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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第14年
小鼠ELISA試劑盒操作時(shí)應(yīng)注意安全性2018/04/11
小鼠ELISA試劑盒樣本制備及注意事項(xiàng):1)細(xì)胞培養(yǎng)上清:2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘后取上清。2)組織勻漿:切割標(biāo)本后,稱重,按1:9生理鹽水勻漿,5000轉(zhuǎn)/分離心3-5分鐘后取上清。3)血清:樣本室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后取上清。4)血漿:可用EDTA、枸櫞酸鈉或肝素作為抗凝劑(根據(jù)試劑盒要求選擇),樣本加入10%抗凝劑混合10-20分鐘,2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘后取上清;5)尿液、胸水、腹水、腦積液等2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘后取上清。操作時(shí)應(yīng)注意安全性:1
大鼠ELISA試劑盒技術(shù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)2018/04/09
大鼠ELISA試劑盒技術(shù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)1.讀板時(shí)板底不清潔:難免洗板后板底有水漬,這也可能導(dǎo)致讀數(shù)不準(zhǔn)。2.溫育溫度的選擇說明書表明的溫度可有兩種(①37℃下1小時(shí)、②43℃下45分鐘),從免疫測定的抗原抗體反應(yīng)的本質(zhì)來看,在較低的溫度下反應(yīng)較長的時(shí)間zui為*。上海恒遠(yuǎn)生物建議在臨床ELISA測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應(yīng)時(shí)間的條件。3.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉:曾用洗瓶直接沖洗板。后來雖然也用槍逐孔洗板,但對(duì)此注意不夠。4.加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡:終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加
大鼠ELISA試劑盒采樣操作的注意事項(xiàng)2018/04/08
大鼠ELISA試劑盒采樣操作的注意事項(xiàng)1、生化培養(yǎng)箱盡可能地安裝于溫濕度變化較小的地方,使用三腳插頭?插座應(yīng)妥善接地。2、生化培養(yǎng)箱啟動(dòng)前應(yīng)全面熟悉和了解各組成配套儀器、儀表的說明書、掌握正確的使用方法。3、嚴(yán)禁含有易揮發(fā)性化學(xué)溶劑?爆炸性氣體和可燃性氣體置于箱內(nèi),培養(yǎng)箱附近不可使用可燃性噴霧劑?以免電火花引燃。4、經(jīng)常檢查氣路有無漏氣現(xiàn)象。5、生化培養(yǎng)箱有斷電保護(hù)功能,因此壓縮機(jī)停機(jī)后再次啟動(dòng)要達(dá)一分半鐘左右,從而更好的保護(hù)好壓縮機(jī)。6、生化培養(yǎng)箱的冷凝器與墻壁之間距離應(yīng)大于100mm,箱體側(cè)
人ELISA試劑盒使用中遇到的常見問題2018/04/04
人ELISA試劑盒使用中遇到的常見問題:1、如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于2——8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷
大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)稀釋血清的步驟2018/04/02
大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)稀釋血清的步驟:先把蛋白稀釋一定的倍數(shù),比如說10倍、20倍稀釋(這樣可以大體確定一個(gè)參數(shù)),將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板,再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌,再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng),經(jīng)孵育洗滌后,加底物溶液顯色,終止反應(yīng)后分別測定O.D值,選擇O.D值≥1.0的那個(gè)抗原稀釋度為*適包被濃度。一般總是要選擇那個(gè)O.D值稍大于1.0,而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求使用注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分
人ELISA試劑盒標(biāo)本的采集與保存2018/03/30
人ELISA試劑盒標(biāo)本的采集與保存:1.血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01mol/L,pH=7.2-7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織不對(duì)應(yīng)體積的
大鼠ELISA試劑盒操作步驟及方法2018/03/28
大鼠ELISA試劑盒操作步驟及方法1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.
