)，在細胞內(nèi)合成新的細胞物質(zhì)和儲藏物質(zhì)，并儲存能量，即同化作用，這是其生長、發(fā)育的物質(zhì)基礎(chǔ)；同時，又把衰老的細胞物質(zhì)和從外界吸收的營養(yǎng)物質(zhì)分解變成簡單物質(zhì)，并產(chǎn)生一些中間產(chǎn)物作為合成細胞物質(zhì)的原料，zui終將不能利用的廢物排出體外，以熱量的形式散失一部分能量，即異化作用。在物質(zhì)代謝的過程中伴隨著能量代謝的進行，在

滲漏缺陷型在推理育種中的應用2016/01/20

(1)在初級代謝產(chǎn)物推理育種中的應用利用營養(yǎng)缺陷型來阻斷代謝流或切斷支路代謝．使代謝途徑朝著有益產(chǎn)物合成方向進行，還可以解除協(xié)同反饋效應，以積累支路代謝某一末端產(chǎn)物。①在直線式生物合成途徑中，營養(yǎng)缺陷型不能累積終產(chǎn)物，只能累積中間產(chǎn)物。一個典型的例子是谷氨酸棒狀桿菌的精氨酸缺陷型突變株進行鳥氨酸發(fā)酵。由于合成途徑中酶⑥的缺陷，導致必須供應精氨酸和胍氨酸，菌株才能生長。但這兩種氨基酸的供應要維持在亞適量水平，使菌體維持較高水平，而又不引起終產(chǎn)物對酶②的反饋抑制，從而使鳥氨酸得以大量分泌累積。ELI

鳴胚成纖維細胞的培養(yǎng)2016/01/18

鳴胚成纖維細胞具有相對容易獲得、增殖能力強、適應性強、良好的耐受性、性狀比較穩(wěn)定等特點，使得其被廣泛地應用于分子和細胞生物學研究的許多方面。一，材料1.孵育10d雞胚2只。2．培養(yǎng)用液含10％CS的MEM、O．25％胰酶、PBS、D—Hanks液、CS等。3．器皿與儀器鑷子、眼科剪、各種吸管、培養(yǎng)瓶、顯微鏡、培養(yǎng)皿、三角燒瓶、離心管、不銹鋼網(wǎng)、細胞計數(shù)器等。二、方法1．取雞胚取10d雞胚于蛋架上，用75％乙醇消毒蛋殼，用剪刀和鑷子去除氣室部蛋殼，用無菌彎頭小鑷輕輕取出雞胚，并放人無菌平皿中。2．

Elisa 標準操作要點2016/01/15

一.Elisa標準操作要點的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證Elisa檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。Elisa中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導率小于1.5μs/cm。1.標本的采取和保存大部分Elisa檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會

鑒定PCR擴增產(chǎn)物的實驗步驟2016/01/13

實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產(chǎn)物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗）本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（AgaroseGelDNAPurificationKit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了*的凝膠融解系統(tǒng)，結(jié)合DNA制備膜技術(shù)，具有、快速、方便的特點，全套操作只需30min便可完成。使用該試劑盒每次可純化得到多至10µg的DNA片段（100bp～30kb），回收率高達50～80%。本試劑盒回收純化的DNA片段純度高，完整性好，可直接

細胞系（株）的鑒定方法2016/01/08

(一)形態(tài)學鑒定1．光學顯微鏡檢查(1)培養(yǎng)瓶(皿)或培養(yǎng)板直接置于倒置顯微鏡下觀察，上皮細胞呈多邊形，邊界清晰，大小規(guī)則，核呈圓形，核質(zhì)比例小，細胞間排列整齊，為單層培養(yǎng)物，無重疊生長，是正常上皮組織來源；成纖維細胞呈長梭形，核小而圓，細胞排列規(guī)則、整齊，為單層培養(yǎng)物，無重疊生長，是正常間質(zhì)組織來源。腫瘤組織來源的貼壁細胞，其單層培養(yǎng)物呈多層重疊生長。(2)細胞染色檢查：將無菌小玻片(O．5cm×2cm)于細胞傳代接種前放人培養(yǎng)瓶皿內(nèi)，接種細胞懸液后培養(yǎng)，在玻片上制備培養(yǎng)的單層細胞，然后將載有

葡萄糖一6一磷酸酶2016/01/06

(一)原理葡萄糖一6一磷酸酶(glucose-6-phosphatase)是滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的標志酶。葡萄糖6一磷酸酶是糖異生途徑的關(guān)鍵酶，其轉(zhuǎn)錄的多少，決定著糖異生的速度。ELISA試劑盒(二)材料1．標本組織切片。2．Tris一馬來酸緩沖液(pH6．5)(1)A液：取Tris1．2g、馬來酸1．16g，溶于100ml蒸餾水中。(2)B液：0．2mol／LNaOH溶液(將0．8gNaOH溶于lOOml蒸餾水即成)。取A液25ml，B液約20ml，調(diào)pH至6．5后，加蒸餾水至100ml。3．工作液須于

NK細胞的殺傷活性檢測2016/01/04

(一)原理以NK細胞為例。將待測者外周血中的NK細胞與靶細胞(K562細胞)按一定比例混合培養(yǎng)一定時間，NK細胞作用于靶細胞，使靶細胞被殺死、破壞，進而使靶細胞線粒體內(nèi)的乳酸脫氫酶釋放出來．使底物發(fā)生顏色變化，其顏色深淺與酶的釋放量成正比，檢測顯色后的光密度OD值，便可推算出NK細胞的殺傷活性。(二)材料1．待檢者肝素抗凝血，靶細胞為K562細胞。2．RPMI1640培養(yǎng)液、淋巴細胞分離液。3．酶標儀、離心機。(三)方法1．用含5％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液將靶細胞調(diào)整到5×104～2×1

抗腫瘤藥物敏感性檢測實驗方法2015/12/31

抗腫瘤藥物敏感性檢測實驗方法繁多，大體上分為體內(nèi)和體外兩類方法。各種方法各有其優(yōu)點和局限性，使用某一種方法難以確定藥物抗癌作用，應根據(jù)實際情況選擇適當?shù)姆椒?。本章分別介紹體外抗腫瘤藥物敏感試驗及體內(nèi)抗腫瘤藥物敏感試驗。其中，體外抗腫瘤藥物敏感試驗包括四噻唑藍法藥物敏感試驗、致死細胞染色法藥敏試驗、3H—TdR摻人法藥物敏感試驗、染料排斥試驗法、生長曲線測定法、集落形成試驗法和三磷酸腺苷生物發(fā)光法。體內(nèi)抗腫瘤藥物敏感試驗包括裸鼠移植瘤試驗和小鼠腎包膜下腫瘤移植試驗。腫瘤患者常因腫瘤病因和類型不同以

胰蛋白酶液的配制方法2015/12/28

消化液常在貼附型細胞原代培養(yǎng)或傳代培養(yǎng)過程中用來分散組織或細胞團，以達到離散細胞，獲得細胞懸液的目的。目前常用的消化液主要有胰蛋白酶消化液、膠原酶消化液以及乙二胺四乙酸二鈉(EDTA—2Na)液。其中，胰蛋白酶溶液是使用范圍zui廣的消化液；EDTA—2Na由于消化能力較弱，常與胰蛋白酶混合使用；膠原酶則多用于原代培養(yǎng)中將特殊組織的細胞與膠原成分的分離。一般來說，這些消化液可以單獨使用，也可以按一定比例混合使用，這主要取決于處理細胞類型的不同。1)胰蛋白酶液胰蛋白酶(Trypsin)是一種黃白色

天然培養(yǎng)基的評價2015/12/25

和其他天然培養(yǎng)基一樣，血清也能在實驗室自己制備，尤其制備小動物血清，因用量較少，是比較容易的。采血可用注射器從動物體表大的靜脈或動脈直接抽血采集。若從動脈采集，一般需用等麻醉動物，解剖出動脈或心臟再抽血，然后立即注入無菌管中，室溫靜置，待凝血堅實血清析出后，吸出上清，3000～4000r／min離心；然后再分離一次上清，即可應用。制備中一切操作如不能做到*無菌，則zui終血清尚須通過0．22μm微孔濾膜濾過處理。血清是比較黏稠液體，濾過緩慢，比較麻煩。因此操作中保證做到無菌。一般細胞培養(yǎng)多用牛血