小鼠ELISA試劑盒樣本的采納和保存辦法小結(jié)2018/03/26
小鼠ELISA試劑盒樣本的采納和保存辦法小結(jié):可用作ELISA測定的標(biāo)本非常廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測定其間某種抗體或抗原成份。重復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)下跌,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少數(shù)分裝冰存。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超越一周測定的需低溫冰存。如在冰箱中保存過久,其間的可發(fā)作聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)留心無菌操作,也可參加恰當(dāng)防腐劑。除特別情況外,在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測
人ELISA試劑盒雙抗原夾心法測抗體2018/03/23
人ELISA試劑盒雙抗原夾心法測抗體反響辦法與雙抗體夾心法相似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶聯(lián)絡(luò)物,以檢查相應(yīng)的抗體。與直接法測抗體的不一樣的地方為以酶標(biāo)抗原替代酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋,可直接用于測定,因而其敏感度相對(duì)高于直接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢查常選用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原構(gòu)造的不一樣,尋找合適的符號(hào)辦法。只需獲得對(duì)于受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶聯(lián)絡(luò)物而樹立此法。如抗體的來歷為抗血清,包被和酶標(biāo)用的抗體別離取自不一樣種屬的動(dòng)物。如運(yùn)
小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的技術(shù)分析2018/03/21
小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的技術(shù)分析認(rèn)為抗體是一個(gè)對(duì)某病原具有特異性的抗體,則ELISA試劑盒該抗原或該抗體的效果,能夠用來幫忙區(qū)分,供給血清的個(gè)別,是不是感染或早年感染過這個(gè)病原。ELISA測定方式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、比賽抑制法,其間比賽抑制法(HBeAb,HBcAb等選用)因受操作時(shí)差所導(dǎo)致的比賽等因素的影響,效果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難操控。不一樣批次查看試劑盒在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致,即使是通過批批檢的項(xiàng)目其查看效果也存在差異,因而有必要選
人ELISA試劑盒詳解樣品的各步操作方法2018/03/19
人ELISA試劑盒詳解樣品的各步操作方法:A、細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。B、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,1000×g離心30分鐘去除顆粒。C、血清:操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,使用不含熱原的試管,收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。D、組織勻漿:將組織加入適量鹽水搗碎,1000×g離心10分鐘,取上清液。E、保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍,盡可能的不要使用溶血或高血脂血,如果血清中大
小鼠ELISA試劑盒經(jīng)驗(yàn)總結(jié)2018/03/16
小鼠ELISA試劑盒經(jīng)驗(yàn)總結(jié):1、包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)別,所以保存抗原很重要,我做重組蛋白時(shí),師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。還有有的包被原可能不是蛋白,對(duì)于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對(duì)其改造再加以包被,我把方法簡要的列出如下:①親和素生物素:先親和素先包被載體,加入生物素化的DNA,這種包被方法均勻、牢固,已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)。②脂類物質(zhì):可將其在有機(jī)溶劑(例如乙醇)中溶解后加入ELISA試劑盒板孔中,開
小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)樣本的收集方法2018/03/14
小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)樣本的收集方法1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此
大鼠ELISA試劑盒檢測結(jié)果的解釋2018/03/12
大鼠ELISA試劑盒檢測結(jié)果的解釋由于有相當(dāng)多的因素會(huì)影響檢測的結(jié)果,如不同的酶標(biāo)板,檢測試劑的體積,都會(huì)造成OD值的不同,因此,只有使用同一酶標(biāo)板反應(yīng)的試劑檢測結(jié)果才能比較和分析。對(duì)結(jié)果的臨床解釋請(qǐng)依照試劑盒的說明書進(jìn)行.酶標(biāo)儀結(jié)構(gòu)規(guī)格有40孔板,55孔板,96孔板等多種,不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板,對(duì)其可進(jìn)行一孔一孔地檢測或一排一排地檢測.酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得,也可用分光光度計(jì)相同的單色器來得到.在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也
人ELISA試劑盒測定步驟2018/03/09
人ELISA試劑盒測定步驟使用前將所有IL-6ELISA試劑盒和樣本平衡至室溫。推薦所有的樣本、標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)照測定雙份。1.準(zhǔn)備所有的試劑和工作標(biāo)準(zhǔn)品。2.取下多余的微量培養(yǎng)板條,放回裝有干燥劑的錫箔袋中,重新密封。3.每孔加入100ulAssayDiluentRD1W。4.每孔依次加入100ul標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和對(duì)照。用橡皮條密封。室溫孵化2小時(shí)。記錄測定標(biāo)準(zhǔn)和樣本的分布。5.吸棄孔內(nèi)液體,每孔400ul洗滌液,充分洗滌后*去除液體。在干凈的紙上拍干。反復(fù)洗滌4次。6.每孔加入200ulIL-6Con
大鼠ELISA試劑盒檢測步驟2018/03/09
大鼠ELISA試劑盒檢測步驟ELISA用血清來檢測,首先血液要經(jīng)過至少半個(gè)小時(shí)的凝集,然后取血清。將酶復(fù)合物用稀釋液稀釋后,加血清及陰性、陽性對(duì)照,還有就是質(zhì)控品(這是嚴(yán)格的要求,它的范圍必須在質(zhì)控范圍內(nèi))。經(jīng)過一個(gè)小時(shí)的孵育,然后洗板,加底物,半個(gè)小時(shí)避光反應(yīng)后加終止液即完成反應(yīng)部分,然后就是讀數(shù)。由數(shù)值來判斷結(jié)果的陰性或陽性。檢測方法雙抗體夾心法雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:雙抗體夾心法一、將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。二、加受
大鼠ELISA試劑盒處理和保存原則有以下幾點(diǎn)2018/03/07
大鼠ELISA試劑盒處理和保存原則有以下幾點(diǎn):1、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長,其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。3、冰凍保存的
人ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)簡介2018/03/05
人ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)簡介收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測,對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的標(biāo)本,及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,請(qǐng)?jiān)炷H〔暮?,將?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,所以避免反復(fù)凍融。1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)
小鼠ELISA試劑盒常用知識(shí)安全性2018/03/02
小鼠ELISA試劑盒常用知識(shí)安全性:1.避免直接接觸終止液和底物A、B,一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。2.實(shí)難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作步驟:1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔
大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)問答匯總2018/02/28
大鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù)問答匯總1.血清保存:建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而,若存放于4℃時(shí),請(qǐng)勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。2.解凍血清的方法:建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一
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