細胞系的維持須注意4點2015/12/23

細胞系的維持是培養(yǎng)工作重要內(nèi)容。通過換液、傳代、再換液、再傳代和細胞凍存實現(xiàn)細胞系的維持，但對每一個細胞系來說都有其自身特點。①細胞系檔案要記錄好，如組織來源，生物學特性，培養(yǎng)液要求、傳代、換液時間和規(guī)律，細胞的遺傳學標志，生長形態(tài)，常規(guī)病理染色的標本等。這些記錄對于保證細胞正常生長，保持細胞的一致、觀察長期體外培養(yǎng)后細胞特性的改變都有十分重要的意義。因此，無論在索取新細胞系還是自己建立新細胞系時都要盡可能把上述資料收集齊全。②細胞系的傳代、換液一般都有自身的規(guī)律性，因此在維持傳代時要注意保持其

定位復合體中的蛋白2015/12/21

這項研究使研究人員能夠定位該復合體中的蛋白，并對肌肉收縮的過程進行分析。ELISA試劑盒研究還能幫助人們了解一些心臟病中的遺傳學突變對肌動蛋白-肌球蛋白-原肌球蛋白復合體的影響。肌肉的基本功能單位被稱為肌小節(jié)，由肌動蛋白、肌球蛋白和原肌球蛋白組成。肌肉收縮時，肌球蛋白要能夠與纖維狀的肌動蛋白分子一同滑動。此時原肌球蛋白與肌鈣蛋白共同作用，通過控制肌球蛋白結(jié)合肌動蛋白的時機來調(diào)節(jié)肌肉收縮。而在靜止狀態(tài)，原肌球蛋白和肌鈣蛋白阻斷肌球蛋白在肌動蛋白纖維上的結(jié)合位點。這時肌球蛋白頭部成90度角。只有在鈣

人GFAP 免疫組化試劑盒2015/12/18

人GFAP免疫組化試劑盒該試劑盒以HRP標記的鏈霉親和素復合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性GFAP抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的GFAP一抗與相應靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，zui后加入HRP-SA，形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA復合物，顯微鏡下觀察成像。試劑盒所含試劑：試劑A通透液：0.1%Triton-X10010mL（選用）試劑B封閉緩沖液（封

正確的使用ELISA試劑盒的步驟2015/12/16

很多人在做檢測的時候，都不太在意ELISA試劑盒中的說明書上的檢測步驟，覺得自己都知道，都懂的。但就是因為這種心態(tài)，所以造成有時候的檢測結(jié)果出現(xiàn)失誤。生物檢測本來就是個很嚴肅并且嚴謹?shù)氖虑?，你的一個小的疏忽可能就會造成意想不到的錯誤。正確的使用ELISA試劑盒的步驟：1.在使用之前要將試劑充分的混合均勻，但是要注意在搖晃的時候不要產(chǎn)生過多的泡沫，從而造成有太多的空氣進入試劑中，產(chǎn)生測試誤差。2.根據(jù)要檢測樣品的數(shù)量來確定的板條數(shù)。每個比對的樣品和空白孔是做復孔，而樣品的數(shù)量就可以自己視情況而定，

細胞培養(yǎng)基本要點2015/12/14

（一）準備和安裝過濾器清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20min進行高壓滅菌處理。在超凈臺內(nèi)打開過濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾，過濾后要檢查濾膜是否完好無損。（二）合成培養(yǎng)基的配制1、根據(jù)細胞目錄中的說明，按下表選擇合適品牌及貨號的培養(yǎng)基干粉，用適量超純水充分溶解。2、按要求添加碳酸氫鈉、谷氨酸鈉、HEPES等，充分攪拌使之溶解。3、調(diào)pH至7.2左右。4、加水至zui終體積。5、在超凈臺中對